Chloramphenicol(氯霉素)ELISA Kit

英国RANDOX的ELISE试剂盒在检测药物残留时具有易于使用，不需要昂贵设备等特色，同时该 ELISE 试剂盒显
示出与 GC-MS 良好的相关性。同传统的方法（如纸片法、 TTC 法等为主的 MIT 法）相比较，具有 5-10 倍的灵敏，
易于使用，较低的设备费用，快速 2-3 小时内分析的样品多达百个，而使用 GC-MS 处理单个样品就需要 30min。

英国RANDOX的ELISE试剂盒一览表：

RANDOX的ELISE试剂盒 产品型号 Urine 尿液 Tissue 组织 Feed 饲料 Serum 血清 Milk 牛奶 Bile 胆汁
克伦特罗 SU2148
CB1418 0.3ppb 0.5ppb 25ppb
氯霉素 CN1469 0.01ppb 0.02ppb 0.02ppb 0.1ppb
磺胺喹噁林 SQ2145 15ppb 5ppb 5ppb 5ppb
磺胺二甲嘧啶 SM2146 5ppb 5ppb 500ppb 5ppb 5ppb
磺胺嘧啶 SZ2147 5ppb 5ppb 500ppb 5ppb 5ppb
己烯雌酚 SJ2152 0.25ppb 0.60ppb 0.25ppb
己二烯雌酚 SJ2152 0.5ppb 1.25ppb 0.5ppb
己烷雌酚 SJ2152 0.1ppb 0.25ppb 0.1ppb
19 —去甲睾酮 NT2105 0.8ppb 0.25ppb 1.0ppb
地塞米松 DM2156 2.5ppb 0.25ppb
β—米松 DM2156 5.8ppb 0.6ppb
二氟美松 DM2156 5.0ppb 0.5ppb
去二氢睾酮 BD2382 1ppb 0.3ppb
右环十四酮酚 ZR2421 2.5ppb 0.5ppb
吡唑甲基睾丸素 SW2418 0.6ppb
去甲雄三烯醇酮 TB2106 0.15ppb 0.25ppb 1.0ppb 1.0ppb
睾丸素 TT1430 0.125ppb


英国RANDOX的ELISE试剂盒简介
β-兴奋剂检测试剂盒： RANDOX 公司提供了两种类型的酶联免疫检测试剂盒（盐酸卡伦特罗
ELISE 和β - 兴奋剂 ELISE ）来筛选尿液、饲料、组织、血清等中的β - 兴奋剂。β - 兴奋剂
ELISE （ SU2148 ） 是建立在抗体成分对 盐酸卡伦特罗 和 沙丁胺醇 等免疫反应上的，其检测范
围比盐酸卡伦特罗 ELISE 检测更广。目前许多进口肉类食品的国家地区包括欧盟、美国、日本、香
港在他们的食品监控计划中就有检测沙丁胺醇这一项，这就是为什么 Randox 公司是全世界最大β
- 兴奋剂试剂盒供货商的原因。抗体可以和以下主要β - 兴奋剂类发生交联反应：盐酸卡伦特罗（ 100 ％）、沙
丁胺醇（ 86 ％），溴苯胺醇（ 53 ％）。

磺胺类药： 食品中残留磺胺类药物可导致有过敏性病史的消费者产生过敏反应。现在许多国家确定
了组织中磺胺类的最大残留量（ MRL ），在欧盟、美国、加拿大， MRL 为 100ppb ，在日本， MRL
为 100ppb 。因此高度灵敏的 ELISE 可以保证人类安全的消费食物。 RANDOX 公司主要有三种磺胺
类药物检测试剂盒，它们是磺胺喹噁啉、磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶。这三种磺胺试剂盒是英国
RANDOX 公司所特有的，而且样本前处理更加简便，快捷。

氯霉素检测试剂盒： 氯霉素是一种广泛用于牲畜、水产品中的广普抗菌药。 1994 年欧盟开始禁止氯霉素在畜产品
中的使用，欧盟规定氯霉素残留不得检出。目前欧盟、美国及日本等许多国家对氯霉素要求较以往更严，目前允许的
最大残留限量为 0.1ppb 。而英国 Randox 氯霉素试剂盒的检测下限能够达到 0.02ppb （组织）完全能够达到欧盟的
检测要求。

盐酸克伦特罗 ELISE （ CB1418 ）建立在盐酸克伦特罗抗体上，抗体可以和以下物资发生交联反应：盐酸克伦特罗（
100 ％）、溴苯胺醇（ 96 ％）、马布特罗（ 114 ％）、 Mapenterol （ 49 ％）。

简介
氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素。由于其具有效果好以及价格低廉等优点，目前已被普遍应用于各类家禽、家畜、水产品及蜂制品的各种传染性疾病的治疗。然而氯霉素有其严重的副作用,它会抑制人体骨髓的造血功能，从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。目前，我国已禁止其使用。
我公司采用国内外先进的工艺与技术，研发出氯霉素ELISA检测试剂盒，简化了样品处理方式，使用简便，省时省力省钱，整个操作过程不到90分钟。本产品检测范围广(鸡肉、鱼、虾、蟹、牛奶、血清、肌肉、组织、饲料与蜂蜜等)，特异性高，灵敏度可达到0.025ppb，是各类企业及各级政府检测机构的理想产品。

反应原理
本产品主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的。在整个反应当中,样品中氯霉素含量越多，反应呈色就越淡。反之，样品中氯霉素含量越少，则呈色越深。

试剂盒组成
1、微量测试孔：每条8孔，每板12条
2、氯霉素标准溶液：
0ppb、0.025ppb、0.05ppb、0.1ppb、0.3 ppb、0.6 ppb，1.5ml/瓶
3、10倍浓缩萃取稀释液：一瓶，30ml/瓶
4、10倍浓缩洗涤液：一瓶，30 ml /瓶
5、氯霉素酶标记物： 一瓶，8 ml/瓶
6、底物溶液：一瓶，12 ml/瓶
7、反应终止液：一瓶，13 ml/瓶

使用说明
A、注意事项
1、使用前先将氯霉素标准溶液6瓶，浓缩萃取稀释液，浓缩洗涤液，酶标记物，底物溶液及微量测试孔条置于室温下，回温30分钟。
2、回温后，取出所需微量测试孔条，将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好，置于4oC保存。
3、原倍萃取稀释液及洗涤液配制　
用蒸馏水将10倍浓缩萃取稀释液及浓缩洗涤液分别以1： 9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水)，即可作为样品萃取稀释液与微孔板清洗液。
4、制备的样品于4℃冰箱中可保存2天。
B、样品制备
1.待测物为生乳，则依以下方法进行处理 (4倍稀释 样品敏感度0.1ppb)
取250ul待测生乳加入750ul萃取稀释液，振荡混合后备用。
2.待测物为蜂蜜，则依以下方法进行处理
a.取2g蜂蜜、4ml蒸馏水与4ml 乙酸乙酯置入离心管中，震荡约5分钟，使其充分混合均匀。
b.离心10分钟(3000rpm)，取1ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50℃下氮气吹干(温度请勿超过50oC)。
c.加入0.5ml萃取稀释液，震荡约30秒钟后备用。
3. 待测物为蜂王浆、则依以下方法进行处理
a.取2g蜂王浆、3ml 0.5M NaOH及8ml乙酸乙酯放入50ml离心管，震荡混匀30秒。
b.离心10分钟(3000rpm)，取2ml上层液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮气吹干。
d.再加入0.5 ml萃取稀释液，震荡约30秒钟。
4. 待测物为畜禽组织样本或鱼、虾，则依以下方法进行处理
a.将3克样品剪碎后放入50 ml离心管中，再加入6ml乙酸乙酯，震荡约30秒。
b.离心10分钟(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮气吹干。
c.于此玻璃管中加入正己烷1 ml，先将残余物完全溶解后(若未能完全溶解，可能会导致回收率降低)，再加入1 ml萃取稀释液，震荡约30秒钟。
d.离心10分钟(3000 rpm)，用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分，弃掉。再吸取下层液(水层)备用。
e.若有乳化现象，请先将大部分上层液(正己烷)取出后，再将玻璃管置入80oC水中，隔水加热约5~10分钟，可改善乳化情形。
5.待测物为饲料，则依以下方法进行处理(10倍稀释)
a.将2克饲料放入50 ml离心管中，再加入4ml乙酸乙酯，震荡约30秒。
b.离心10分钟(3000rpm)，取1ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮气吹干。
c.于此玻璃管中加入正己烷1 ml，先将残余物完全溶解后(若未能完全溶解，可能会导致回收率降低)，再加入0.5 ml萃取稀释液，震荡约30秒钟。
d.离心10分钟(3000 rpm)，用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分，弃掉。吸取下层液(水层)50ul，再以萃取稀释液稀释10倍(即下层液50ul加萃取稀释液450ml)备用。

C、操作步骤
本产品的酶标记物与氯霉素标准溶液均直接使用，无需再稀释。
1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液，建议做双孔重复。
2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前处理的样品溶液。建议做双孔重复
3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。
4、轻敲盘子四周，使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。
5、将微孔中的反应液甩掉，再将洗液加满每一微孔后甩掉，重复洗3次。
6、最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。
7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后，轻敲盘子四周，使其充分混合。
8、于室温下避光静置温育20分钟。
9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。
10、用酶标仪于波长450nm下判读。

D、判定
1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。
2. 以B/B0值为纵坐标，以标样浓度的对数值为横坐标，做标准半对数曲线。
3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。
4. 由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。

E、标准曲线

F、灵敏度
氯霉素试剂检测盒的平均检测下限为 0.025ppb，此浓度之吸光值与阴性标准溶液(0ppb)之吸光值有明显的差异。

G、特异性
针对以下抗生素进行交叉反应之测试，结果如下：
Chloramphenicol 100%
Chloramphenicol(free base) 1.4%
Gentamicin <0.1%
Tetracycline <0.1%
Penicillin G <0.1%
Sulfamethazine <0.1%
Thiamphenicol 3.1%

H、再现性
针对氯霉素检测试剂盒精密度测试，重复6次，所得不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(%CV)，显示氯霉素试剂盒有很高的再现性:

I、回收率
生乳(添加0.25ppb) 70-110%
蜂蜜(添加0.3ppb) 90~130%
鸡肉、猪肉虾及鱼肉(添加0.3ppb) 80-120%
蜂王浆(添加0.3ppb) 80~120%
血清(添加0.3ppb) 80~120%
饲料(添加2.0ppb) 90-130%


J、可能出现的问题与解决办法
1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因：未加入酶标记物。
解决办法：请确实按照操作步骤进行。
b.原因：试剂盒内容物未能充分回。
解决办法：确定试剂盒内容物回温后再进行操作。
c.原因：室温太低。
解决办法：若室温太低(<19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间(>60分钟)。
d.原因：未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法： 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。
e.原因：试剂盒已过有效期限。
解决办法：请更换成仍在有效期限内的试剂盒。
2. 标准曲线线性不佳，或是平行性不好。
a.原因：温育位置避光不好或受到气流干扰。
解决办法： 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。
b.原因：操作时间拖太久。
解决办法：请在方法熟练后再进行操作。
c.原因：微孔间相互污染。
解决办法： 加样品时，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染。
d.原因：标准品或酶标记物所加入的量不一致。
解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。
e.原因：添加样品或试剂的操作方法不正确。
解决办法：加样品或试剂时，吸头请勿接触微孔。
f.原因：洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。
解决办法：请随时监控洗板机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。
3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因：室温太高(>25℃)。
解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间(<60分钟)。
b.原因：底物溶液受到污染。
解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。
c.原因：反应时间超过太久。
解决办法：请控制反应时间。
d.原因：酶标记物污染了盒内其它试剂。
解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免试剂间相互污染，凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可确保无残留)
4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。
a.原因：微孔中的试剂未能充分混合。
解决办法： 试剂加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。
b.原因：洗板过程发生问题(同2-f.)。
解决办法：请参考2-f.
c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。
解决办法： 请参考2-d.