【技术分享】参照新版USP621指南从HPLC-SEC到UHPLC-SEC的方法转换

  2022年末，USP<621>Chromatography指南的修订版生效，日本随之公布了第十八版日本药典第一次增补本。其内容是将规定了市售医药品通过色谱法等方法进行检测的USP专论，更新为通过超高速、高性能色谱法（UHPLC）进行试验。在将专论试验法转换为UHPLC时，不需要进行重新验证，可在保持以往实验方法的分离性能的同时，实现缩短时间、节省溶剂的成本优势。另外，其内容不仅适用于等度分离，还适用于梯度分离。我们将详细说明在进行尺寸排阻色谱分析时，根据新版USP规定，L59类型色谱柱以及转换为UHPLC-SEC方法时的条件设定。

一、SEC分析方法的转换

  USP对影响分离的因素，如色谱柱内径(dc)、长度(L)、填料内径(dp)、流速(Fc)等参数做出了更改，不仅以短柱确保了不低于原有检测法的分离性能，还实现了缩短时间、节省溶剂的优势。将与USP（L59）对应的色谱柱TSKgel G3000SWXL（5μm，HPLC）色谱柱转换为TSKgel UP-SW3000-LS（2 μm，UHPLC）时，流速变化允许范围如下表所示。作为参考，如果是串联2支TSKgel G3000SWXL色谱柱、以高分离度为目的的色谱柱体系的质量管理/分析法的情况下，使用30cm的TSKgel UP-SW3000-LS色谱柱，也可得到相同的分离效果。

* 使用2支30cm（串联2支色谱柱）时，与UHPLC 30cm色谱柱相同

** 应在不超过色谱柱最大压降的流速下使用

二、从HPLC-SEC（30cm色谱柱）转换为UHPLC-SEC（15cm色谱柱）

  分析单克隆抗体时，从30 cm 的TSKgel G3000SWXL色谱柱转换为15 cm 的TSKge UP-SW3000色谱柱的分析示例如下图所示。在符合USP规定的分析条件下进行UHPLC分离，在确保分离度为同等以上的同时，分析时间减少了约50%，流动相也减少了约80%。

三、从HPLC-SEC（30cm色谱柱×2支）转换为UHPLC-SEC（30cm色谱柱）的分析实例

  在进行质控分析时，为了提高分离度有时会串联2支30 cm的TSKgel G3000SWXL色谱柱进行分析。在这种情况下，可转换为使用30 cm的TSKgel UP-SW3000色谱柱进行UHPLC分析。

四、梯度分离时从HPLC转换为UHPLC

  修订后的USP给出了使用梯度分离的其他色谱分析模式从HPLC转换为UHPLC的规定。进行梯度分离时，需要追加设定梯度体积、梯度坡度等项目。关于复杂的条件设定，由于主要设备制造商的UHPLC系统支持符合USP规定的软件，所以可使用该类软件设定实验方法的条件。

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