中药材中黄曲霉毒素检测方案—HPLC（药典方法）

2012-09-13 11:36

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资料摘要：

黄曲霉毒素危害：黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于药材、谷物、坚果、棉籽以及动物饲料相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。国家重视程度：近年来，各级食品药品监管部门不断加大中药生产流通监管力度，努力保持中药质量总体稳定。国家食品药品监督管理局关于规范中药生产经营秩序严厉查处违法违规行为的通知（国食药监安[2012]187号中，要求加强对重金属及有害元素、农药残留、黄曲霉毒素等安全性指标的检测和控制，切实保证中药材质量和安全，另要求企业具备与生产品种相适应的检验设备和能力，严把质量检验关。《国家药品安全“十二五”规划》，规划中明确提出“开展药品快速检验技术研究，搭建检验技术共享平台”、“加快推进药品快速检验技术在基层的应用，配置快速检验设备”、“加强县级机构快速检验能力建设”的要求中药中黄曲霉毒素的检测方法： 2010版《药典》附录IX V 黄曲霉毒素测定采用高效液相色谱法，另外增补药典描述该法检测建立增加柱后光化学衍生法。华安麦科作为国内最早从事霉菌毒素检测研究的高新技术企业对黄曲霉毒素检测也有深刻的探索研究，下面就我们的实践和大家分享一下，免疫亲和柱-高效液相色谱法-柱后光化学衍生等内容。【原理】：样品经甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和柱层析净化，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性，用水将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和柱洗脱，再经光化学衍生器柱后衍生，以提高检测准确性。【主要试剂及耗材】： ToxinFast®气控操作架：含气泵 ToxinFast®黄曲霉毒素免疫亲和柱1ml或3ml ToxinFast®光化学衍生器 ToxinFast®玻璃微纤维滤纸：直径11cm、孔径1.5µm ToxinFast®玻璃试管：直径12mm，长75mm，无荧光特性 ToxinFast®注射器：10ml、20ml 【检测步骤】：样品粉碎——提取——洗脱液进样、亲和柱净化——化学衍生——检测数值（做过液相的都知道这些步骤的，在这里就简单提一下，主要是为什么用到气控操作架和化学衍生器在下面解释一下！）气控操作架的使用说明：在样品粉碎后需要过亲和柱净化，也就是怎么方便亲和柱使用操作的问题，气控操作架能有效地提高这个环节的工作效率（很方便操作的），如图示： 1连接组装好的气控操作架，将免疫亲和柱、注射器针筒与气控操作架连接， 2 将处理后的溶液上样； 3 调节空气泵旋钮以控制流速，使样液以1-2d/s的速度流出； 4，待样液完全排干，用去离子水或蒸馏水以2-3d/s的流速洗涤两次，每次10ml； 5，待液体完全排干，将样品瓶置于亲和柱下方，上样1ml甲醇以1d/s的速度流出至完全排干。以上操作步骤是用免疫亲和柱--高效液相法检测中药中黄曲霉毒素的必经步骤，如使用气控操作架就能很好的固定亲和柱并以可控流速操作，既高效也能使操作误差减到最小。华安麦科ToxinFast®气控操作架具有6支可控支流，能同时有效检测多个样本，还适用于 1ml和3ml多种规格免疫亲和柱。为什么使用光化学衍生器？由于黄曲霉具有较强的紫外吸收和产生荧光的特性，因此可以进行HPLC-紫外或荧光检测，但是同时黄曲霉毒素中的B1、G1由于其在含水的流动相中容易产生荧光淬灭，因此在很多的实验中都会采用衍生法测定黄曲霉毒素。衍生的方法也很多：有柱前的，柱后的，在线的，由于在线的柱后光化学衍生有明显的优势，所以现在被增补为药典的检测方法，优势主要在于（无需任何化学试剂、对人员无伤害；无需人员直接操作、避免误差; 无需担心衍生液腐蚀检测器）希望这个分享可以给大家做黄曲霉毒素检测时提供小小的帮助。欢迎各位做黄曲霉毒素检测的老师与华安麦科联系交流，可从官网 http://www.magnech.com查询联系方式

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关于抗生素的检测

自央视近日曝光肯德基的供货商山东六和集团部分养殖农户存在违规喂养抗生素、鸡在出栏前仍违规喂药、监管部门检验检疫形同虚设等问题后，12月25日，农业部总经济师、新闻发言人在国新办举行的发布会上透露，与速生鸡事件有关的养鸡企业和加工企业已经关闭，部分大型快餐业也受到了不小的牵连。一时之间，速成鸡被推上了风口浪尖。那么，为什么人们如此惶恐呢？有没有什么办法可以检测呢？抗生素以前被称为抗菌素，事实上它不仅能杀灭细菌而且对霉菌、支原体、衣原体等其它致病微生物也有良好的抑制和杀灭作用，近年来通常将抗菌素改称为抗生素。抗生素可以是某些微生物生长繁殖过程中产生的一种物质，用于治病的抗生素除由此直接提取外；还有完全用人工合成或部分人工合成的。通俗地讲，抗生素就是用于治疗各种细菌感染或抑制致病微生物感染的药物。但是过量使用会抑制体内的有益菌，使肠道菌群失衡，导致疾病的引起。今天主要为大家介绍的是氯霉素：氯霉素（Chloramphenicol,CAP）曾是应用广泛的抗菌素，但由于其存在严重的副作用，能引起人的再生障碍性贫血，粒细胞缺乏症等疾病，欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。有没有很好的检测方法呢？华安麦科推出的氯霉素检测试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被氯霉素抗体，样品中残留的氯霉素和酶标氯霉素抗原竞争微孔条上预包被的抗体，经TMB底物显色，样品吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中氯霉素的含量。适用范围：可定性、定量检测动物组织（含水产）、牛奶、蜂蜜、饲料、鸡蛋等样品中氯霉素的残留。包装组成：酶标板、标准品、高浓度标准品、氯霉素酶标物、底物液A液、底物液B液、终止液、浓缩洗涤液、氯霉素浓缩样品稀释液检测步骤：1、将所需试剂从冷藏环境中取出；2、取出需要数量的微孔板；3、回温；4、编号；5、加标准品/样品；6、洗板；7、显色；8、测定；结果判定：粗略判定：用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围；而定量判定：定量分析检测方法灵敏度、准确度、精密度：试剂盒灵敏度：0.025ppb 样品最低检测限：组织样品……………………………………………0.05ppb 牛奶…………………………………………………0.025ppb 饲料…………………………………………………0.1ppb 蛋类 …………………………………………………0.025ppb 蜂蜜 …………………………………………………0.025ppb 回收率：组织样品…………………………………………… 108±10% 牛奶………………………………………………… 110±10% 饲料……………………………………………………90±15% 蛋类……………………………………………………95±15% 蜂蜜…………………………………………………100±15% 精密度：试剂盒的变异系数均小于10%详细信息请查看华安麦科氯霉素试剂盒说明书或电话垂询！注：华安麦科为答谢新老用户的大力支持与厚爱，在这新年来临之际，现所有抗生素产品均有促销活动，详情请与我们联系！公司信息：名称：北京华安麦科生物技术有限公司官网：www.magnech.com 地址：北京市昌平区科技园区超前路6号总机：+86-10-89710920 +86-10-60743100 直播热线：+86-10-80108031 手机热线：+86-15201409380 传真：+86-10-69743002

黄曲霉毒素B1检测试剂盒

【产品简介】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。其中黄曲霉毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。薄层色谱一直是检测黄曲霉毒素常用的方法，但是此方法制备样品及分析样品时费时又费力。而使用黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素B1残留。参考国家标准GB/T 5009.22-2003。本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，操作时间短于60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

莱克多巴胺(尿液)快速检测卡

【产品编码】 HQ09002 【产品简介】本产品为莱克多巴胺胶体金快速检测卡，用于定性检测动物尿液（例如猪尿、牛尿、羊尿等）中莱克多巴胺残留。【规格】 50条/盒【检测时间】 5-10分钟【灵敏度】 3ng/ml（3ppb）【产品组成】莱克多巴胺胶体金快速检测卡滴管（1个/袋）干燥剂（1片/袋）【样品处理】用干燥、洁净的离心管或适当容器采集50ml左右尿液。如果不立即检测，尿样在2-8℃冷藏可保存24小时，要注意避免腐败造成失效或污染。出现阳性结果时应按法定程序分瓶封装样品用于确证法检测。

氟喹诺酮ELISA检测试剂盒

【产品简介】氟喹诺酮类（FQNS）又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一类十分重要的广谱抗生素药物，能抑制细菌DNA螺旋酶。其常在牛、猪和鸡等家禽养殖中被作为兽药使用。特别是鸡、猪和鱼/虾等的养殖企业均使用其来防治家禽传染病已成为兽医临诊和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，由于其耐药性和潜在的致癌性引起广泛的关注。欧盟理事会条例中对部分氟喹诺酮的最大限量值MRL作出了明确的规定。本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，操作时间仅需60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

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