上海瑞鑫非洲猪瘟快速检测方案HYG-16YB

一、样品的采集

采样过程中样本不得交叉污染，采样及样品前处理过程中须戴一次性手套。采集发病动物或同群动物的口腔液、全血、血清、病料组织、饺子、（如脾脏、扁桃体、淋巴结、肾脏和骨髓，样品可研磨充分后离心取上清、也可用拭子充分擦拭脏器表面或蘸取匀浆液）等。采集的样品如不及时使用应在冷藏（-20°C）和密封状态下运输到相关实验室后，-80℃冷冻保存。

二、样品前处理与核算提取

参照相关标准采集样品，短期保存于-20℃，长期保存请放置于-80℃。

    1. 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血 2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温放置 30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm 离心 5min，吸取上层血清，转移至 1.5mL 灭菌离心管中备用。

    2. 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血 2mL，注入含 EDTA2Na(乙二胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合 5-10 次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min 后即可分离出血浆，转移至 1.5mL 灭菌离心管中备用。

    3. 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入 500 μL PBS 或生理盐水，剧烈振荡 30s，转移至1.5mL 灭菌离心管中备用。

    4.病灶组织样品：称取组织约 0.1g 于研磨器或组织匀浆器中研磨(置于冰上或加入液氮)，再加 1mL 生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至 1.5mL 灭菌离心管中备用。

    5、饺子：取饺子馅料约 0.1g，于研磨器或组织匀浆器中研磨(置于冰上或加入液氮)，再加 1mL 生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至 1.5mL 灭菌离心管中备用。

动物总 DNA/RNA 提取试剂盒适合于快速从动物组织、血液、分泌物、排泄物等动物样

品中提取高纯度的包含病毒、细菌及寄生虫等生物的总核酸。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，

提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，获得的核酸可直接用于 PCR/RT-PCR、Sorthern 杂交/Northern 杂交、以及 LAMP/RT-LAMP 等系列下游实验。

三、样品检测

本试剂盒适用于动物病料、鼻咽拭子、血液等样品中非洲猪瘟病毒的特异检测，适用于非洲猪瘟病毒（ASFV）的辅助诊断、监测及流行病学调查，检测结果仅供临床参考， 检出限为 10 ² copies/μl。

四、结果判定

4.1 质控标准

4.1.1阴性对照无Ct值并且无扩增曲线。

4.1.2 阳性对照的Ct值应小于等于45，并出现典型的扩增曲线。

4.1.3 如阴性和阳性对照不满足以上条件，此次实验视为无效。

4.2 结果判定

4.2.1 阴性：无Ct值，且无特征性扩增曲线，表明样品为阴性。

4.2.2阳性：Ct值≤60，且出现典型的扩增曲线，表示样品为阳性。

五、检测速度

检测时间总检测耗时45-60分钟。

五、设备和耗材