液相色谱法检测奶茶、可乐中咖啡因

咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称1，3，7-三甲基黄嘌呤，是由茶叶或咖啡中提取出的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因约1.2%～1.8%，茶叶中约为2.0～4.7%。可乐饮料、APC药片均含咖啡因。 

可采用液相色谱中的反相分配色谱进行测定，反相色谱用的是非极性填料分析柱（如ODS-C18），流动相是极性较强溶剂（如甲醇和水），样品根据在固定相和流动相中的分配系数不同而进行分离。通过标准样品的保留时间进行定性，以峰面积对浓度绘制的工作曲线定量。 

检测仪器：液相色谱仪：真空在线脱气装置；四元梯度泵；多波长监测器；超声器（用于样品溶解，流动相脱气，玻璃器皿清洗）。

液相色谱仪条件设置 

打开计算机，等计算机启动完毕后，依次打开输液泵、真空在线脱气装置、柱温箱、检测器的开关。通讯完毕后，设定操作条件。流动相： 甲醇/水＝60/40 ；总流速0.8mL/min 设定在254nm波长下进行检测，柱温30℃，检测时间6min。流动相的比例可以根据实验内容的需要在控制单元中修改。 

    测定方法：

将可乐、奶茶倒入烧杯后放在超声波仪中超声脱气，去除奶茶、可乐中溶解的空气以及大量二氧化碳气体。将脱气后的可乐溶液稀释5倍后，通过0.45μm的滤膜过滤，转移至定量管中备用。将脱气后的奶茶溶液用甲醇稀释5倍后、离心，取上层清液通过0.45μm的滤膜过滤后，转移至定量管中备用。 

准确称量10mg的咖啡因用甲醇溶解于10ml的容量瓶中作为母液，再分别从母液中移取0.25mL、0.5mL、1mL、2mL、3mL溶液至容量管中，然后分别稀释至10mL。

流动相比例设为甲醇/水＝60/40，依次将咖啡因标准溶液进样5μl（利用六通阀进样器的定量管进行准确定量），以得到咖啡因在此色谱条件下的保留时间以及各个浓度下咖啡因的峰面积。 

将未知浓度可乐、奶茶溶液进样5μl，以获得此溶液中咖啡因的保留时间及峰面积。