产品应用：无盐缓冲液在疏水层析中的应用

无盐缓冲液在疏水层析中的应用

（疏水流穿模式在单克隆抗体纯化中的应用）

文 献 名：Purification of monoclonal antibodies by hydrophobic interaction chromatography under no-salt conditions

作    者：S. Ghose, Y. Tao, L. Conley and D. Cecchini

登载刊物：mAbs 5:5 1-6 September/October 2013

内容摘要：

    疏水层析（HIC）在单克隆抗体等多种生物医药品的纯化工艺中，可以有效地去除聚集体、宿主细胞蛋白（HCP）等杂质。但由于需要使用高盐缓冲液，而高盐浓度下除了会引起蛋白沉淀，操作性和试剂成本等问题也在一定程度上限制了疏水层析在层析工艺中的应用。

    本文献针对市场上现有的疏水填料中，疏水性最强的疏水填料Toyopearl Hexyl-650C作为层析介质，介绍了一种使用无盐缓冲液进行流穿模式（Flow-through Mode），使目标蛋白流穿，聚集体、HCP吸附的方法，来达到去除杂质的目的。另外，通过调节洗脱缓冲液的pH值来改变单抗表面的疏水性，可以提高纯度和回收率。

    对于单克隆抗体而言，根据疏水填料对抗体的吸附力、分离度来考察洗脱缓冲液的pH值和抗体的等电点（pI）以及表面疏水性，优化洗脱缓冲液的pH值能够改善纯化分离的效果。

    使用Toyopearl Hexyl-650C对4种不同的抗体，通过流穿模式纯化后，均达到了目标纯度。聚集体的含量均低于1%，HCP的去除率相比吸附洗脱模式而言也毫不逊色。

    本研究中，通过对疏水填料分离性能的活用，证实了在单抗纯化中，无盐缓冲液的流穿模式完全可行。疏水层析的流穿模式可以降低纯化试剂成本，并且可以运用在高表达、高浓度的抗体纯化中，并且这些运用也可以扩展到普通蛋白的分离纯化中。

*HWM: 抗体多聚体；HCP: 宿主细胞蛋白。

上表中数据基于原文在格式上做了调整。

注：本文献中，探讨了在使用Toyopearl Hexyl-650C流穿模式纯化单克隆抗体时，调整优化缓冲液的pH值能更好地发挥填料的性能。除此之外，由于不同抗体表面的疏水性有着较大差异，可以根据样品的疏水性来选择更合适的填料（例如Toyopearl Btuyl-650M, Phenyl-650M, PPG-600M等），从而获得更佳的分离纯化效果。