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【玉米赤霉烯酮】的高效液相色谱HPLC检测方案
2015/12/30 10:09
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方案摘要：
产品配置单：
赛智LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪
型号： LC-10Tvp
产地： 浙江
品牌： 赛智
¥10万 - 20万
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N2000色谱工作站
型号： N2000
产地： 浙江
品牌： 赛智
¥2000
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方案详情：
【样品处理过程】
标准储备液（0.1mg/ml）:准确称取一定量标准品，用甲醇+乙腈（1+1）溶解，配成0.1mg/ml的标准液。标准工作液：根据使用需要准确吸取一定量的玉米赤霉烯酮储备液，用流动相稀释，分别配成相当于10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml的标准工作液。用0.45µm的有机系滤膜过滤，精密量取20µL，注入液相色谱仪，记录色谱图。
样品处理：将样品研磨，硬质的粮食用高速万能粉碎机磨细并通过试验筛，不要磨成粉末，称取50g（精确到0.01g）磨碎的试样与100mL容量瓶中，加入5gNaCl,用提取液(乙腈+水（9+1）)定容至刻度，混匀，转移至均质杯中高速搅拌提取2min，定量滤纸过滤，移取10mL滤液于50mL容量瓶中加水定容至刻度，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液于干净的容器中。
净化、洗脱：将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下，准确移取滤液10mL注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节压力，使溶液以约1滴/s的流速通过，直至空气进入亲和柱中，依次用10mLPBS清洗缓冲液和10mL水淋洗免疫亲和柱，流速约为1滴/s-2滴/s直至空气进入亲和柱中，弃去全部流出液抽干小柱，加入1mL甲醇洗脱，再用甲醇定容至1mL。
【色谱条件】
色谱柱： C18反相色谱柱, 4.6 mm*250 mm，粒度5 µm
流动相:甲醇：水：乙腈=8:46:46
波长：λex274nm λem440nm
流速：1.0mL/min
进样量：20µL
柱温：30℃
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