黄曲霉毒素B1酶联免疫检测试剂盒

 黄曲霉毒素 B1(AFB1)是目前已知的化学物质中致癌性最强的一种,国家质检总局规定黄曲霉毒素B1 是大部分食品的必检项目之一.

本测试盒利用固相酶联免疫吸附（ELISA）原理，通过抗黄曲霉毒素B1抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以及酶的催化显色反应相结合来检测黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1），适用于各类食品、原粮及其制品、饲料及相关原料中AFB1的定量检测，特点是灵敏度高，特异性好，操作简便，结果易判读。

• 测试盒组成

附：样品稀释液（A试剂）的配制方法：

（1）先配制PBS缓冲液（pH7.4）：3.0g Na2HPO4·12H2O, 0.25g Na2HPO4·2H2O, 8.7g NaCl定容至1000mL。可根据实验需要按比例配制。

（2）品稀释液（A试剂）：取100mL甲醇，加入900mL PBS缓冲液（pH7.4），混匀即得样品稀释液。可根据实验需按比例配制。

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• 实验准备

• 样品处理：详见“样品处理方法”。

• 试剂的配制

（1）每瓶C试剂（酶标抗原）中准确加入1.5mL D试剂（酶标抗原稀释液），充分溶解，配成实验用酶标抗原溶液，2～8℃保存。

（2）取适量E试剂（浓缩洗涤液）用蒸馏水稀释20倍待用。

例如：取3mL E试剂（浓缩洗涤液），加57mL蒸馏水，混匀后制成实验用洗涤液，足够24孔使用。

• 实验步骤

• 试剂平衡：将测试盒于室温中放置15min以上，平衡至室温。

2、小孔编号：根据实验需要截取相应孔数放置反应板框架上。设定1号孔为仪器调零孔，2—7号孔为AFB1标准对照孔，其余孔为样品孔。

3、洗涤：每孔加入250μL左右洗涤液，洗涤液不得溢出，放置1min后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗板一次。

4、反应组成：按下列步骤所示（见表1），依次加入配制好的溶液及待测样液。

第一步：1号孔加入50μL A试剂（样品稀释液）,2—7号孔分别加入系列的B试剂（AFB1标准溶液：0，0.1，0.25，0.5，1，2ng/mL）50μL，其余孔加入相应待测样液。

   第二步：1号孔加入50μL D试剂（酶标抗原稀释液），其余各孔均加入50μL C试剂（酶标抗原溶液）。

   第三步：轻轻地振摇，使各孔中的反应物混匀。

表1  反应物组成

实验室基本配置

1、酶标仪（内置450nm滤光片）或黄曲霉毒素B1专用测定仪

2、50μL微量移液器及配套吸头

3、恒温培养箱（0℃～50℃）

4、冰箱（4℃～8℃）

5、感量0.01g的天平

6、玻璃器皿：锥形瓶，烧杯，分液漏斗，蒸发皿，量筒，具塞试管，滴管，移液管等

7、小型粉碎机或碾钵

8、其他：滤纸，吸水纸等

主要技术指标及参数

测试盒分三种规格：24孔、48孔、96孔。反应孔可拆卸，可测单份样品，亦可测多份样品，定量测定每次需要6个标准孔，若限量测定只需要三个标准孔。

测试盒的主要技术指标及参数：

1、最低检出浓度：0.1ng/mL;

2、回收率：87%～95%;

3、交叉反应系数0-0.21;

4、检测范围：0.1～2ng/mL;

5、重复性：条内CV%<10%,条间CV%<15%