8.3 化妆品中联苯乙烯二苯基二磺酸二钠等5种原料的检验方法 CP柱推荐

CP C18 MGII 分析结果

按照检验方法，使用色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII S5, 4.6 mm×250 mm对标准品进行分析，结果如图1所示。5种标准物质的理论塔板数为6275~168626，分离度均达到基线分离要求。

注：峰上标由下至上分别为分离度、保留时间、理论塔板数

图1 C18 MGII色谱柱分析结果-标准溶液

【色谱条件】

色谱柱：CP C18 MGII S5, 4.6×250

流动相：A：25 mmol/L乙酸铵溶液，用氨水调节pH至8.0，过滤    B：乙腈

            B%  30%(0 min)-30%(10 min)-90%(16 min)-90%(20 min)-98%(20.1 min)-98%(38 min)-30%(40 min)-30%(45 min)

流   速：1.0 mL/min

柱   温：35 °C

进样量：10 μL

检   测：激发波长，360；发射波长，440

样   品：1.4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐(500 ng/mL)，2.联苯乙烯二苯基二磺酸二钠(50 ng/mL)，3.二乙氨基甲基香豆素(50 ng/mL)，4.二苯并噁唑基萘(50 ng/mL)，5.双(叔丁基苯并噁唑基)噻吩(50 ng/mL)，(溶剂为70% 25 mmol/L乙酸铵溶液(用氨水调节pH至8.0) + 30% 乙腈)

1.2.1 标准曲线的绘制

用N,N-二甲基甲酰胺溶解后初始比例流动相最终稀释配制成标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线，如表1所示。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数r的范围为0.9953~0.9999。

表1 线性范围、标曲、相关系数

(点击查看大图)

1.2.2 样品测试

按照标准方法分别对水剂、乳剂、霜剂样品进行测试，测试结果如图2所示，样品均未达到标准中要求的最低定量浓度。同时对水剂进行加标测试，回收率为82%~119%。

图2 水、乳、霜样品分析图

1.3.1 标准品

4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐出峰前后均有杂质峰干扰，我们尝试了降低初始有机相比例到27%（30%→27%）来提高目标峰和杂质峰之间的分离度，测试结果如图3所示。

图3 方法优化前后对比图

1.3.2 空白干扰

在进行空白溶剂和标准品测试时，发现空白溶剂峰对目标峰有干扰，测试结果如图4所示

图4 空白干扰

为改善梯度空白的影响，我们尝试在泵后连接鬼峰捕集柱，测试结果如图5所示，加入鬼峰捕集柱（Ghost-Cleaner I）后干扰峰明显减少。

图5空白干扰

CP C18 BB 分析结果

由于检验方法中流动相pH相对较高，因此我们也尝试用耐碱型CAPCELL PAK C18 BB S5, 4.6 mm×250 mm对标准品进行分析，5种目标物均能很好分离，但是目标峰4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐和前后杂质之间未达到基线分离，我们尝试降低有机相的初始比例到27%进行测试，测试结果如图6-7所示。目标峰4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐和前后杂质分离度均在3.0以上。

注：峰上标为分离度

图6 方法优化前后对比结果

注：峰上标由下至上分别为分离度、保留时间、理论塔板数

图7 方法优化后标准品测试结果

【色谱条件】

色谱柱：CP C18 BB S5, 4.6×250

流动相：A：25 mmol/L乙酸铵溶液，用氨水调节pH至8.0，过滤    B：乙腈

            B%  27%(0 min)-27%(10 min)-90%(16 min)-90%(20 min)-98%(20.1 min)-98%(38 min)-27%(40 min)-27%(45 min)

流   速：1.0 mL/min

柱   温：35 °C

进样量：10 μL

检   测：激发波长，360；发射波长，440

样   品：1.4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐(500 ng/mL)，2.联苯乙烯二苯基二磺酸二钠(50 ng/mL)，3.二乙氨基甲基香豆素(50 ng/mL)，4.二苯并噁唑基萘(50 ng/mL)，5.双(叔丁基苯并噁唑基)噻吩(50 ng/mL)，(溶剂为70% 25 mmol/L乙酸铵溶液(用氨水调节pH至8.0) + 30% 乙腈)

2.2.1标准曲线的绘制

表2 线性范围、标曲、相关系数

(点击查看大图)

2.2.2 样品测试

按照标准方法分别对水剂、乳剂、霜剂样品进行测试，测试结果如图8所示，样品均未达到标准中要求的最低定量浓度。同时对水剂进行加标测试，回收率为83%~117%。

图8水、乳、霜样品分析图