奶粉中亚硝酸盐检测方案

　　继恒曝出乳品原料肉毒杆菌污染之后，又一家新西兰乳品企业产品出问题。新西兰当地时间 8 月 19 日，中国国家质检总局、新西兰初级产业部(MPI)以及新西兰乳品企业 Westland 均公布，Westland公司生产的 390 公斤乳铁蛋白检测出硝酸盐含量超标，问题产品全部出口中国。

　　食物中的亚硝酸盐主要指亚硝酸钠。亚硝酸盐能使血液中正常携氧的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，因而失去携氧能力而引起组织缺氧。有文献称其半致死量为 22 mg/kg。根据《GB 2762-2012 食品安全国家标准 食品中污染物限量》的要求，婴幼儿乳基食品中亚硝酸盐(以 NaNO2 计)不得超过 2.0 mg/kg。RephiLe 根据《GB 5009.33-2010 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定》，推出奶粉中亚硝酸盐检测方案。

　　一、实验原理

　　将奶粉试样经沉淀蛋白质、除去脂肪，经过提取和净化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，阴离子交换柱分离，电导检测器检测。以保留时间定性，外标法定量。

　　二、仪器和试剂

　　ICS-2000离子色谱仪(Dionex)， AS11-HC 阴离子色谱柱(Dionex)，PURIST UV 超纯水系统(RephiLe)。

　　RephiQuik Nylon 针头滤器(RephiLe)。色谱试剂均为色谱纯。

　　三、试验方法

　　1、试样预处理

　　将试样装入能够容纳 2 倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化。

　　2、提取

　　称取试样 2.5 g(精确至0.01 g)，置于100 ml 容量瓶中，加超纯水 80 ml，摇匀，超声30 min，加入 3 %乙酸溶液 2 ml，于 4 ℃ 放置 20 min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤，取上清液备用。取上述备用的上清液约 15 ml，通过 0.22 μm 水性滤膜针头滤器、C18 柱，弃去前面 3 ml(如果氯离子大于 100 mg/L，则需要依次通过针头滤器、C18 柱、Ag 柱和 Na 柱，弃去前面 7 ml)，收集后面洗脱液待测。

　　3、参考色谱条件

　　3.1 色谱柱：AS11-HC 阴离子色谱柱。

　　3.2 淋洗液：氢氧化钾溶液，浓度为 5 mmol/L～50 mmol/L;洗脱梯度为5 mmol/L 33min， 50 mmol/L 5min，5 mmol/L 5 min;流速1.3 ml/min。

　　3.3 抑制器：ASRS 300。

　　3.4 检测器：电导检测器，检测池温度 30 ℃。

　　3.5 进样体积：50 μL。

　　4、测定

　　4.1 标准曲线

　　取亚硝酸盐标准液，加水稀释，制成系列标准溶液，含亚硝酸根离子浓度为 0.00 mg/L、0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.06 mg/L、0.08 mg/L、0.10 mg/L、0.15 mg/L、0.20 mg/L 的标准溶液，从低到高浓度依次进样。得到上述各浓度标准溶液的色谱图。以亚硝酸根离子的浓度(mg/L)为横坐标，以峰高(μS)或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或计算线性回归方程。

　　4.2 样品测定

　　分别吸取空白和试样溶液 50 μL，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。根据保留时间定性，分别测量空白和样品的峰高(μS)或峰面积。

　　5、分析结果的表述

　　试样中亚硝酸盐(以 NO2- 计)含量按式(1)计算：

　　X=
 

　　式中：

　　X ——试样中亚硝酸根离子的含量，单位 mg/kg;

　　c——测定用试样溶液中的亚硝酸根离子浓度，单位 mg/L;

　　c0——试剂空白液中亚硝酸根离子的浓度，单位 mg/L;

　　V——试样溶液体积，单位 ml;

　　f——试样溶液稀释倍数;

　　m——试样取样量，单位 g。

　　说明：试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数 1.5，即得亚硝酸盐(按亚硝酸钠计)含量;

　　以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。

　　6、精密度

　　在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值差不得超过算术平均值的 10 %。

　　本方法中亚硝酸盐检出限分别为 0.2 mg/kg。

　　在离子色谱检测中，水中的各种污染物，颗粒杂质，离子，有机物和细菌对仪器使用寿命及检测结果有着非常大的影响。首先，颗粒物会堵塞泵和管路，导致设备或色谱柱的损坏;其次，水中离子杂质会对正常分析产生很大程度的干扰，从而加大实验者工作的难度;有机物的存在会降低色谱柱寿命并且干扰测定和分析;而细菌则会持续地释放离子和小分子有机物，另一方面细菌也可视为颗粒物，对仪器造成破坏。

　　为达到满意的实验效果，确保分析的准确性，RephiLe 特别推荐各研究工作人员使用PURIST UV 超纯水系统，该超纯水仪是一款特别适合为仪器分析提供超纯水的产品，精致小巧，使用简便。PURIST UV 超纯水仪采用超大容量的四管纯化柱，同时采用内部超纯水定时循环系统，配合双波长紫外灯可以有效去除水中的离子杂质，控制超纯水系统中的有机物及微生物含量。产水电阻率可达 18.2 MΩ·cm。终端采用 0.22 μm 的过滤器，可以有效去除颗粒和细菌。 同时，RephiLe还可为客户提供一套全方位的纯水，超纯水使用解决方案 - Direct-Pure EDI + PURIST UV 组合型纯水处理系统。该组合套装可以同时提供二级纯水及超纯水，以满足用户在仪器分析中不同情况下的用水需求。Direct-Pure EDI 二级纯水系统，使用西门子公司的EDI模块，水质稳定可靠，其产水作为 PURIST UV 的进水，可最大限度发挥PURIST的功效，保证用户在使用中用水无忧。另外，RephiLe 还可提供 Direct-Pure UP 超纯水一体机，该纯水仪以自来水为进水，同时制备反渗透 RO 水和的超纯水，一机两水，给客户更多的选择。

　　关于 RephiLe:

　　RephiLe 是一家提供水纯化和实验室分离纯化产品的专业制造商和供应商，在实验室纯水及过滤领域具有深厚的技术背景。 RephiLe 可提供以下三大类产品：

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