牛奶中青霉素酶活性检测试剂盒

牛奶中青霉素酶活性检测试剂盒

试剂盒型号：PA00800 温育温度：40℃ 

简介： 

        牛奶中青霉素酶活性检测试剂盒采用间接竞争法，利用青霉素酶可分解牛奶样品中的β-内酰胺类抗生素的原理，通过配体-受体识别法快速测定与青霉素酶反应后残留的青霉素G的含量，从而检测牛奶样品中残留的青霉素酶。 

        本试剂盒一个小时内便可检测到牛奶样品中残留的青霉素酶，在40℃±3℃温育45分钟后，极低浓度的青霉素酶便可以催化水解4ppb的青霉素G。 

操作要点： 

􀁺 吸取400μl牛奶样品加到含有一定浓度青霉素G的玻璃试剂瓶中，混合均匀
􀁺 40℃±3℃温育45分钟
􀁺 吸取200μl温育后牛奶样品加到装有冻干试剂的微孔中，混合均匀
􀁺 40℃±3℃温育3分钟
􀁺 测试条插入到微孔中
􀁺 40℃±3℃下继续温育3分钟
􀁺 判读结果

反应机理： 

        青霉素酶可催化分解牛奶样品中的β-内酰胺类抗生素，破坏青霉素β-内酰胺环产生青霉噻唑酸，从而使其失去生物学活性。该试剂盒反应机理是基于极低浓度的青霉素酶便可催化水解一定浓度的青霉素G。

整个检测过程分为三个步骤，需下面三个要素： 

1. 将待测牛奶样品加入到含有一定浓度青霉素G的玻璃试剂瓶中于40℃±3℃温育45分钟。
2. 在第二个40℃±3℃温育3分钟过程中，未被分解的青霉素G会与金颗粒标记的青霉素受体结合。
3. 在第三个40℃±3℃温育3分钟过程中，在测试条的检测线（T线）处可以检测到剩余的青霉素受体。 

        在第一次温育的45分钟时间里，牛奶样品中掺有的青霉素酶会分解玻璃试剂瓶中的青霉素G。所以，后续反应中将没有青霉素G可用来抑制青霉素受体与测试条俘获带的结合，从而测试条的检测线（T线）区会出现红色条带，而控制线（C线）区会出现浅红色的条带。 

        如果牛奶样品中没有掺杂青霉素酶，或者青霉素酶含量少于可检测到的范围，玻璃瓶中的青霉素G会与青霉素受体结合，从而将会抑制青霉素受体与俘获带的结合，所以在测试条上只有控制线（C线）区一个条带显色。 

两条线：牛奶样品中掺有青霉素酶 一条线：牛奶样品中不含青霉素酶 

试剂盒组成： 

        青霉素酶活性检测试剂盒所含有的试剂可供48次检测
􀂋 48瓶含有一定浓度青霉素G的玻璃试剂瓶
􀂋 每8孔微孔试剂+8条测试条放置于一个试剂筒中，每盒6筒，共48次检测
􀂋 微量移液器配套吸头96支
􀂋 1瓶阴性质控（不含抗生素和酶的原奶干粉），浅绿色
􀂋 1份说明书 

注意事项： 

1. 试剂盒应保存在2-8℃的阴凉干燥处。使用前，将试剂盒从冰箱取出，恢复至室温后开始使用。
2. 阴性质控需要用1ml纯净水还原，混合均匀。阴性质控加纯净水还原后需在-20℃保存，避免反复冻融。
3. 本试剂盒不能用于检测酸奶。
4. 首先要确保待测牛奶样品是抗生素检测结果阴性（建议使用Twinsensor BT00660+ 抗生素检测试剂盒进行检测）。
5. 所有温育温度均为40℃±3℃，第一次温育需要45分钟，后续两次温育都是3分钟。可使用“Block Heat”多功能温育器（型号：HK-30），不建议使用其他类型的温育器。
6. 所有温育结束后，15分钟内读取结果。如超过15分钟检测结果视为无效。
7. 测试条干燥后颜色深度会增加。
8. 如发现阳性检测结果，需要进行确证。
9. 用完一筒试剂再打开另外一筒，以免受潮失效。

操作步骤 

此方法可用于大批量检测，也可用于单一测试。
1. 洗干净手，从冰箱中取出试剂盒。
2. 调节温育器温度至40℃。
3. 当试剂盒温度达到室温时，打开试剂筒准备开始实验，同时认真阅读操作说明。
第一步
4. 取出所需数量的玻璃试剂瓶并去掉瓶盖，分别吸取400μl（2*200μl）经检测无抗生素残留的待测牛奶样品于相应的玻璃试剂瓶中，盖上玻璃试剂瓶盖，温和摇动5次使瓶底冻干试剂完全溶解。
5. 将所有加有牛奶样品的玻璃试剂瓶放置于温育器上40℃±3℃温育45分钟。
第二步
6. 打开一个试剂筒取出所需数量的微孔，等待第一次温育结束。
注意：如果一次用不完8个微孔，可用微孔盖盖住剩余微孔，并立即放回装有干燥剂的试剂筒中，密封保存。
7. 当第一次温育结束后，换新吸头从玻璃试剂瓶中吸取200μl牛奶样品于微孔 中。
8. 用吸头抽吸牛奶样品5次，保证其与微孔中试剂充分混合均匀，混合液颜色为粉色。
9. 将微孔置于温度设置为40℃的温育器上。
注意：当微孔中试剂和牛奶接触后，反应便开始进行，请尽可能快速操作，将微孔置于温育器后请立即按下START（R/S）按键开始计时。
10. 按下温育器START（R/S）按键，开始第二次3分钟温育。
注意：在第二次温育过程中，微孔中受体可检测到牛奶样品中是否残留抗生素，温育时间为3分钟。