人白介素4(IL-4)ELISA试剂盒说明书

人白介素4 (IL-4)酶联免疫分析 试剂盒说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：1.6 ng/ml - 100 ng/ml 最低检测限：0.4 ng/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-4，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-4含量。 说明： 试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 实验原理： 　　　用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-4抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-4抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-4呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 标准品的稀释原则： 2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释100 ng/ml, 50 ng/ml, 25 ng/ml, 12.5 ng/ml 6.2 ng/ml, 3.2 ng/ml, 1.6 ng/ml.，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）100 ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则： 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则： 临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 操作步骤： 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。