鼎昊源全自动转印仪Blotstainer在蛋白免疫印迹上的应用

鼎昊源

2013/09/27 15:48

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由于蛋白免疫印迹的步骤操作较为繁琐，要求精度较高，实验中一步出现操作失误就会导致整个实验的白白浪费。并且一抗二抗试剂也比较宝贵，所以采用仪器操作可以降低实验的风险，保证实验的顺利进行。

鼎昊源推出的全自动转印仪就是替代人工操作的好选择，它配有自动移液系统，温控系统和孵育摇床。自动移液系统包括10个管路，相互独立，避免交叉感染。温控系统范围在4℃到80℃之间，满足蛋白免疫印迹，核酸分子杂交实验的孵育温度。整套系统根据客户自定义的操作程序自动完成。为了方便客户使用，全自动转印仪出厂预设了免疫印迹，核酸杂交，原位杂交和免疫组化的自动程序。
内置标准蛋白免疫印迹程序如下：

Step	Task	Time	Action	Buffer	Memo	Execute x times
1	Set temp		Off		Temperature to RT
2	Incubate	00:05	Wash	PBST	Wash membrane	X2
3	Set temp		ON, 10℃		Temperature 10℃
4	Incubate	01:00	Blocking	Block solution	Blocking
5	Incubate	02:00	AB-step	Primary antibody	Primary antibody
6	Incubate	00:05	Wash	PBST	Wash membrane	X4
7	Incubate	00:30	Sec. antibody	Second antibody	Second antibody
8	Set temp		Off		Temperature to RT
9	Wash	00:05	PBST wash	PBST	PBST wash	X10
10	Ready to stain in dark room

设置温度到室温
用0.01M PBS洗膜，5min ×2次。
设置温度到10℃

4、加入包被液，平稳摇动，1hr。
5、加入一抗（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释，液体必须覆盖膜的全部），2hr。
6、弃一抗，用0.01M PBS分别洗膜，5min×4次。
7、加入二抗（辣根过氧化物酶偶联）（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释），0.5hr。
8、设置温度到室温
9、弃二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×10次。
10、加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。
全自动转印仪在上述程序中可以实现在蛋白免疫印迹孵育过程中的温控，更加保证一抗二抗的活性，这是一般手工操作所达不到的。
整套程序5个小时内自动完成，不需要人工换液和取出薄膜。当然上述程序可以按照用户实际需要来调整全自动转印仪的程序。

关键词：蛋白免疫印迹，全自动转印仪