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肉类中三聚氰胺的检测方案

2011-06-01 08:35

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资料摘要:

酶联免疫吸附测定法定量测定三聚氰胺残留。利用萃取液通过均质及振荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定。先将三聚氰胺酶标记物,样品萃取物及标准加入到已经包被有三聚氰胺抗体的微孔中开始反应。在30分钟的孵育过程中,样品萃取物中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争结合微孔中的三聚氰胺抗体,孵育30分钟后洗掉小孔中所有没有结合的三聚氰胺及三聚氰胺酶标记物。再用去离子水清洗结束后,每孔中加入清澈的底物溶液,结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育30分钟后停止此反应,根据各孔颜色深浅进行数据读取。依据标准的颜色得出样品中三聚氰胺的的浓度值。 需要准备的材料: 1、蒸馏水或去离子水 2、可吸取50ul和100ul的移液器及吸头 3、4000转离心机 4、吸水纸或相当的吸水材料 5、450nm的酶标仪 6、计时器 7、20mM PBS:需自行配制 8、清洗液:需自行配制 试剂配制: 1、20mM PBS: 0.62g NaH2PO4•2H2O+5.73g Na2HPO4•12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml 2、清 洗 液: 0.62g NaH2PO4•2H2O+5.73g Na2HPO4•12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20 样品的前处理: 肉类(稀释倍数:5) 1、 称1g肉样,加入5ml的10%甲醇/20Mmpbs,震荡2min; 2、 4000转离心5min; 3、 取2ml 上清液加入2ml异辛烷:氯仿(2:3),混匀; v4、 4000转离心5min,取上层150ul测定。[/b] 测定过程: 1、将所有试剂及样品回升至室温20-28℃,但不要放置超过24小时; 2、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条固定在微孔板架上,未使用的孔条与干燥剂一同放入密封袋中保存; 3、吸取150ul标准品、样品到对应微孔中,必须保证每种溶液使用干净的吸头吸取,避免交叉污染。加入 50ul三聚氰胺酶标记物到每个小孔中; 4、轻轻摇板60秒,20-28摄氏度下孵育30分钟; 5、将微孔中的溶液倒入水槽中,用清洗液完全充满微孔,震荡后倒掉,重复三次,总共四次洗板; 6、最后一次清洗完后,倒掉孔中溶液,然后翻转微孔板在吸水纸上拍干; 7、每个微孔中加入100ul底物溶液; 8、20-28摄氏度下,孵育30分钟; 9、每个微孔中加入100ul停止液; 10、450nm下读板。

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实验过程中常会遇到采用有机溶剂或酸碱性气体,不论是HPLC 移动相的溶剂纯化、消毒灭菌常用的漂白水、有机溶剂最常用的丙酮...等,如采用一般的真空帮浦来抽滤这类有机溶剂和具有腐蚀性的气体,很容易就会损坏真空帮浦。但耐腐蚀帮浦一台的要价都不便宜,因此在价格考虑下PTFE镀膜帮浦就是一个很好的选择。顾名思义,PTFE镀膜帮浦其与气体接触之隔膜及腔体皆镀膜 PTFE (如下图所示),气片也采用不锈钢#316制作,除可耐大部分溶剂,还能有效抵抗腐蚀性气体,让帮浦多了一层的保护。这样的设计大幅降低了材料成本,但又具有一定的抗有机和腐蚀气体的效果,是一种CP值非常高的优质帮浦设计。

1.包括数量多溶剂的事物请首先在烘箱或则干燥箱中去掉除掉大多的溶剂后,再运用真空泵抽真空。 2.水会腐蚀真空泵,所以含水的事物严禁运用真空泵抽真空。 3.扫除净尽调速器内腔、喷真空泵内腔的防锈油,参加规定牌号的润滑油油。 4.燃油管路里的防锈油也应在运用前扫除净尽,将燃油接入喷真空泵管路,不停地转动喷真空泵凸滑轮,直到出油阀紧座喷出干净的燃截止。 5.燃油选用合理。 6.务必运用标号合宜的燃油。 7..运用的燃油务必整洁,不能包括不论什么杂质和养分。 8.按准确的顺着次序运用抽气机,以避免倒吸现象发生。 9.运用完真空烘箱或者高温干燥箱后,必须做好保洁办公,擦整洁真空烘箱或者高温干燥箱的玻璃窗。 10.擦净外表防锈油。

实验室用的无油真空泵大致分为隔膜式真空泵和活塞式真空泵,隔膜式真空泵的工作原理是在密封腔体内电机带动轴承推杆拉动隔膜,通过隔膜的鼓动产生气流变换,密封腔体有两个开口,一个进气口一个出气口,如果真空泵的真空度不够,一般的情况就是气路出现了问题,气路的问题一般都集中在隔膜和腔体密封圈上面,如果密封圈没有损坏,那就是隔膜的问题,因为普通隔膜真空泵的隔膜都是橡胶材质的,抽气过程中容易接触到一些腐蚀性的气体,而且时间久了之后,橡胶隔膜本身也容易老化,换上新的隔膜之后,真空度都会恢复, 活塞式真空泵的工作原理和隔膜式真空泵的差不多,也是在密封腔体内电机轴承拉动活塞推杆(类是注射器)产生气流变换,如果真空度下降,一般情况是腔体密封圈不严密,活塞推杆有磨损等,以台湾洛科仪器的rocker系列活塞式真空泵为例,容易出现气路堵塞的地方是 1.rocker系列的真空泵都自带缓冲杯,缓冲杯的滤网时间长了之后容易堵塞,可以更换以解决堵塞。 2.rocker系列真空泵带有液体逆止阀,防止液体进入泵体,起到保护电机的作用,逆止阀是塑料材质,如果真空泵受到撞击,或是受有机溶剂腐蚀,逆止阀都有可能断裂,堵塞气路,更换逆止阀解决。 3.rocker系列真空泵安装有消音器,充分降低泵的噪音,因为有的用户抽滤的样品比较容易结晶,所以消音器有可能也会发生堵塞,这个时候消音器也需要更换,以恢复真空度。 rocker真空泵的设计精密,充分保护真空泵主体,出现真空度下降的情况,用户只需要更换耗材,就可以保证机器的使用寿命大大延长。 综上所述,实验室用的无油真空泵,不需要特别的保养,但使用过程有需要注意的事项: 1.不能让水进入真空泵内部,rocker系列真空泵有防护功能(专利设计)。 2.普通真空泵,不能抽滤有机溶剂和有腐蚀性的样品,必须要用带有防腐蚀字样的真空泵才能用。 台湾洛科仪器股份有限公司北京办事处愿和您一起学习和探讨真空泵的防护和维修。

实验室使用的真空泵该如何选择是困扰很多使用人员的问题,很多使用人员再购买会真空泵之后,会遇到真空表观察真空度不够(吸力不够)、抽速太慢、在相对密闭的房间使用噪音过大、或者泵使用时有油雾没有办法正常使用等等各种问题。而这些问题往往都和选型有较大的关系。

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