牛羊口蹄疫病毒O型抗体检测

步骤

猪口蹄疫病毒O 型抗体检测

文鳐：125ul/300ul移液器

牛羊口蹄疫病毒O型抗体检测

文鳐：125ul/300ul移液器

1

洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×(2 号液)按1:10 稀释（例如，取100mL洗涤液10×，加900mL 蒸馏水或去离子水混合），充分混匀即为工作浓度洗涤液。

手动：洗涤液配制

洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×(2 号液)按1:10 稀释（例如，取100mL洗涤液10×，加900mL 蒸馏水或去离子水混合），充分混匀即为工作浓度洗涤液。

手动：洗涤液配制

2

加对照品：阴性对照2 孔，每孔先加样品稀释液50μL，再加入50μL 阴性对照品；阳性对照2 孔，每孔先加样品稀释液50μL，再加入50μL 阳性对照品。

①加对照物阴性对照品：2孔，样品稀释液50ul、50ul阴性对照品阳性对照品：2孔，样品稀释液50ul、50ul阳性对照品

加对照品：阴性对照2 孔，每孔先加样品稀释液50μL，再加入50μL 阴性对照品；阳性对照2 孔，每孔先加样品稀释液50μL，再加入50μL 阳性对照品。

①加对照物阴性对照品：2孔，样品稀释液50ul、50ul阴性对照品阳性对照品：2孔，样品稀释液50ul、50ul阳性对照品

3

③加待检样品：每孔先加样品稀释液50μL，再加入50μL 待检样品。④盖好封板膜，37℃避光反应60 分钟。

②加待检样品稀释液50ul，50ul待检样品手动：盖好封板膜，37℃避光反应60 分钟。

③加待检样品：每孔先加样品稀释液50μL，再加入50μL 待检样品。④盖好封板膜，37℃避光反应60 分钟。

②加待检样品稀释液50ul，50ul待检样品手动：盖好封板膜，37℃避光反应60 分钟。

4⑤

洗板：甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3 次，每次均需停留1 分钟；最后一次甩净，拍干。

手动：洗板、拍干

洗板：甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3 次，每次均需停留1 分钟；最后一次甩净，拍干。

手动：洗板、拍干

5⑥

加酶反应：每孔加酶标结合物（1 号液）100μL，盖好封板膜，37℃避光反应60 分钟。甩去孔内液体，如上洗板，拍干。

③加酶反应：每孔加酶标结合物（1号液）100ul手动：盖好封板膜，37℃避光反应60分钟。洗板拍干

加酶反应：每孔加酶标结合物（1 号液）100μL，盖好封板膜，37℃避光反应60 分钟。甩去孔内液体，如上洗板，拍干。

③加酶反应：每孔加酶标结合物（1号液）100ul手动：盖好封板膜，37℃避光反应60分钟。洗板拍干

6⑦

显色反应：按所需用量，临用前取等体积底物液（3号液）和显色液（4 号液）充分混匀，每孔加100μL，盖好封板膜，37℃避光反应15 分钟。

手动：临用前取等体积底物液（3 号液）和显色液（4 号液）充分混匀④显色反应：每孔加100ul手动：盖好封板膜，37℃避光反应15 分钟

显色反应：按所需用量，临用前取等体积底物液（3号液）和显色液（4 号液）充分混匀，每孔加100μL，盖好封板膜，37℃避光反应15 分钟。

手动：临用前取等体积底物液（3 号液）和显色液（4 号液）充分混匀④显色反应：每孔加100ul手动：盖好封板膜，37℃避光反应15 分钟

7⑧

终止反应： 加终止液（6 号液）50μL，用酶标仪双波长（450nm 作为主波长，630nm作为参比波长）读取OD 值。

⑤终止反应：加终止液（6 号液）50μL手动：用酶标仪双波长（450nm 作为主波长，630nm作为参比波长）读取OD 值。

终止反应： 加终止液（6 号液）50μL，用酶标仪双波长（450nm 作为主波长，630nm作为参比波长）读取OD 值。

⑤终止反应：加终止液（6 号液）50μL手动：用酶标仪双波长（450nm 作为主波长，630nm作为参比波长）读取OD 值。

【参考值】1. 阻断率(PI)的计算方法：PI=（阴性对照平均OD值-样本或阳性对照OD值）/阴性对照平均OD值×100%2. 有效性判定：阴性对照孔OD 值≥0.5（若小于0.5 则实验无效）；阳性对照孔PI≥60%（若小于60％则实验无效）。

【参考值】1. 阻断率(PI)的计算方法：PI=（阴性对照平均OD值-样本或阳性对照OD值）/阴性对照平均OD值×100%2. 有效性判定：阴性对照孔OD 值≥0.5（若小于0.5 则实验无效）；阳性对照孔PI≥60%（若小于60％则实验无效）。

【检验结果的解释】样品PI≥50%，判为口蹄疫病毒抗体阳性；样品PI＜50%，判为口蹄疫病毒抗体阴性。

【检验结果的解释】样品PI≥50%，判为口蹄疫病毒抗体阳性；样品PI＜50%，判为口蹄疫病毒抗体阴性。