大鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒说明书
2013-08-13 08:43
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资料摘要:
大鼠血红素氧合酶1(HO-1)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中血红素氧合酶1(HO-1)的含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠血红素氧合酶1(HO-1)水平。用纯化的大鼠血红素氧合酶1(HO-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血红素氧合酶1(HO-1),再与HRP标记的血红素氧合酶1(HO-1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血红素氧合酶1(HO-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠血红素氧合酶1(HO-1)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存
说明书 1份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1个 1个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品:1800 ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 23ml×1瓶 2-8℃保存
操作步骤
标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1200ng/L,800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围:
62.5 pg/ml-4000 pg/ml
灵敏度:
15.6 pg/ml
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月
下载本篇资料:
大鼠血红素氧合酶11试剂盒说明书.doc
31KB
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