ACE色谱柱超惰性固定相对生物分子反相HPLC的益处优化选择性TFA和其他流动相添加剂与肽类和蛋白质的复合能力可用于调节选择性并改善分离度。如下图所示，将TFA浓度从0.1％降低至0.01％可使血管紧张素II和III实现分离。 在超惰性ACE色谱柱的情况下，随着分离度的显著改善，峰形和灵敏度保持恒定。在Vydac色谱柱（填充有更具活性的固定相）的情况下，峰形被严重破坏。 选择性，随TFA的浓度而变化 色谱柱：250 x 4.6mm, 5μm C18 300?流动相：A：TFA（溶于水中）B: 80％TFA（溶于乙腈中），20％TFA（溶于水中），（按照上述说明为％TFA），15分钟内25％-40％B流速：1.0 mL/min 检测：UV 215nm化合物： 1.血管紧张素II 2.血管紧张素III 3.血管紧张素I ACE 5 C18-300超惰性硅胶 Vydac 218TP低纯度“活性”硅胶 通过降低TFA浓度来改善分离度。由低品质硅胶制成的色谱柱显示其性能降低。 备注：比较性分离物不代表所有应用。  

ACE色谱柱超惰性固定相对生物分子反相HPLC的益处提高灵敏度 将TFA（三氟乙酸）用作肽类和蛋白质反相分离的流动相添加剂。 该添加剂通常被用于改善肽类和蛋白质复杂混合物的峰形和分离度。 如下图所示，在流动相中使用0.1％TFA可以使填充有活性固定相的色谱柱产生与由超惰性固定相制备的新一代色谱柱相当的峰宽。 然而，随着TFA浓度降低至0.01％以及最终的0.005％，超惰性相上的峰宽保持不变，但活性固定相上的峰宽会发生变形。 使用极低水平TFA分析肽类和蛋白质的能力有利于采用质谱法进行高灵敏度检测。TFA可与多肽形成复合物合并增强选择性。然而，该相同的复合作用会降低质谱仪的灵敏度。用于肽类和蛋白质分析的ACE 300?色谱柱 蛋白质 条件 色谱柱：ACE 5 C18-300, 250 x 4.6mm流速：1.0ml/min温度：环境 流动相：A. 0.1% TFA（溶于水中） B. 0.1% TFA（溶于乙腈中），30分钟内 5%-70% B检测：UV, 280nm化合物1. 核糖核酸酶A 2. 细胞色素C 3. 全铁转铁蛋白4. 脱辅基肌红蛋白 肽类 条件 色谱柱：ACE 5 C18-300, 250 x 4.6mm流速：1.0ml/min温度：环境 流动相：A. 0.1% TFA（溶于水中）B. 0.1% TFA（溶于乙腈中），25分钟内10%-40% B检测：UV, 220nm化合物1. 甘氨酸-酪氨酸2. 催产素3. 血管紧张素II 4. 神经降压素 灵敏度和峰形，随TFA的浓度而变化 色谱柱：250 x 4.6mm, 5μm C18 300?流动相：A：TFA（溶于水中） B： 溶于乙腈中的TFA（按照上述说明为％TFA），37.5分钟内10％-55％B。 流速：1.5mL/min检测：UV 200nm化合物1. 甘氨酸-酪氨酸2. 催产素3. 血管紧张素II 4. 神经降压素ACE 5 C18-300超惰性硅胶 Vydac 218TP低纯度“活性”硅胶 随着TFA浓度的降低，低纯度硅胶色谱柱（右图）显示性能急剧下降。 由超惰性硅胶制成的色谱柱（如ACE）会在TFA浓度降低时保持性能。 备注：比较性分离物不代表所有应用。 

以品种丰富的产品及完善的服务体系助力中国药物代谢动力学发展 广州菲罗门科学仪器有限公司 时间：2019 年6 月28 日-6 月30 日 地点：江苏省南京市曙光国际大酒店 主题：对于生物医药行业，过去的2018又是不平凡的一年，fda批准59种新药上市，创历史新高！其中fist-in-class的一类新药占了32%，创新药及新疗法热度不减。国内cde也批准了10个国产创新药。作为贯穿整个新药研发过程并发挥重要作用的药代动力学（dmpk）研究，在新形势下如何助力新药研发 菲罗门作为本次会议的金牌赞助商，将在展台展出世界顶级的色谱柱产品，包括新型液相色谱柱，手性色谱柱和气相色谱柱等等。 菲罗门拥有近20年的色谱柱应用经验，作为中国政府、科研机构、高校，生物制药厂商的合作伙伴和色谱产品供应商，从2002年起开始向全国市场销售色谱柱，经过十几年的努力，截至2019年1月，约有十几万根由菲罗门提供的色谱柱遍布各大行业的化学分析实验室。 在色谱分析领域，菲罗门提供的色谱柱凭借优越的性能、稳定的品质、多样化的解决方案以及迅速及时的技术支持得到了合作伙伴、渠道商和终端用户的广泛信赖和好评。 菲罗门提供的色谱柱，柱效高，批次稳定，能满足在制药行业严谨的产品分析要求。同时也以领先的技术为方法开发、降低人力成本和实验室资源管理风险、对分析实验的准确有效性等方面做着巨大的贡献。今后菲罗门也将继续以稳定的产品和迅速的技术服务全力支持中国制药行业的蓬勃发展，致力于向市场提供高质量、多元化、客户化的解决方案。 诚挚的欢迎大家莅临菲罗门展位，亲身体验全球领先的色谱柱技术。 同时菲罗门也期待着与各位互相交换意见，共同携手为制药行业的未来而努力。本次会议展台将展出以下3大产品： 1.英国ace全系列色谱柱 2.菲罗门畅销液相色谱柱和新型手性色谱柱 3.菲罗门革新气相柱新产品  

ACE毛细管和纳米型色谱柱 毛细管（500μm和300μm）和纳米（100μm和75μm）尺寸 多种多样的键合相可用，包括ACE C18-AR和ACE C18-PFP 100?和300?孔径 柱效高、寿命长、可重现性好 特别适用于LC-MS和LC-MS-MS 除了从分析型（1.0-4.6 mm ID）到制备型（21.2-30 mm ID）广泛范围的色谱柱之外，ACE色谱柱也可提供毛细管（500μm和300μm）和纳米（100μm和75μm）尺寸。ACE毛细管和纳米型色谱柱提供所有ACE键合相，其孔径为100?和300?。使ACE超惰性碱性去活色谱柱成为方法开发化学家选择的相同特征也使其成为毛细管和纳米型HPLC应用的理想选择。 

ACE制备型HPLC色谱柱 ACE制备型HPLC色谱柱 载样能力：高表面积和碳载量，以获得最大的样品容量 选择性：9种键合相可用，以优化分离度和实现样品容量的最大化。C18、C18-AR、C18-PFP、C18-HL、C8、C4、CN、苯基、AQ 耐用性：可靠且持久的性能 保证可重复性：如ACE分析柱一样完整的色谱柱/批验证 现在可以实现可重现性的高性能制备分离 具有制备型HPLC经验的色谱工作者知道什么才是最重要的—分离度和载样量。 两者息息相关; 分离度越大，样品负载越高，获得纯化合物越快。 在制备规模下优化分离度的能力意味着从分析规模下的高性能分离开始。 使ACE超惰性碱性去活分析柱成为方法开发化学家选择的相同特征也使其成为规模放大和工艺方法的理想选择。ACE制备色谱柱特征：? 超高纯度碱性去活硅胶? 5、10和15μm粒径可用? 色谱柱经完全验证? 优良的可重复性? 优良的柱效? 可靠、持久的性能? 90?、100?和300?孔径为您的样品选择最佳键合相ACE制备型色谱柱可提供9种键合相的选择性（包括C18-AR和C18-PFP），这可以优化您制备型色谱柱的分离度，从而提高负载能力。ACE制备柱还可以提供未键合的硅胶，用于进一步的选择。快速获得高纯度产品ACE制备型色谱柱具有各种色谱柱尺寸和粒径。 为了获得最大负载能力，请选择30 mm内径的色谱柱。使用5μm粒径的50 mm柱长色谱柱可以使您的分离速度最大化。 为了最大限度地提高分离度，则请选择粒径为5μm的250 mm色谱柱。ACE C18色谱柱的可重现性放大 流动相： 35:65乙腈/1％TFA（溶于水中） 温度： 22℃波长： 254nm样品： 1）尿嘧啶 2）4-羟基苯甲酸 3）乙酰水杨酸 4）苯甲酸 5）2-羟基苯甲酸  6）对羟基苯甲酸乙酯 

ACE® Excel™ 色谱柱ACE Excel 2μm UHPLC色谱柱 与所有市售UPLC和UHPLC仪器完全兼容 为UHPLC色谱柱提供口碑卓越的ACE HPLC色谱柱优势 为UPLC/UHPLC使用者提供了更多选择的固定相，包括强大的C18-AR和C18-PFP相 提供高水平的可靠性和耐用性 提供从UHPLC到HPLC再至制备型LC的易扩展性 适用于UHPLC的2、3和5μm粒径 制造UHPLC色谱柱是比较困难的，且通常认为它们不像HPLC色谱柱那样耐用和可靠。 凭借其在制造最优质HPLC色谱柱方面的丰富经验，Advanced Chromatography Technologies能够生产出非常可靠的UHPLC色谱柱。 现在，色谱分析师将从UPLC和UHPLC仪器中获得更多的成果。UPLC和UHPLC使用者利用ACE ExcelUHPLC色谱柱现可以获得碱性化合物的极佳峰形、改善柱间的可重现性、获得利用多种分离机制的附加固定相以及改善色谱柱的耐用性。ACE Excel提供卓越的分离度和峰形 条件 流动相A = 5mM甲酸（溶于水中）和B = 5mM甲酸（溶液甲醇中）梯度5分钟内3-100％B流速：0.6 ml/min温度：40 ℃检测：UV, 254 nm色谱柱尺寸：50 x 2.1mm Analytes 1. 对乙酰氨基酚2. 氢氯噻嗪3. 甲基苯基亚砜4. 甲基苯基砜5. 阿司匹林6. 非那西丁7. 1,3-二硝基苯8. 1,2,4-三甲氧基苯9. 苯甲酸乙酯10. 尼美舒利11. 布洛芬12. 吲哚美辛13. 甲芬那酸 这些比较性色谱图显示，C18键合相不能将所有13种分析物完全分离。由于其额外的分离机制，ACE Excel C18-PFP能够基线分离所有分析物。 备注：比较性分离物不代表所有应用。ACE®是Advanced Chromatography Technologies Limited的注册商标。ACE ExcelTM和HSCTM是Advanced Chromatography Technologies Limited的商标。Advanced Chromatography Technologies Limited承认Advanced Scientific Instruments、Agilent Technologies Inc.、Alltech AssociatesInc.、GL Sciences Inc.、Idex Health＆Science LLC、Phenomenex Inc.、Shimadzu Corporation、Thermo Fisher Scientific和Waters Corporation的注册和未注册商标，且与上述这些公司没有任何隶属关系。 ACE Excel UHPLC色谱柱与所有市售UPLC和UHPLC仪器兼容 Thermo Scientic Accela Dionex UltiMate 3000 Waters Acquity UPLC Acquity UPLC H–Class Acquity UPLC I–Class 安捷伦科技1290 Infinity 1220 Infinity 1260 Infinity 1200 Infinity 岛津Nexera Prominence 加上许多其他品牌的UHPLC仪器，恕不能一一列举 

ACE Excel UHPLC色谱柱与所有市售UPLC和UHPLC仪器兼容Thermo Scientic Accela Dionex UltiMate 3000 Waters Acquity UPLC Acquity UPLC H–Class Acquity UPLC I–Class 安捷伦科技1290 Infinity 1220 Infinity 1260 Infinity 1200 Infinity 岛津Nexera Prominence 加上许多其他品牌的UHPLC仪器，恕不能一一列举 

ACE色谱柱柱前过滤器 使用Advanced Chromatography Technologies的品质柱前过滤器可以保护您的HPLC和UHPLC色谱柱免于过早失效。HPLC色谱柱失效的最常见原因之一是色谱柱入口筛板上聚集的颗粒物质，导致背压较高和/或峰形变形。 据估计，超过70％的HPLC色谱柱失效是由入口筛板堵塞引起的。UHPLC色谱柱（特别是那些用2μm以下颗粒填充的色谱柱）特别容易受入口筛板堵塞的影响。Advanced Chromatography Technologies可以提供三种不同的柱前过滤器，每种过滤器均为色谱柱的特殊保护而设计。UltraShield™ ColumnShield™ ColumnSaver™ UHPLC和UPLC色谱柱的柱前过滤器，顾名思义，UltraShield柱前过滤器专门用于需要高流动相速度和超高压的快速、高效“UHPLC”分离。UltraShield的超低扩散可以保持UHPLC色谱柱的柱效，但确保不会影响关键分离度。由于设计简单，UltraShield可在几秒钟内安装在任何分析型UHPLC或UPLC色谱柱上，并且在1000 bar（15,000 psi）下密封。只需先用手指拧紧，然后扳手拧紧超过手动拧紧的额外1/4圈。 用于更高性能HPLC色谱柱或较小内径色谱柱的柱前过滤器。通常将3.5μm和3.0μm的颗粒填充在具有较小内径（ColumnShield柱前过滤器对于这些类型的色谱柱来说是最佳的。它们以比UltraShield更低的成本提供有效的低扩散过滤。尽管不推荐用于超高压应用，但它们仍然可以在高达400 bar（6,000 psi）的压力下安全使用。ColumnShield柱前过滤器利用PEEK手紧设计，直接与任何1/16“10-32内螺纹入口接头端口连接，而不论制造商如何。 用于更典型标准内径（3.0至8.0 mm）HPLC色谱柱的柱前过滤器。ColumnSavers可以为填充有3μm大小或更大颗粒、内径为3.0 mm至8.0 mm的HPLC色谱柱提供经济保护。我们甚至推荐在保护柱的入口上使用这些柱前过滤器，以延长使用寿命并降低这些产品的替换成本。 最大压力：1000 bar HPLC/UHPLC柱内径：1.0-4.6 mm HPLC/UHPLC柱长：30-250 mm 最大压力：400 bar HPLC/UHPLC柱内径：1.0-4.6 mm HPLC/UHPLC柱长：50-250 mm 最大压力：300 bar HPLC/UHPLC柱内径：3.0-8.0 mm HPLC/UHPLC柱长：50-300 mm 产品描述：UltraShield柱前过滤器 0.5μm孔隙度的钛过滤元件，5/pkg ACE-US1505 UltraShield柱前过滤器 0.5μm孔隙度的钛过滤元件，10/pkg  货号： ACE-US1510产品描述：ColumnShield柱前过滤器 0.0.5μm孔隙度的不锈钢过滤元件，5/pkg ACE-HP205 ColumnShield柱前过滤器 0.5μm孔隙度的不锈钢过滤元件，10/pkg  货号： ACE-HP210产品描述：ColumnSaver柱前过滤器 具有0.5μm孔隙度的不锈钢过滤元件，5/pkg ACE-CS205 ColumnSaver柱前过滤器 具有0.5μm孔隙度的不锈钢过滤元件，10/pkg        货号：ACE-CS210  

压力额定值> 1700bar（> 25000psi） 与所有UHPLC系统兼容 与所有UHPLC色谱柱品牌兼容 消除连接不良 创新且可重复使用的设计 所有UHPLC色谱柱品牌都需要正确安装，以实现最大柱效。 为了避免出现问题，不推荐使用永久型压制接头，因为这些接头在安装时不允许在管道、接头与色谱柱入口之间自由移动。 这可能会导致色谱柱连接不良，进而由于向系统引入了额外的柱体积（死体积）表现出非预期的峰拖尾。 或者，可以观察到入口接头连接处有泄漏。ACE UHPLC色谱柱连接器（p/n EXL-CC）可重复使用，每次均可以使UHPLC色谱柱得到正确安装。 它们独特的设计确保它们可以随着重复使用保持压力等级，但无需永久性地焊在入口管道上。 为了使接头的使用寿命尽可能最大，需要使用ACE扭矩扳手（p/n EXL-TW）。 标准ACE HPLC PEEK手指连接器（p/n ACE-FT，压力额定值为350bar / 5000psi）可用在UHPLC色谱柱出口端处，该处压力要求较低，但正确的连接仍然很重要。

ACE色谱柱可以提供从UHPLC到HPLC再到制备型HPLC的易扩展性。 相同的质量控制，可以确保不同批次色谱柱的高重现性，也可以保证您更容易地在UHPLC和HPLC方法之间进行转换，或需要分离和纯化目标化合物时放大到制备应用上。 柱效当然会改变，但可以预料的是，谱带间距（选择性）将相同。 图14阐明了当使用相同的ACE键合相但不同粒径填充的色谱柱进行操作时，可以预见到分析物一致的谱带间距类型（选择性）。 图 14：将ACE固定相从UHPLC（2μm）扩展到HPLC（3μm和5μm）再至制备型HPLC（10μm）时，选择性得到了保留与保证。 条件 流动相：35:65 MeCN/0.1%TFA（溶于水中） 温度：22 ℃波长：254 nm分析物1. 尿嘧啶2. 4-羟基苯甲酸3. 乙酰水杨酸4. 苯甲酸5. 2-羟基苯甲酸6. 对羟基苯甲酸乙酯 试验样品的这些色谱图在填充有相同的键合相但不同粒径的色谱柱上以相同的流动相条件运行，结果阐明分离从UHPLC扩展到HPLC再到制备型HPLC的容易程度。 当使用ACE Excel UHPLC色谱柱进行快速方法开发，且该方法必须可转移到HPLC时，易扩展性则显得特别有价值。 图 15：ACE固定相可以提供相同的选择性，无论它们是UHPLC、HPLC还是制备型HPLC色谱柱 条件 色谱柱：2.1 x 50 mm流动相：1.4分钟内从30% B至90% B A = 20mM甲酸铵+ 0.1％甲酸B =乙腈+ 0.1％甲酸 梯度：在30％B时持续0.30分钟，在1.10分钟内从30至90％B，在90％B时持续0.40分钟 流速：0.5 mL/min柱温：30oC检测：AB Sciex Triple Quad（TM）5500 MS，以ESI（+）模式运行 仪器：岛津Prominence UFLC系统 分析物1. 甲苯咪唑2. 普罗替林3. 阿米替林4. 洛哌丁胺 试验样品的这些色谱图在ACE Excel C18 2μmUHPLC色谱柱、ACE C18 3μmHPLC色谱柱和ACE C185μm色谱柱上以相同的流动相条件运行，结果阐明ACE固定相的选择性一致，无论填充粒径如何。 这使得从UHPLC到HPLC或HPLC再到UHPLC的方法转移更加容易。同时也使得从分析型应用扩展到制备型应用更加容易。 

柱子与柱子之间的可重现性受硅胶固定相载体的生成、固定相与固定相载体的键合以及色谱柱中固定相的填充的影响。在色谱柱的制备过程中，每个阶段被控制得越好，色谱柱的可重现性和质量则越好。ACE色谱柱在色谱柱制备过程中的每个阶段均得到了全面控制。 这些控制措施确保ACE色谱柱在柱间以及批次之间产生可靠且可预测的性能。 图13提供了典型批次验证测试的实例。 硅醇活性的细微变化是柱子与柱子之间选择性变化的主要原因之一。 ACE和ACE Excel色谱柱由于使用超纯试剂和严格的制造工艺控制（可以获得具有均一表面特性的高纯度硅胶固定相载体）而具有出色的可重现性。 将这种高纯度硅胶与先进的键合技术相结合，可以产生一系列高惰性的固定相，这些固定相几乎消除了色谱中的硅醇干扰，从而提供卓越的柱子与柱子之间的可重现性。     

已经证实ACE HPLC色谱柱和ACE Excel UHPLC色谱柱具有持久耐用的、可靠的日常性能和卓越的色谱柱寿命。通过键合在硅胶固定相载体上的硅氧烷的酸化水解可以失去键合相，从而降低色谱柱的寿命。该酸水解随着流动相pH的降低和柱温的升高而增加。 与C18相相比，较短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去键合相。此外，低纯度的硅胶固定相载体和低表面覆盖的固定相载体使得一些键合相更易于酸解。 由于使用超高纯度的硅胶固定载体粒子以及键合相的极高表面覆盖，ACE键合相表现出极高的稳定性。（参见图9） 尽管所有ACE键合相的稳定性都很优异，但是一些键合相并不像其它键合相那样稳定。例如，通常认为C18键合比柱长较短的烷基相、PFP相和苯基键合相更稳定。 实际上，典型的苯基固定相稳定性不佳是该相在方法开发中不常被选择的主要原因之一。 为了解决这个问题而开发了ACE C18-AR，其允许色谱分析利用强大的π-π和偶极-偶极分离机制，并仍然享有C18相的坚固性及耐用性。 如图10所示，ACE C18-AR不仅对典型的苯基键合相具有非常优异的稳定性，它甚至还比许多其他C18键合相表现出更佳的稳定性。 类似地，ACE C18-PFP提供了多种分离机制，可以利用它们实现更佳的总体分离效果，同时从C18相的稳定性中受益。 图 9：酸稳定性，pH 1.8 条件 色谱柱：ACE 4.6 x 150 mm流动相：50% CH3CN, 50%水 流速：1.0 mL/min温度：22 °C分析物：菲 酸性暴露条件： 流动相：50% CH3CN 50% 0.1%TFA（溶于水中）（pH 1.8） 流速：1.0 mL/min温度：22 ℃ 图10：加速柱稳定性研究：pH 1.9时80℃ 酸性暴露条件： 流动相：5:95 MeOH/0.1% TFA（溶于水中）（pH 1.9） 流速：0.20 mL/min温度：80 ℃色谱柱尺寸：50 x 2.1mm分析物：菲 使用设计用于加速柱降解下的条件，ACE C18-AR相显示保留损失极少，其寿命相当于高度稳定的ACE C18相。两种固定相均由相同的超纯硅胶而制成，而且比Zorbax SB-C18的耐久性更好(Zorbax SB-C18曾视作在高温和低pH条件下具有极好稳定性的固定相）。 正如预期的那样，基于低纯度硅胶（Waters Spherisorb ODS2）的C18键合柱在这些加速条件下寿命大大降低。 特别值得注意的是常规苯基色谱柱与ACE C18-AR的寿命比较结果。与ACE C18-AR相比，尽管使用高纯度二氧化硅，苯基色谱柱的寿命仍降低，这表明ACE C18-AR可能适用于那些使用苯丙基色谱柱寿命短的应用。 将HPLC和UHPLC连接到通常被称为LC-MS的质谱仪上已经相当普遍。 然而，质谱对可能从HPLC/UHPLC色谱柱上洗脱下来的微量的键合相（称为柱“流失”）非常敏感。柱 流失可能会干扰分析结果，并且重要的是，LC-MS应用中所选择的色谱柱具有足够稳定的键合相以避免过量的柱流失。 图11表明ACE C18-PFP色谱柱几乎没有“流失”干扰LC-MS分析。 C18-PFP（以及ACE C18和ACEC18-AR）的稳定性使得这些色谱柱更适合LC-MS应用。 图 11：ACE C18-PFP色谱柱的低柱流失使其成为LC/MS应用中的理想选择 条件 色谱柱尺寸：50 x 3.0 mm流动相：梯度：在5分钟内从5至95% B，95% B时持续5分钟A: 0.1％甲酸(溶于水中)B: 0.1％甲酸(溶于乙腈中)流速：0.43 mL/min温度：60oC检测：安捷伦1100 MSD ESI正离子快速扫描模式,快速扫描全50 – 1000 m/z样品：空白运行 柱流失可能会干扰LC-MS应用中目标分析物的检测和测量。 ACE C18-PFP色谱柱未显示柱流失。 所有ACE色谱柱的低流失特性使其非常适合LC-MS应用。 UHPLC色谱柱可能缺乏耐用性。加上入口筛板堵塞的可能性，您可能面临色谱柱的耐用性不如HPLC色谱柱的问题。 ACE Excel色谱柱非常宽容，并提供您期望从HPLC色谱柱中获得的相同耐用性和使用寿命。 ACE Excel将改变您对UHPLC色谱柱耐用性的看法。 ACE Excel色谱柱不仅填装的更好，还采用了专利的入口筛板设计，使其比其它UHPLC色谱柱更不容易被堵塞。 仍建议您像使用任何UHPLC色谱柱一样过滤样品和流动相，但ACE Excel色谱柱比其他UHPLC色谱柱更为宽容，并提供与HPLC色谱柱相同的耐用性和使用寿命。 图 12：ACE Excel色谱柱在耐用性方面有良好的口碑 将2.1×100mm ACE Excel C18 UHPLC色谱柱在平均1,000 bar（14,500 psi）压力下进行2000多个梯度的运行。 在该稳定性研究结束时，柱效（塔板数）和保留时间基本保持不变。  

ACE Excel为UHPLC带来了享有盛誉的ACE HPLC性能重要的是要认识到色谱柱的选择性和柱效是独立的变量，在开发分离方法时您不必选择使用一种而不使用另一种。事实上，为了实现最佳的总体分离效果，您应当对上述两个变量以及保留值进 行优化。当需要实现高速分离时尤其如此。（参见图7） 图 7：利用柱效和键合相选择性来开发更快的分离方法 条件： 流动相： A = 5mM甲酸（0.189）ml / L; A = 5mM甲酸（溶于甲醇中） 柱温：40℃检测：PDA, 254nm 样品：1. 阿司匹林2. 非那西丁3. 1,3-二硝基苯4. 苯甲酸乙酯 5. 尼美舒利6. 布洛芬7. 吲哚美辛 利用UHPLC色谱柱更高的柱效，可在更高的流动相流速下使用更短的色谱柱，以使这种混合物的分离时间缩短80%（相比HPLC色谱柱）。 然而，也可以通过优化键合相的选择性来进一步缩短分离时间，在这个案例中，就是利用了C18-PFP键合相所具有的增强的选择性。 与C18UHPLC色谱柱、C18 HPLC色谱柱相比，ACE Excel C18-PFP UHPLC色谱柱分别将混合物的分离时间缩短了80％以上以及96％，同时保持了所有峰的极佳分离度。ACE Excel UHPLC色谱柱的设计旨在充分利用低扩散、超高压UPLC®和UHPLC仪器（高达1000 bar），并可与所有市售UPLC和UHPLC系统相兼容。ACE Excel UHPLC色谱柱可以为碱性化合物提供更佳的峰形，改善柱子与柱子之间的重现性，提供额外的利用多种分离机制的固定相，以及改善色谱柱的耐用性。ACE Excel UHPLC色谱柱的可用性意味着色谱分析师在使用UPLC和UHPLC仪器时有更多的选择来获得更好的结果。 图 8：ACE Excel色谱柱提供快速、高分辨率的分离 条件 色谱柱：ACE Excel C18, 2 μm, 3.0 x 50 mm流动相：60秒内从30%B至100%B A =水+ 0.1％TFA B =乙腈 流速：2.5 mL/min柱温：40oC压力：703 bar (10,335 psi)检测：PDA, 254 nm仪器：安捷伦1290 UHPLC化合物1. 乙酰苯胺2. 苯乙酮3. 苯丙酮4. 苯丁酮5. 二苯甲酮6. 苯戊酮7. 苯己酮8. 苯庚酮9. 苯辛酮 ACE Excel C18色谱柱可在不到60秒内提供这9种分析物的基线分离。 

ACE和ACE Excel硅胶基质固定相几乎消除了硅醇基对色谱分离的不利影响，并且在为碱性化合物提供卓越峰形方面赢得了口碑。峰拖尾可以降低分离度，降低灵敏度，甚至干扰准确度和精密度（图4）。 峰拖尾有许多潜在的原因，但分离碱性物质时的主要原因是硅胶固定相载体颗粒表面上的酸性硅醇基与分析物上的氨基之间的相互作用（图5）。 图 4：峰拖尾对分离度和灵敏度的影响 随着峰拖尾（Tf，拖尾因子）从1.0增加到2.0，分离度（Rs）从1.5下降到0.87。 由于峰宽增加以及峰面积保持不变，灵敏度（峰高）也随着峰拖尾的增加而下降。 ACE色谱柱采用具有极低硅醇活性的超惰性硅胶制成。 这种超纯硅胶采用专利技术进行有效键合和彻底封尾。 导致这种硅胶基质的固定相几乎消除了硅醇基对色谱分离的不利影响。 ACE色谱柱的超惰性特性使其成为分离极性碱性化合物的理想选择。 当分离复杂碱性化合物时,与其他现代碱性去活色谱柱相比，ACE色谱柱总是能给出明显更好的峰形和柱效（图6）。 图 5：峰拖尾相互作用 硅胶固定相载体表面上的酸性硅醇基可形成与碱性化合物相互作用的离子交换位点。 这种离子交换的相互作用通常可以导致峰保留（二次保留），并当采用反相HPLC分离胺类化合物时引起峰拖尾。 一种几乎消除了硅醇基对色谱分离不利影响的硅胶基质固定相 图 6：峰拖尾比较 条件 色谱柱尺寸：50 x 2.1 mm流动相：40％甲醇，60％水 流速：0.2 mL/min温度：22oC样品：吡啶 报告了碱性化合物（吡啶）在各种常见C18色谱柱上的塔板数。 在10％峰高下测量塔板数，以使峰拖尾纳入在测量中。 ACE C18-PFP由于其超惰性性质而达到了最高塔板数。  

利用ACE键合相的固定相选择 分离度方程式可以确定影响分离度的参数：柱效（N）、容量因子（k）和选择性（α）。 在过去几年里，柱效和使用超高效色谱柱（被称为“UHPLC”色谱柱）作为实现分离目标的手段已得到了极大的重视。 UHPLC已通过更快速的分离和更快速的方法开发提高实验室生产力来证明了其价值。 然而，选择性往往被忽视，且其重要性也被强调柱效所掩盖。这是令人遗憾的。 在影响分离度的三个参数中，选择性是最为重要的。 （参见图1）通过利用柱效和选择性，通常可以实现更好和更快的分离。 图 1：N、α和k对分离度（Rs）的影响 提高N，α或k可以提高分离度（Rs）。 然而，从这些图中可以看出，随着N或k值的提高，对分离度的改善效果也逐渐降低。 另一方面，提高选择性（α）则没有这个问题，因此其成为开发分离方法时的最佳优化变量。 在反相色谱中，固定相与分析物之间存在多种相互作用的机制，这可以用来实现分离。 这些相互作用机制包括：疏水性结合、π-π、氢键、偶极-偶极和形状选择性。 不同类型的键合相将提供其中一种或多种相互作用机制。表1列出了ACE键合相和每种可能的主要相互作用机制，这取决于分析物和流动相条件。 表1: 比较不同键合相的分离机制/相互作用                                                                                    ACE  键合相  疏水性结合  π–π  氢键结合  偶极-偶极  形状选择性  C18  强  无  无  无  弱  C18-HL  极强  无  无  无  弱  C18-AR  强  强  中等  中等  中等  C18-PFP  强  强  强  强  强  AQ  中等  无  中等  弱  无  C8  中等  无  无  无  无  C4  弱  无  无  无  无  苯基  中等  强  弱  中等  弱  CN  弱  无  弱  强  无     利用键合相的选择性实现更好的分离。 图2表明了两种ACE键合相即C18-AR与苯基之间的选择性差异。 尽管两种键合相提供了强π-π和偶极-偶极相互作用的可能性，但是在其它可能的相互作用机制（特别是疏水性结合）的强度方面，它们存在显著差异。C18-AR可能具有其它不同的分离机制，可以为复杂的混合物带来更好的分离效果。对于其他混合物，可能不是这种情况，这是ACE键合相的优势。当开发分离方法时，ACE键合相可以提供各种可供选择的重要保留机制。非常强大且独特的C18-AR和C18-PFP相只有在ACE和ACE Excel色谱柱中可以获得。 通过利用柱效和选择性，可以实现更好的分离。图 2：C18-AR与苯基相之间选择性差异的比较  色谱柱尺寸： 50 x 2.1 mm, 3 μm流动相：A= 20mM KH2PO4,pH 2.7（溶于水中）；B= 20mM KH2PO4,pH 2.7（溶于甲醇/水中：65:35, v/v） 流速： 0.6 mL/min温度： 60 ℃检测： UV 214 nm梯度： 5分钟内从3至100%B，并持续1分钟。样品：1. 甲硝唑2. 3-羟基苯甲酸3. 苯酚4. 苯甲醇5. 咖啡因6. 水杨酸7. 喹喔啉8. 苯甲酸9. 奎宁10. 非那西丁11. 1,4-二硝基苯12. 1,3,5-三硝基苯13. 呋塞米14. 1,3,5 -三甲氧基苯15. 吡罗昔康16. 卡维地洛17. 苯甲酸乙酯18. 去甲替林C18-AR相的疏水性更大，这可以为色谱峰对（13,14）和（15,17）提供更多的保留值和更佳的选择性。还要注意C18-AR与苯基相的洗脱顺序有很多变化。图3给出了键合相选择能力的另一实例。一个分离是用C18键合相的UHPLC色谱柱完成，另一个分离是用C18-PFP键合相的UHPLC色谱柱完成。C18-PFP键合相提供的额外分离机制，使得总体分离效果更佳出色。图 3：ACE Excel可以获得卓越的分离度和峰形：药物及其相关物质的UHPLC结果  条件 色谱柱尺寸：50 x 2.1mm流动相：A = 5mM甲酸（溶于水中）B = 5mM甲酸（溶于甲醇中） 梯度：5分钟内从3至100%B流速：0.6 mL/min温度：40 ℃检测：UV 254 nm样品1. 对乙酰氨基酚2. 氢氯噻嗪3. 甲基苯基亚砜4. 甲基苯砜在C18 UHPLC色谱柱和C18-PFP色谱柱上同样快速地产生色谱图。然而，C18-PFP色谱柱可以为色谱峰对（13,14）和（15,17）提供更佳的选择性，因此能够提供优越的总体分离性能。  

1.利用ACE键合相的固定相选择 分离度方程式可以确定影响分离度的参数：柱效（N）、容量因子（k）和选择性（α）。 在过去几年里，柱效和使用超高效色谱柱（被称为“UHPLC”色谱柱）作为实现分离目标的手段已得到了极大的重视。 UHPLC已通过更快速的分离和更快速的方法开发提高实验室生产力来证明了其价值。 然而，选择性往往被忽视，且其重要性也被强调柱效所掩盖。这是令人遗憾的。 在影响分离度的三个参数中，选择性是最为重要的。 （参见图1）通过利用柱效和选择性，通常可以实现更好和更快的分离。 图 1：N、α和k对分离度（Rs）的影响 提高N，α或k可以提高分离度（Rs）。 然而，从这些图中可以看出，随着N或k值的提高，对分离度的改善效果也逐渐降低。 另一方面，提高选择性（α）则没有这个问题，因此其成为开发分离方法时的最佳优化变量。 在反相色谱中，固定相与分析物之间存在多种相互作用的机制，这可以用来实现分离。 这些相互作用机制包括：疏水性结合、π-π、氢键、偶极-偶极和形状选择性。 不同类型的键合相将提供其中一种或多种相互作用机制。表1列出了ACE键合相和每种可能的主要相互作用机制，这取决于分析物和流动相条件。 表1: 比较不同键合相的分离机制/相互作用                                                                                   ACE  键合相  疏水性结合  π–π  氢键结合  偶极-偶极  形状选择性  C18  强  无  无  无  弱  C18-HL  极强  无  无  无  弱  C18-AR  强  强  中等  中等  中等  C18-PFP  强  强  强  强  强  AQ  中等  无  中等  弱  无  C8  中等  无  无  无  无  C4  弱  无  无  无  无  苯基  中等  强  弱  中等  弱  CN  弱  无  弱  强  无     利用键合相的选择性实现更好的分离。 图2表明了两种ACE键合相即C18-AR与苯基之间的选择性差异。 尽管两种键合相提供了强π-π和偶极-偶极相互作用的可能性，但是在其它可能的相互作用机制（特别是疏水性结合）的强度方面，它们存在显著差异。C18-AR可能具有其它不同的分离机制，可以为复杂的混合物带来更好的分离效果。对于其他混合物，可能不是这种情况，这是ACE键合相的优势。当开发分离方法时，ACE键合相可以提供各种可供选择的重要保留机制。非常强大且独特的C18-AR和C18-PFP相只有在ACE和ACE Excel色谱柱中可以获得。 通过利用柱效和选择性，可以实现更好的分离。图 2：C18-AR与苯基相之间选择性差异的比较  色谱柱尺寸： 50 x 2.1 mm, 3 μm流动相：A= 20mM KH2PO4,pH 2.7（溶于水中）；B= 20mM KH2PO4,pH 2.7（溶于甲醇/水中：65:35, v/v） 流速： 0.6 mL/min温度： 60 ℃检测： UV 214 nm梯度： 5分钟内从3至100%B，并持续1分钟。样品：1. 甲硝唑2. 3-羟基苯甲酸3. 苯酚4. 苯甲醇5. 咖啡因6. 水杨酸7. 喹喔啉8. 苯甲酸9. 奎宁10. 非那西丁11. 1,4-二硝基苯12. 1,3,5-三硝基苯13. 呋塞米14. 1,3,5 -三甲氧基苯15. 吡罗昔康16. 卡维地洛17. 苯甲酸乙酯18. 去甲替林C18-AR相的疏水性更大，这可以为色谱峰对（13,14）和（15,17）提供更多的保留值和更佳的选择性。还要注意C18-AR与苯基相的洗脱顺序有很多变化。图3给出了键合相选择能力的另一实例。一个分离是用C18键合相的UHPLC色谱柱完成，另一个分离是用C18-PFP键合相的UHPLC色谱柱完成。C18-PFP键合相提供的额外分离机制，使得总体分离效果更佳出色。图 3：ACE Excel可以获得卓越的分离度和峰形：药物及其相关物质的UHPLC结果  条件 色谱柱尺寸：50 x 2.1mm流动相：A = 5mM甲酸（溶于水中）B = 5mM甲酸（溶于甲醇中） 梯度：5分钟内从3至100%B流速：0.6 mL/min温度：40 ℃检测：UV 254 nm样品1. 对乙酰氨基酚2. 氢氯噻嗪3. 甲基苯基亚砜4. 甲基苯砜在C18 UHPLC色谱柱和C18-PFP色谱柱上同样快速地产生色谱图。然而，C18-PFP色谱柱可以为色谱峰对（13,14）和（15,17）提供更佳的选择性，因此能够提供优越的总体分离性能。2.ACE和ACE Excel硅胶基质固定相几乎消除了硅醇基对色谱分离的不利影响，并且在为碱性化合物提供卓越峰形方面赢得了口碑。  峰拖尾可以降低分离度，降低灵敏度，甚至干扰准确度和精密度（图4）。  峰拖尾有许多潜在的原因，但分离碱性物质时的主要原因是硅胶固定相载体颗粒表面上的酸性硅醇基与分析物上的氨基之间的相互作用（图5）。    图 4：峰拖尾对分离度和灵敏度的影响    随着峰拖尾（Tf，拖尾因子）从1.0增加到2.0，分离度（Rs）从1.5下降到0.87。  由于峰宽增加以及峰面积保持不变，灵敏度（峰高）也随着峰拖尾的增加而下降。    ACE色谱柱采用具有极低硅醇活性的超惰性硅胶制成。  这种超纯硅胶采用专利技术进行有效键合和彻底封尾。  导致这种硅胶基质的固定相几乎消除了硅醇基对色谱分离的不利影响。  ACE色谱柱的超惰性特性使其成为分离极性碱性化合物的理想选择。  当分离复杂碱性化合物时,与其他现代碱性去活色谱柱相比，ACE色谱柱总是能给出明显更好的峰形和柱效（图6）。    图 5：峰拖尾相互作用      硅胶固定相载体表面上的酸性硅醇基可形成与碱性化合物相互作用的离子交换位点。  这种离子交换的相互作用通常可以导致峰保留（二次保留），并当采用反相HPLC分离胺类化合物时引起峰拖尾。  一种几乎消除了硅醇基对色谱分离不利影响的硅胶基质固定相    图 6：峰拖尾比较  条件 色谱柱尺寸：50 x 2.1 mm流动相：40％甲醇，60％水 流速：0.2 mL/min温度：22oC样品：吡啶    报告了碱性化合物（吡啶）在各种常见C18色谱柱上的塔板数。  在10％峰高下测量塔板数，以使峰拖尾纳入在测量中。  ACE C18-PFP由于其超惰性性质而达到了最高塔板数。    3.ACE Excel为UHPLC带来了享有盛誉的ACE HPLC性能  重要的是要认识到色谱柱的选择性和柱效是独立的变量，在开发分离方法时您不必选择使用一种而不使用另一种。事实上，为了实现最佳的总体分离效果，您应当对上述两个变量以及保留值进 行优化。当需要实现高速分离时尤其如此。（参见图7）    图 7：利用柱效和键合相选择性来开发更快的分离方法    条件： 流动相：  A = 5mM甲酸（0.189）ml / L; A = 5mM甲酸（溶于甲醇中） 柱温：40℃检测：PDA, 254nm  样品：1. 阿司匹林2. 非那西丁3. 1,3-二硝基苯4. 苯甲酸乙酯  5. 尼美舒利6. 布洛芬7. 吲哚美辛利用UHPLC色谱柱更高的柱效，可在更高的流动相流速下使用更短的色谱柱，以使这种混合物的分离时间缩短80%（相比HPLC色谱柱）。 然而，也可以通过优化键合相的选择性来进一步缩短分离时间，在这个案例中，就是利用了C18-PFP键合相所具有的增强的选择性。与C18UHPLC色谱柱、C18 HPLC色谱柱相比，ACE Excel C18-PFP UHPLC色谱柱分别将混合物的分离时间缩短了80％以上以及96％，同时保持了所有峰的极佳分离度。ACE Excel UHPLC色谱柱的设计旨在充分利用低扩散、超高压UPLC®和UHPLC仪器（高达1000 bar），并可与所有市售UPLC和UHPLC系统相兼容。ACE Excel UHPLC色谱柱可以为碱性化合物提供更佳的峰形，改善柱子与柱子之间的重现性，提供额外的利用多种分离机制的固定相，以及改善色谱柱的耐用性。ACE Excel UHPLC色谱柱的可用性意味着色谱分析师在使用UPLC和UHPLC仪器时有更多的选择来获得更好的结果。图 8：ACE Excel色谱柱提供快速、高分辨率的分离条件 色谱柱：ACE Excel C18, 2 μm, 3.0 x 50 mm流动相：60秒内从30%B至100%B A =水+ 0.1％TFA B =乙腈 流速：2.5 mL/min柱温：40oC压力：703 bar (10,335 psi)检测：PDA, 254 nm仪器：安捷伦1290 UHPLC化合物1. 乙酰苯胺2. 苯乙酮3. 苯丙酮4. 苯丁酮5. 二苯甲酮6. 苯戊酮7. 苯己酮8. 苯庚酮9. 苯辛酮  ACE Excel C18色谱柱可在不到60秒内提供这9种分析物的基线分离。4.已经证实ACE HPLC色谱柱和ACE Excel UHPLC色谱柱具有持久耐用的、可靠的日常性能和卓越的色谱柱寿命。  通过键合在硅胶固定相载体上的硅氧烷的酸化水解可以失去键合相，从而降低色谱柱的寿命。该酸水解随着流动相pH的降低和柱温的升高而增加。  与C18相相比，较短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去键合相。此外，低纯度的硅胶固定相载体和低表面覆盖的固定相载体使得一些键合相更易于酸解。 由于使用超高纯度的硅胶固定载体粒子以及键合相的极高表面覆盖，ACE键合相表现出极高的稳定性。（参见图9） 尽管所有ACE键合相的稳定性都很优异，但是一些键合相并不像其它键合相那样稳定。例如，通常认为C18键合比柱长较短的烷基相、PFP相和苯基键合相更稳定。  实际上，典型的苯基固定相稳定性不佳是该相在方法开发中不常被选择的主要原因之一。 为了解决这个问题而开发了ACE C18-AR，其允许色谱分析利用强大的π-π和偶极-偶极分离机制，并仍然享有C18相的坚固性及耐用性。  如图10所示，ACE C18-AR不仅对典型的苯基键合相具有非常优异的稳定性，它甚至还比许多其他C18键合相表现出更佳的稳定性。  类似地，ACE C18-PFP提供了多种分离机制，可以利用它们实现更佳的总体分离效果，同时从C18相的稳定性中受益。    图 9：酸稳定性，pH 1.8  条件 色谱柱：ACE 4.6 x 150 mm流动相：50% CH3CN, 50%水 流速：1.0 mL/min温度：22 °C分析物：菲  酸性暴露条件： 流动相：50% CH3CN 50% 0.1%TFA（溶于水中）（pH 1.8） 流速：1.0 mL/min温度：22 ℃      图10：加速柱稳定性研究：pH 1.9时80℃  酸性暴露条件： 流动相：5:95 MeOH/0.1% TFA（溶于水中）（pH 1.9） 流速：0.20 mL/min温度：80 ℃色谱柱尺寸：50 x 2.1mm分析物：菲      使用设计用于加速柱降解下的条件，ACE C18-AR相显示保留损失极少，其寿命相当于高度稳定的ACE C18相。两种固定相均由相同的超纯硅胶而制成，而且比Zorbax SB-C18的耐久性更好(Zorbax SB-C18曾视作在高温和低pH条件下具有极好稳定性的固定相）。 正如预期的那样，基于低纯度硅胶（Waters Spherisorb ODS2）的C18键合柱在这些加速条件下寿命大大降低。 特别值得注意的是常规苯基色谱柱与ACE C18-AR的寿命比较结果。与ACE C18-AR相比，尽管使用高纯度二氧化硅，苯基色谱柱的寿命仍降低，这表明ACE C18-AR可能适用于那些使用苯丙基色谱柱寿命短的应用。    将HPLC和UHPLC连接到通常被称为LC-MS的质谱仪上已经相当普遍。  然而，质谱对可能从HPLC/UHPLC色谱柱上洗脱下来的微量的键合相（称为柱“流失”）非常敏感。柱  流失可能会干扰分析结果，并且重要的是，LC-MS应用中所选择的色谱柱具有足够稳定的键合相以避免过量的柱流失。  图11表明ACE C18-PFP色谱柱几乎没有“流失”干扰LC-MS分析。  C18-PFP（以及ACE C18和ACEC18-AR）的稳定性使得这些色谱柱更适合LC-MS应用。    图 11：ACE C18-PFP色谱柱的低柱流失使其成为LC/MS应用中的理想选择  条件 色谱柱尺寸：50 x 3.0 mm流动相：梯度：在5分钟内从5至95% B，95% B时持续5分钟A: 0.1％甲酸(溶于水中)B: 0.1％甲酸(溶于乙腈中)流速：0.43 mL/min温度：60oC检测：安捷伦1100 MSD ESI正离子快速扫描模式,快速扫描全50 – 1000 m/z样品：空白运行      柱流失可能会干扰LC-MS应用中目标分析物的检测和测量。  ACE C18-PFP色谱柱未显示柱流失。  所有ACE色谱柱的低流失特性使其非常适合LC-MS应用。  UHPLC色谱柱可能缺乏耐用性。加上入口筛板堵塞的可能性，您可能面临色谱柱的耐用性不如HPLC色谱柱的问题。    ACE Excel色谱柱非常宽容，并提供您期望从HPLC色谱柱中获得的相同耐用性和使用寿命。    ACE Excel将改变您对UHPLC色谱柱耐用性的看法。  ACE Excel色谱柱不仅填装的更好，还采用了专利的入口筛板设计，使其比其它UHPLC色谱柱更不容易被堵塞。  仍建议您像使用任何UHPLC色谱柱一样过滤样品和流动相，但ACE Excel色谱柱比其他UHPLC色谱柱更为宽容，并提供与HPLC色谱柱相同的耐用性和使用寿命。    图 12：ACE Excel色谱柱在耐用性方面有良好的口碑    将2.1×100mm ACE Excel C18 UHPLC色谱柱在平均1,000 bar（14,500 psi）压力下进行2000多个梯度的运行。  在该稳定性研究结束时，柱效（塔板数）和保留时间基本保持不变。    5.ACE Excel色谱柱具有口碑卓越的可重现性。  柱子与柱子之间的可重现性受硅胶固定相载体的生成、固定相与固定相载体的键合以及色谱柱中固定相的填充的影响。  在色谱柱的制备过程中，每个阶段被控制得越好，色谱柱的可重现性和质量则越好。ACE色谱柱在色谱柱制备过程中的每个阶段均得到了全面控制。  这些控制措施确保ACE色谱柱在柱间以及批次之间产生可靠且可预测的性能。  图13提供了典型批次验证测试的实例。  硅醇活性的细微变化是柱子与柱子之间选择性变化的主要原因之一。  ACE和ACE Excel色谱柱由于使用超纯试剂和严格的制造工艺控制（可以获得具有均一表面特性的高纯度硅胶固定相载体）而具有出色的可重现性。  将这种高纯度硅胶与先进的键合技术相结合，可以产生一系列高惰性的固定相，这些固定相几乎消除了色谱中的硅醇干扰，从而提供卓越的柱子与柱子之间的可重现性。     6.ACE色谱柱可以提供从UHPLC到HPLC再到制备型HPLC的易扩展性。    相同的质量控制，可以确保不同批次色谱柱的高重现性，也可以保证您更容易地在UHPLC和HPLC方法之间进行转换，或需要分离和纯化目标化合物时放大到制备应用上。  柱效当然会改变，但可以预料的是，谱带间距（选择性）将相同。  图14阐明了当使用相同的ACE键合相但不同粒径填充的色谱柱进行操作时，可以预见到分析物一致的谱带间距类型（选择性）。  图 14：将ACE固定相从UHPLC（2μm）扩展到HPLC（3μm和5μm）再至制备型HPLC（10μm）时，选择性得到了保留与保证。条件 流动相：35:65 MeCN/0.1%TFA（溶于水中） 温度：22 ℃波长：254 nm分析物1. 尿嘧啶2. 4-羟基苯甲酸3. 乙酰水杨酸4. 苯甲酸5. 2-羟基苯甲酸6. 对羟基苯甲酸乙酯  试验样品的这些色谱图在填充有相同的键合相但不同粒径的色谱柱上以相同的流动相条件运行，结果阐明分离从UHPLC扩展到HPLC再到制备型HPLC的容易程度。当使用ACE Excel UHPLC色谱柱进行快速方法开发，且该方法必须可转移到HPLC时，易扩展性则显得特别有价值。图 15：ACE固定相可以提供相同的选择性，无论它们是UHPLC、HPLC还是制备型HPLC色谱柱条件 色谱柱：2.1 x 50 mm流动相：1.4分钟内从30% B至90% B A = 20mM甲酸铵+ 0.1％甲酸B =乙腈+ 0.1％甲酸 梯度：在30％B时持续0.30分钟，在1.10分钟内从30至90％B，在90％B时持续0.40分钟 流速：0.5 mL/min柱温：30oC检测：AB Sciex Triple Quad（TM）5500 MS，以ESI（+）模式运行 仪器：岛津Prominence UFLC系统分析物1. 甲苯咪唑2. 普罗替林3. 阿米替林4. 洛哌丁胺  试验样品的这些色谱图在ACE Excel C18 2μmUHPLC色谱柱、ACE C18 3μmHPLC色谱柱和ACE C185μm色谱柱上以相同的流动相条件运行，结果阐明ACE固定相的选择性一致，无论填充粒径如何。这使得从UHPLC到HPLC或HPLC再到UHPLC的方法转移更加容易。同时也使得从分析型应用扩展到制备型应用更加容易。  

10种固定相 3种孔径 5种粒径 11种标准柱长 12种标准柱内径 C18 | C18-AR | C18-PFP | C18-HL | AQ | C8 | C4 | 苯基 | CN | SILCA 90? | 100? | 300? 2 μm | 3 μm | 5 μm | 10 μm | 15 μm 300 mm |250 mm | 200 mm 150 mm | 125 mm |100 mm 75 mm | 50 mm | 35 mm 30 mm | 20 mm 0.075 mm | 0.10 mm | 0.30 mm     0.50 mm  |  1.0 mm |  2.1 mm      3.0 mm | 4.0 mm | 4.6 mm 10.0 mm | 21.2 mm | 30.0 mm 利用这些键合相所提供的5种不同 分离机制，实现样品中所有色谱 峰对的最佳选择性。 将固定相载体与分析物的分子大小匹配。对于肽和蛋白质，可选择 300? 孔径。对于小于5000道尔顿的分子，可选择 100? 孔径。此外，还可根据您的特定分离需求来优化色谱柱的疏水强度和负载容量。90?孔径的C18-HL固定相可以提供适合更高负载容量的更大表面积。 选择适合UHPLC、HPLC或制备型HPLC的粒径。 在分析时间、分离度与峰容量之间找到适当的平衡。长度查询未列出。 体验ACE毛细管色谱柱到制备型色谱柱的性能。

ACE HILIC法开发平台和工作实例图17显示了HILIC方法开发的流程图。 一般方法是：收集分析物相关的信息（如果已知的话），针对三个ACE HILIC相（用三款不同的ACE HILIC色谱柱在不同的pH洗脱液条件下）执行梯度或等度HILIC筛选实验（取决于样本分析物的亲水性范围），然后再优化色谱法以达到可接受的HILIC法。 表1中列出了ACE HILIC筛选条件。 这些设计旨在探索广泛的选择性范围，以及为达到所需分离提供一个良好的起点。 图17 ACE HILIC 方法开发流程图 表1 ACE HILIC筛选实验的条件 参数                            备注  色谱柱  ACE HILIC-A,  ACE HILIC-B and ACE HILIC-N, 150 x 4.6 mm, 5 μm  梯度流动相  A：10 mM甲酸铵（溶于MeCN/H2O中）（94:6 v/v）  B：10 mM甲酸铵（溶于MeCN/H2O中）（50:50 v/v）甲酸铵的pH值为：3.0、4.7或6.0.           梯度筛选  时间                                               %B  0  0  15  100  20  100  21  0  41  0  等度流动相  10 mM甲酸铵（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v）甲酸铵的pH值为：3.0、4.7或6.0.  流速  1.5 mL/min  温度  25 °C  检测  取决于样本（视样品而定）   ACE HILIC色谱柱保存方法 使用之后，ACE HILIC色谱柱应使用体积比为7:3的乙腈和水进行冲洗，清除掉所有的缓冲盐。 然后，使用100%的异丙醇、以更低的流速进行冲洗，以便贮存。应往回拧紧色谱柱端盖（拧紧色谱柱端盖），并将色谱柱放回盒内。 每次分析运行之后，除非第二天要使用，否则建议采用密闭法（按长期保存的方法）清洗色谱柱，然后用异丙醇冲洗。 实例1 – 咖啡因和相关化合物 方法开发中所需的咖啡因和四种相关化合物（可可碱、茶碱、次黄嘌呤和黄嘌呤）这些化合物都是极性的中性物质，其中负log P值表示合理的亲水性（log P为负值明确的表明其亲水性），因此适用于HILIC（图18）。图18咖啡因和相关物质的结构和log P数据 咖啡因和相关化合物在pH为3-6的情况下不可电离，因此洗脱剂的pH几乎不会直接影响分子。为此，选择pH 3.0和4.7。固定相会受洗脱剂pH变化的影响，这可能是有利的一面。固定相的电离变化将影响粒子周围的水合层，这会影响分析物分散到相中（分配在固定相上）或形成氢键的程度。因此，在pH3.0和pH4.7的情况下对三个固定相进行筛选，结果如图19中所示。 新的ACE HILIC色谱柱使用60倍柱体积相互平衡（平衡），以在粒子周围形成水合层。表1中显示了流动相、梯度和温度。 筛选结果显示：三个固定相与两个pH值之间观察到一些选择性差异（三个固定相在两个pH值下的筛选结果可以看出彼此间具有选择性的差异）。基于筛选数据的最有效分离是针对pH为3.0下的（pH为3.0下的）ACE HILIC-N相。这些数据选择（选定这些条件）用于进一步优化。图19 ACE HILIC色谱柱的梯度筛选 条件如表1中所述，275nm条件下的检测除外。进样25mg/mL的咖啡因混合物2μL（使用pH3.0和pH4.7的甲酸铵，以0.5%w/w的比例混合相关物质和MeCN/H2O（90:10 v/v）） 样本：1) 咖啡因2) 茶碱3) 可可碱4) 黄嘌呤5) 次黄嘌呤较早洗脱峰的保留窗口（时间段）非常窄，这表示：等度HILIC可用于分离分析物。（等度方式的HILIC可以被用于分离这些化合物）10mM甲酸铵，pH3.0（溶于MeCN/H2O中）（94:6 v/v）被选为等度条件（图20）。在这些条件下，峰4和5要保留得更多（好），但峰2和3仍未解析出（被分离）。 根据梯度运行的结果，乙腈含量更高似乎不会提高峰2和3的解析度（高的乙腈含量没有提高2与3峰的分离度），所以梯度HILIC分析得到改善（所以梯度分析是对混合物分离有更合适的，温度将被研究），从而开发出最终方法，如图21所示。图20 ACE HILIC-N相中咖啡因和相关化合物的等度分析 ACE HILIC-N相中咖啡因和相关化合物的等度分析 色谱柱：ACE 5 HILIC-N，150 x 4.6 mm流动相：10 mM甲酸铵，pH3.0（溶于MeCN/H2O中）（94:6 v/v） 流速：1.5 mL/min温度：25 °C检测：UV, 275 nm进样：2 μL样本：1) 咖啡因2) 茶碱3) 可可碱4) 黄嘌呤5) 次黄嘌呤温度的降低会提高茶碱与可可碱之间的解析度（分离度），因此，最终方法（图21）被认为适合其用途。图21最终开发方法： 色谱柱：ACE 5 HILIC-N，150 x 4.6 mm流动相：A = 10mM甲酸铵（pH3.0）溶于MeCN/H2O中（96:4 v/v）中 B = 10mM甲酸铵（pH3.0）溶于MeCN/H2O（1:1 v/v）中 梯度：0-100%B在15分钟内，100%B持续5分钟，下一次进样维持在起始条件20分钟 流速：1.5 mL/min温度：15 °C检测：275 nm进样：2 μL实例2 – 肌酸和肌酐 肌酸（图22）是使用甘氨酸和精氨酸合成的氨基酸。它在为体内细胞提供能量方面起着重要作用（在体内主要用于为细胞供能），并形成（生成）副产品肌酐。测定血液中的肌酐，确定肾功能是否正常，其中肌酐水平的增加表示肾可能不会完全过滤废物。（升高表明肾的过滤废物的功能有所降低）图22结构和log P肌酸和肌酐数据 图23使用pH为3.0、4.7和6.0的甲酸铵对ACE HILIC范围的等度筛选对比 样本：1) 肌酐2) 肌酸在三种pH值条件下，利用等度条件对三个HILIC固定相的两种分析物进行筛选。结果表明：肌酐在三个ACE HILIC相中被适当地保留，但由于过度保留的原因，肌酸在合理的时间内没有洗脱。根据图17中的流程图，过度保留窗口表示梯度（宽时间段表明梯度方法）可能更适宜。 图24 ACE HILIC-A相下的最终方法ACE HILIC-A在pH3.0下选择，进行梯度分析。标准梯度在10分钟内析出两种目标分析物，并且解析度很高（分离度很高）（数据未显示）。因此，这使得梯度时间进一步减少（这种情况下可以使梯度运行时间进一步减少），从而缩短了整体运行时间。最终方法如图24中所示。 色谱柱：150 x 4.6 mm, 5 μm流动相：A：2 mM甲酸铵（pH3.0）溶于MeCN/H2O（90:10 v/v）中B: 2 mM甲酸铵（pH3.0）溶于MeCN/H2O（50:50 v/v）中 梯度：5-55%B，在10分钟内 流速：1.5 mL/min检测：230 nm进样：5 μL样本：1) 肌酐2) 肌酸结论 HILIC是一种用于多用途的极性分析物色谱分析法（对于极性化合物来说是一种通用的色谱分析模式）。 这种方法比较复杂，但如果遵循简单规则，则可实现可再现的HILIC方法（HILIC方法是可以重现性的）。 三个ACE HILIC相（固定相）设计用于HILIC方法开发期间研究选择性，并尽可能快地提供实现所需分离的选项。 ACE HILIC方法验证协议（规程）已成功用于开发一系列的HILIC方法，应为HILIC方法开发活动提供一种结构化的方法。  

HILIC法平衡时间在RPLC模式下，可再现保留所需的典型柱平衡约为10倍柱体积。 图14中可清楚反映这一点 但是，对于HILIC分离则不同。通常，HILIC色谱柱的平衡时间比RPLC色谱柱的更长。 这是该技术的一个特点，也是可再现保留所必需的。 在固定相粒子周围建立和形成稳定的水合层对可再现HILIC色谱法很重要（HILIC色谱法的重现性至关重要）。 所花费的时间也因相位（固定相）特性、洗脱剂和分析物而各有不同，因此取决于具体应用。 下面的指导原则可用作近似法（近似的参考）。 重要的是：在HILIC方法开发中，平衡将作为各项分离的一个参数进行研究（对于每一个成熟的分离方法，在HILIC方法开发时，平衡时间都将作为一个参数进行研究）。 对于全新的未使用色谱柱，建议使用60-80倍柱体积，以在最初建立HILIC所需的水层。 图14 RPLC和HILIC模式中达到全新未使用色谱柱所需的柱体积数的对比 一旦建立水层，可实现可再现（重现性）和一致的保留和色谱法（可实现色谱方法的重现性，一致的保留时间）。 运行完成后，应清洗色谱柱并根据第9节中相关指导说明储藏。 对于色谱柱第二次以及之后的每次运行，建议只采用20倍柱体积，以达到稳定的保留次数（时间），见图15。 图15 HILIC模式中第二次及随后每次分析达到平衡所需的柱体积数对比 色谱柱：ACE 5 HILIC-A, 100 x 3.0 mm流动相：10 mM甲酸铵，pH4.7（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：0.43 mL/min温度：25 °C检测：UV, 214 nm样本：1) 2’-脱氧鸟苷2) 4-羟基苯甲酸3) 沙丁胺醇 梯度HILIC平衡 同时，ACE HILIC相也可以使用可再现梯度HILIC法（ACEHILIC色谱柱也可重现HILIC方法的梯度洗脱）。 经确定，两次进样之间大约需要10倍柱体积。两次进样之间的平衡时间低于新色谱柱所需的时间，因为只需要重新建立起始条件。 新色谱柱需要平衡，以在固定相颗粒上形成水合层（而新色谱柱需要长时间平衡，是因为需要在固定相颗粒上形成水合层）。 图16显示了两次进样之间使用20倍柱体积平衡情况下，两次连续进样梯度HILIC分析的极佳保留再现性。  

ACE HILIC色谱柱检测器兼容性HILIC是一种能很好兼容众多主流检测器的技术。因此，检测的（检测器的）选择受检测器可用性、所需的检测限制和分析物的理化特性（即：具有发色团或电荷）等综合因素的影响。 UV-Vis检测器 UV-Vis检测器是分析试验室中最常见的检测器之一。 根据仪器的不同，一次可记录多个波长，以优化分析物覆盖范围。 有时，混合物中的分析物可通过参考紫外光谱库来快速识别。 图10中的例子示出了五种β受体阻滞剂的分离，这些阻滞剂可通过他们不同的图谱清楚识别（识别清楚）。 图10五种β受体阻滞剂的色谱图和紫外光谱 色谱柱：ACE 5 HILIC-N，150 x 4.6 mm流动相：10 mM甲酸铵pH3.0（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5 mL/min温度：25 °C检测：UV, 214 nm样本：1) 普萘洛尔2) 醋丁洛尔3) 索他洛尔4) 沙丁胺醇5) 阿替洛尔 折射率检测器 示差折光测器（RID）测量当通过检测器时分析物峰相对参考溶剂（即流动相）的折射率。如果这二者之间存在差别，色谱图中可观察到峰。 RID对缺乏活性发色团的分析物很有用，尤其常用于糖分分析。RID存在几个方面的劣势。这些劣势包括灵敏度受限和没有峰相关的信息（峰的身份通常需要单独的标准来验证）。 此外，RID只能用于等度条件，因为洗脱剂（洗脱剂组成变化）会改变折射率响应。 作为物理测量，折射率也很受温度的影响，也就是说，基线噪声和再现（重现）性会发生变化。 蒸发光散射检测器 蒸发光散射检测器（ELSD）通过如下方式工作：从LC上喷射输出洗脱液与惰性气体（通常为氮气），以形成液滴在加热室内去溶剂化。 去溶剂化后的分析物被分散的光源击中，然后进行检测（喷射出惰性气体来雾化从LC中输出的洗脱液，形成液滴后在加热管中蒸发，去溶剂的分析物被分散的光源击中然后进行检测）。 探测器（ELSD）需要挥发性洗脱剂，以使HILIC非常适合（HILIC方法就非常适合这款检测器）。ELSD是RID有效的替代选择，因为它非常适合非（无）发色团分析物，灵敏度更高，并且适用于梯度色谱法。 但是，ELSD不提供光谱信息，因此在没有标准的情况下，较难识别峰值（峰的识别很困难）。 对于HILIC分离（分析物），ELSD对发色团有限（有限发色团）的极性分析物更有利，例如甲基丙二酸（MMA）和琥珀酸（图11）。 MMA用作维生素B12缺乏症的生物标志，但琥珀酸与MMA等压（元素相同），因此必须彻底解决以防止假阳性结果。 采用ELSD的HILIC法，其MMA量化比紫外线检测法更好。 图11甲基丙二酸和琥珀酸的色谱图 色谱柱：ACE 5 HILIC-B, 150 x 4.6 mm流动相：10 mM甲酸铵pH3.0（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5 mL/min温度：25 °C检测：ELSD样本：1) 琥珀酸2) MMA 质谱仪 质谱仪（MS）是LC分离中信息最丰富的检测技术。 LC的洗脱剂流通常使用惰性气体（如氮气）去溶剂化（LC流出的洗脱液在加热管中被惰性气体去溶剂化），并在检测前电离。 可使用不同的质谱分析仪，如：四极质谱仪、飞行时间质谱仪、离子阱质谱仪等。有机物含量较高的HILIC洗脱剂特别适合MS检测。 有多个电离源可用，根据具体应用进行选择。 喷雾电离质谱（ESI）很常用，但也使用电晕放电和光电离源。MS具有高度专一性，因为可利用选择性离子检测（SIM）进行跟踪（因为可以使用选择离子性监测来跟踪单个物质的荷质比（m/z），得到更好的选择性），提高灵敏度。MS还可以在不同质量范围内执行扫描，这对未知的样本（样品）很有帮助。 但是，MS扫描通常灵敏度小得多。（具有更小的灵敏度。） MS可用于检测发色团较弱或者没有发色团的分析物。 作为一种识别工具，MS对HILIC应用也很有帮助，这种应用中分析物具有相似的紫外光谱特性，但质量不同（在HILIC应用中，当分析物具有相似的紫外光谱特性，但质量不同，MS是很有用的识别工具）。 核酸碱基和核苷就是一个很好的HILIC例子。极性分析物腺嘌呤、腺苷和2’-脱氧腺苷的紫外光谱非常相似（图12）。 图12腺嘌呤、腺苷和2’-脱氧腺苷的紫外光谱对比 蓝色轨迹：腺嘌呤 红色轨迹：腺苷 绿色轨迹：2’-脱氧腺苷 色谱柱：ACE 5 HILIC-N，150 x 4.6 mm流动相：10 mM甲酸铵，pH4.7（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5 mL/min温度：25 °C检测：UV进样量：2 μL MS可利用这些分析物不同的质荷比进行检测和识别峰（图13）。SIM用于提高灵敏度。 图13利用UV和MS联合检测法分析ACE HILIC-N的腺嘌呤和核苷 （a）下列物质的紫外光色谱图：1) 2’-脱氧腺苷（m/z 252.4）2) 腺嘌呤（m/z 136.1）3) 腺苷（m/z 268.3）(b) 通过MS SIM确认峰 色谱柱：ACE 5 HILIC-N，150 x 4.6 mm流动相：10 mM甲酸铵，pH4.7（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5 mL/min温度：25 °C检测：UV，254nm和MS  

HILIC流动相HILIC模式中用作流动相的溶剂类似于RPLC模式下所用的溶剂。 流动相条件是各种HILIC保留机制的关键因素。 通过改变洗脱液中有机组分和水组分的比例，可以改变分析的保留率。 在HILIC模式下，保留因子建议保持在1.5-10之间。 有机改性剂 HILIC中最常用的有机改性剂是非质子溶剂乙腈。 乙腈作为较弱的洗脱溶剂与水结合使用（见图5）。 与RPLC不同，增加流动相中的有机物含量百分比，可增大分析物的保留率。 乙腈具有粘度（粘度低）和紫外线切断（截止波长）较低等优点。 由于能够干扰固定相周围的水层，所以散装（主体）溶剂中通常要避免甲醇等质子溶剂。 这些溶剂可以形成氢键，从而破坏分析物分散（分配能力）。 但是，也存在极性溶剂（如甲醇和2-异丙醇（IPA））与水性部分结合使用以影响分离选择性的各种情况。 如果所有其它参数不能实现足够的分离[6]，这通常作为最后的方法来使用。 洗脱剂pH值 洗脱剂的pH值对于方法开发来说是一个有用的参数。 如果pH值高于或低于可电离物质的pKa，则分析物的电离状态会发生改变，反过来会影响它的亲水性。 因此，这会影响（影响可电离分析物）与固定相的潜在相互作用，并且还会影响保留。 此外，pH值也会影响固定相表面的极性，进而影响到保留机制。 了解分析物的pKa非常有助于pH选择。若可能的话，建议与pKa相差2个pH单位，以达到特定的方法稳定性。对于酸性物质，低于pKa将使分析物主要以非电离状态存在。 在酸性分析物pKa的2个pH单位以上将使大部分分析物电离。对于碱性物质，正好相反。 为了进行方法开发，建议对（在）三种不同pH值条件下各种（用三款）ACE HILIC色谱柱的（对）混合分析物进行评估：pH 3.0、4.7和6.0。这种方法探索了不同洗脱剂pH值条件下使用不同固定相时的选择性差异，而且经证明对HILIC方法开发是有效的。 例如，ACE HILIC-A相中，在pH为3.0、4.7和6.0的等度条件下，分析了包含酸性物质和中性物质的混合物（见图6）。所有其它条件都相同。 保留和洗脱顺序的差异（即选择性差异）可清楚地看出，这一单个HILIC相的pH值不同。 图6 ACE HILIC-A相中，不同流动相pH值下六种极性分析物的分析中性物-绿色酸-红色 色谱柱：150 x 4.6 mm, 5 μm流动相：10 mM甲酸铵（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5 mL/min检测：UV, 254 nm温度：25 °C进样：5 μL样本：1) 4-氨基苯甲酸2) 4-羟基苯甲酸3) 烟酰胺4) 扁桃酸5) 腺嘌呤6) 2’-脱氧鸟苷缓冲液浓度 HILIC中可使用各种缓冲盐，但缓冲盐必须可溶解于高有机物含量的（含有高比例有机物的）洗脱剂中。 这就排除了像磷酸盐这样的无机缓冲盐。 甲酸铵缓冲盐比较适宜，因为它们在低pH范围内具有缓冲能力，并在高乙腈含量的洗脱剂中具有良好的溶解性。 HILIC的缓冲液浓度范围通常为2-18mM。缓冲液浓度对保留率和选择性的影响取决于分析物和固定相的特性。 例如，图7显示了pH为3.0时，通过ACE HILIC-A固定相，甲酸铵缓冲液的浓度对三（三种）组分（极性的酸性、碱性和中性分析物）混合物分析物保留率（保留）的影响。 洗脱剂浓度低（洗脱剂的低pH）意味着：酸吡哆醛（峰1）以离子抑制或中性的形式存在。胞啶（峰2）是一种极性的中性分析物。 普鲁卡因胺（峰3）是一种带电的极性碱。在ACE HILIC-A相的这些条件下，极性碱的保留率显著下降，而（随着）缓冲液浓度增大（随着缓冲液浓度增大，极性碱的保留率显著下降）。 极性碱很可能主要是通过与带电酸性固定相进行离子交换的方式来保留。 缓冲强度的增加会使（与）碱性分析物形成竞争，并且保留率随后会因离子交换机制的耗尽而减小。 图7缓冲液强度对分析物保留率的影响 色谱柱：ACE 5 HILIC-A,150 x 4.6 mm流动相：甲酸铵，pH3.0（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5 mL/min检测：UV, 254 nm温度：25 °C进样：5 μL样本：1) 吡哆醛2) 胞啶3) 普鲁卡因胺 样品稀释液 HILIC模式下，由于分析物溶解性以及稀释液与HILIC洗脱剂不匹配等问题，通常较难选择合适的样本（样品）稀释液。 选择优化不足的稀释液会大大降低色谱性能和峰形。 通常，样本稀释液对各种分析物的影响不一样，并且这种行为因固定相的选择和洗脱剂的条件而存在差异。 因此，对样本稀释液的优化往往是针对特定应用的研究。 一般来说，建议增量为20%，缓冲比介于20%到80%之间（建议20%的乙腈增量让其处于缓冲比20%-80%之间来探索样品稀释方法）。 例如，图8（第16页）显示了pH为3.0时，三个ACE HILIC相中的每一个相（固定相）上酸性、碱性和中性分析物的峰形，其中研究了样本（在这三个固定相上的研究样品）稀释液乙腈（MeCN）的百分比。 通常，次黄嘌呤（极性中性）的峰形会随着所有ACE HILIC相有机浓度的增大而改善。 然而，分析物未能在100%的乙腈中溶解。 这种分析物最有效的样本（样品）稀释液是60-80%的乙腈。 在样本稀释液中乙腈浓度较低的情况下，酪胺（碱性分析物）显示了ACE HILIC-B相和ACE HILIC-N相的分裂峰。 然而，这种效果对ACE HILIC-A并没有那么明显，峰形仍然很差。 对于60%以上的乙腈，所有ACE HILIC相的峰形都有改善。 扁桃酸的峰形通常不受ACE HILIC-B和ACE HILIC-N的样本（品）稀释液的影响。但是，对于ACE HILIC-A，有机浓度较低时峰形较差。 根据这个数据集，对于该HILIC应用，建议使用60-80%的乙腈样本（样品）稀释液。 对于各HILIC应用，建议进行此类系统研究。 如果可能的话，最好采用较高浓度的分析物和较小的进样量。 这样可尽量减少（尽可能减少）对吸附水层的破坏。 样本（样品）溶解性与样本（样品）浓度之间的平衡（权衡）始终具有挑战，尤其是对于HILIC而言。 图8（a）ACE HILIC-A相（b）ACE HILIC-B相和（c）ACE HILIC-N相中样本溶液对次黄嘌呤、酪胺和扁桃酸的色谱峰形的影响。 色谱柱：150 x 4.6 mm, 5μm 流动相：甲酸铵，pH4.7，（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5mL/min 温度：25 °C 检测：UV, 254 nm 进样：5 μL 温度 温度是方法开发中一个很有用的参数。 温度对保留的影响程度取决于固定相和分析物二者。例如，分析物的pKa可能随着温度的变化而变化，从而影响电离和保留的程度。 据记载，对于HILIC，随着温度的升高，保留率有可能同时增加和减少，如图9中所示，分离出极性的酸性、碱性和中性分析物（极性的酸性、碱性和中性分析物的分离）。 在HILIC方法开发中，建议不要将温度作为优化选择性和分离的主要参数。 与色谱柱化学特性、有机物含量百分比或洗脱剂pH值等参数相比，在HILIC模式下它能改变保留率（保留的作用微弱）。 图9下列相中温度对酸性、碱性和中性分析物混合物的分析物保 留率的影响: (a) ACE 5 HILIC-A (b) ACE 5 HILIC-N (c) ACE 5 HILIC-B色谱柱：150 x 4.6 mm流动相：10 mM甲酸铵，pH4.7（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5 mL/min检测：UV, 230 nm进样：5 μL样本：1) 4-羟基苯甲酸2) 沙丁胺醇3) 2’-脱氧鸟苷4) 色氨酸  

HILIC分离机制HILIC是一种复杂的分离技术，通过多种相互作用模式来实现保留。 这些相互作用的权重（中哪种是主要作用）是基于固定相、流动相和分析物的理化特性。 为了得到可靠和稳健的HILIC方法，了解潜在的不同相互作用（了解可能存在的不同相互作用）是很有帮助的。 这样可以为待进行的方法开发合理选择色谱柱和条件。（这样可以为方法开发的色谱柱和条件做出合理的选择）HILIC中的流动相通常包含大量的乙腈（>70%）以及至少3%的水。 水性组分使得极性固定相周围存在亲水环境，并且形成吸附水层以便分析物分散（分配）。 主要的HILIC保留机制包括： 分析物分散（分配）到吸附水层，各种极性相互作用和静电（即离子交换式）相互作用（参见图3）。 如果将极性分析物通入（极性分析物进入）HILIC环境中，则可使用这些保留机制中的任意一种（则物质的保留可能是任何一种机制作用，也可能是所有机制同时作用）。 图3潜在HILIC保留机制图示 极性分析物通常包含能够与其它极性基团相互作用的各种基团，如：固定相上的基团。极性相互作用包括氢键和偶极-偶极与其它基团的相互作用。带 电分析物也可以进行静电或离子交换式相互作用，其中分析物可以被固定相吸引或排斥。 例如，一个带负电的或酸性的分析物会被带负电的（即酸性的）固定相排斥。 但是，带正电的或碱性的分析物可被带负电的（酸性的）固定相保留，反之亦然。 ACE HILIC色谱柱固定相： 过去，许多HILIC固定相都采用非键合硅胶。 这些酸性相提供了必要的相（固定相必要的）极性，以在（使其能）HILIC模式中与高有机物含量洗脱剂很好地相互作用。 非键合硅胶相很有（好）用，所以仍在广泛使用。 最近，在市场上已经可以买到专门用于HILIC环境的各种键合相（固定相）。 这些新的极性键合相根据相（固定相的）特性可分为很多种，包括酸性的、碱性的、中性的和新型的化学相。 ACE HILIC组合目前包括酸性的、中性的和碱性的固定相。 这些相已被证实可相互提供不同的选择性。 这些（三款）ACE相（固定相）彼此提供了替代选择性，可参见图4.九种组分混合物中的中性和带电分析物，在相同条件下，对三种不同的ACE HILIC相（在三款不同固定相的ACE HILIC色谱柱上）显现出不同的保留和洗脱顺序。 这清楚地表明：HILIC模式下各ACE HILIC固定相之间存在选择性差异，使得这三种色谱柱成为HILIC方法开发的理想选择。 图4 ACE HILIC固定相范围内洗脱顺序的对比 色谱柱：150 x 4.6 mm, 5 μm流动相：10 mM甲酸铵，pH4.7（溶于MeCN/H2O中）（90:10 v/v） 流速：1.5 mL/min温度：25 °C检测：UV, 254 nm样品：1) 对氨基苯甲酸2) 4-羟基苯甲酸3) 烟酰胺4) 醋丁洛尔5) 腺嘌呤6) 扁桃酸7) 酪胺8) 阿替洛尔9) 2’-脱氧鸟苷 ACE HILIC-A相 ACE HILIC-A相能形成负电荷，并显示出高（强）阳离子交换能力。 带电的碱基（碱性物质）对ACE HILIC-A相进行（产生）静电吸引，而带电的酸性物质则被排斥。ACE HILIC-A相的带电程度取决于流动相的pH值。 ACE HILIC范围的推荐pH限值为pH2.0到pH7.0。 通过增大pH值，固定相上的负电荷将变得更明显，从而保留更多的阳离子分析物。 ACE HILIC-N相 中性ACE HILIC-N相对阴阳离子都显示出较低的离子交换能力。 ACE HILIC-N相的保留机制包括极性相互作用、吸附和一定程度的分散（分配能力）。 ACE HILIC-B相 ACE HILIC-B相具有合理的阴离子交换能力，从而可保留酸性分析物，同时碱性分析物将被排斥。 与ACE HILIC-A相似，pH值可影响固定相的电荷，因此可减弱或增强该相的正特性（该相的正电荷特性）。 

引言 亲水作用色谱（HILIC）采用与反相液相色谱（RPLC）类似的洗脱液，为亲水性或极性到（至）极性很强的分析物提供了适宜的保留和分离替代方法（适宜的保留和分离提供了替代方法）。RPLC的特征在于保留较少或无保留，所以这类亲水性分析物（log P 值约为零或更小的那类分析物）的保留是一种挑战（这些亲水性的分析物（log P 值约为零或更小的那类分析物）的保留对于RPLC是一个挑战，因为用反相色谱方法这些分析物只具有很少的保留或者没有保留）。ACE HILIC色谱柱为亲水性分析物提供了RPLC的替代选择，无需使用诸如离子对试剂等添加剂。 多年来，比较常见的是采用高有机物含量的洗脱剂与水性组分结合使用（采用高有机含量的洗脱剂与水性组分结合是常见的HILIC方法），但HILIC一词最早是在20世纪90年代[1]首次被提出用来代表极性分析物保留和分离所用的富含有机溶剂的洗脱剂（描述富含有机溶剂的洗脱剂用来保留和分离极性分析物）。 作为一种技术，HILIC已经应用到了几乎所有的色谱应用领域，并且经证明可有效用于临床分析、食品和饮料应用、以及制药行业和蛋白质组学，这些领域中，极性到（至）极性很强的分析物的保留和分离仍然是一项挑战。色谱法所用HILIC的主要优势 HILIC可对极性到极性很强的分析物进行（提供）保留 作为一般的实用经验法则，如果RPLC模式下分析物在咖啡因之前洗脱（log P~零（约为0）），则可能更适合HILIC分离模式。 如果RPLC模式下分析物在咖啡因之后洗脱，则更适合RPLC。 图1示出了（表示）一种含有草甘膦（log P = -2.39）、咖啡因（log P = -0.13）和阿米替林（log P = 4.90）的混合物的RPLC梯度色谱图。 图1的顶部显示的是一个近似值，HILIC和RPLC模式可在log P尺度内运行和重叠（显示在Log P尺度下HILIC和RPLC模式操作和重叠的一个近似位置）。 很明显，极性很强的分析物草甘膦会在RPLC模式下的柱头塌陷附近洗脱，并且（表明）它非常适合HILIC。RPLC模式可保留咖啡因（咖啡因可以使用RPLC模式），但也可使用HILIC。RPLC与HILIC之间的重叠区域常常会引发讨论，因为两种模式都具有优势：选择通常都是由应用导向（已有应用决定）。 阿米替林是最适合RPLC的疏水性分析物（疏水性分析物最适合用RPLC）。 如果分析物的log P特性未知，运行在RPLC模式（如图1所示）下的广泛搜索梯度常常可以帮助确定近似分析物的（的分析物）亲水性/疏水性，同时可指示最适合的分离模式。 图1 HILIC和RPLC操作范围和重叠的实际演示 色谱柱：ACE 2 C18, 100 x 3.0 mm流动相：A = 10 mM 甲酸铵，pH 3.0 (aq) B = 10 mM 甲酸铵，pH 3.0 in MeCN:H2O (90:10 v/v)梯度：5-100%B（10分钟） 检测：ELSD流速：0.4 mL/min温度：30oC进样：10 μL使用VWR-Hitachi进行分析Chromaster（带VWR ELSD90）HILIC为RPLC提供了替代选择 HILIC第二个优势特性在于：它通常能为RPLC提供互补或正交选择，如图2中所演示。 HILIC模式（图2b）下，六种极性分析物的混合物的洗脱图（洗脱情况）与采用RPLC分析的相同混合物正好相反，证明HILIC具有正交选择性。 图2RP与HILIC之间的正交选择性（a）柱：ACE 5 C18, 150 x 4.6 mm流动相：0.1%醋酸（溶于乙腈/水中）（5:95 v/v）（b）柱：ACE 5 HILIC-N，150 x 4.6 mm流动相：0.1%醋酸（溶于乙腈/水中）（95:5 v/v）流速：1 mL/min温度：22 °C检测：UV, 254 nm进样：5 μL样品：1) 胞嘧啶2) 次黄嘌呤3) 胸腺嘧啶4) 可可碱5) 茶碱6) 咖啡因 选择性是色谱分析中分析物析出（分辨率）的关键，因此可利用HILIC最大化极性到极性很强的分析物的选择性（对于极性到强极性化合物，可利用HILIC最大化选择性）。 在方法开发过程中，利用选择性是了解分析物保留行为的第一步，同时也是增加观察到样本（样品）内所有种类可能性的一种有效工具。 不同且复杂的HILIC多模式保留机制为RPLC提供了一种理想的互补选择性分离模式。 HILIC使用高有机物含量的洗脱剂 第三个优点源于HILIC模式下使用的高有机物含量的洗脱剂。 结果表明：与RPLC相比，其快速扩散系数可达RPLC的两倍，从而可强化传质和减轻C项对范第姆特方程（减小范特姆第方程C相） [2]的作用。 但是，HILIC中的流动相必须包含至少3%的水性物质，以（因需）在固定相粒子周围形成吸附水层以便分散开（分配）。非质子有机溶剂乙腈通常用作HILIC中较弱的溶剂。 此外，HILIC洗脱剂对MS检测[3]也有帮助。 有机溶剂含量非常高，可实现理想的低表面张力（高的有机溶剂含量可提供一个理想的低表面张力），并为MS源提供高挥发性的液体流，从而改善去溶剂化和离子形成的条件，因此增强 了信号响应。 HILIC分离通常可提供较低的背压 通常，HILIC模式下的色谱柱（和体系（系统））背压比水-有机的RPLC洗脱剂更低（尤其是当主要使用最常用的乙腈时）。 这为色谱工作人员提供了一个选择：在流速更高、甚至多组色谱柱结合（串联使用）的情况下，都可以使用更小、更高效的粒子，增加了平板计数（理论塔板数）或峰容量，同时背压[4,5]也适度（在背压合适的情况下，增加了平板计数（理论塔板数）或峰容量 [4,5]）。色谱法所用HILIC的主要劣势 HILIC法的稳定性 这是一个经常讨论和报道的HILIC相关（与HILIC相关的）主题。 许多问题可以通过使用前足够平衡的HILIC色谱柱的方式解决。 如果HILIC法包含一个梯度（梯度洗脱），那么进样之间也需要足够的平衡。 样本溶解性 由于其本身的性质，极性到极性很强的分析物很难溶解在有机物含量丰富的溶剂中并持续保持溶解状态（在含有大量有机物的溶液中很难溶解以及保持溶解状态）。  

ACE® C18-Amide? 用于方法开发的替代选择性? 改善极性、酸性、碱性和酚类化合物的分离? 用于UHPLC和HPLC的高柱效2μm、3μm、5μm和10μm颗粒? 超惰性，可获得最佳性能和可重现性 ACE C18-Amide液相色谱柱用于提高极性保留和替代选择性方法开发的理想色谱柱选择■ 相对C18和C8色谱柱，对极性分子 - 特别是酸类，具有替代选择性■ 与100%水含量的流动相兼容■ 用于UHPLC、HPLC和制备型分离的高柱效2μm、3μm、5μm和10μm颗粒■ UV和LC/MS兼容性的低流失 推荐应用■ 小分子水溶性分析物和极性化合物■ H键给予体、酸类、碱类和酚类化合物■ 小分子多肽为什么ACE C18-Amide液相色谱柱可以提供替代选择性？ ■ ACE C18-Amide将C18与极性酰胺基结合在单一配体上■ 延长间隔区技术可以额外延长色谱柱的使用寿命 利用ACE C18-Amide液相色谱柱的选择性能力将色谱峰分开 分离度方程可以确定影响分离度的参数：N、α和k。近年来， 重点关注使用超高效“UHPLC”色谱柱（如ACE Excel 2μm色 谱柱）作为实现分离目标的手段。 然而，选择性往往被忽视。在影响分离度的三个参数中，选择性是最为重要的（参见图1）。通过利用柱效和选择性，通常可以实现更好和更快的分离。ACE C18-Amide液相色谱柱是ACE系列键合相的最新产品，其可以提供互补选择性和2μm、3μm、5μm和10μm粒径的选择，以开发坚固耐用的UHPLC和HPLC方法。图1 N、α和k对分离度(Rs)的影响 对于N = 10,000、k = 4和α= 1.1的典型分离 增加N、α或k可以增加分离度（Rs），但是从上图可以看出，N或k的增加都会迅速降低回报率。增加选择性（α）则不会发生这个问题，因此其在开发分离方法时是这三个变量中最为重要的优化参数。利用ACE键合相的固定相选择性能力将色谱峰分开 图2阐明了两种ACE键合相即C18-Amide与C18之间的差异。尽管这两种键合相均可以提供可能的来自它们各自C18链的强疏水作用，但嵌入C18-Amide相中的酰胺基会引入额外的相互作用模式，最终增加极性化合物的保留并提供替代选择性。 样品：1）间苯二酚 2）儿茶酚 3）2-甲基间苯二酚 4）4-甲基邻苯二酚5）3-甲基邻苯二酚 6）4-硝基邻苯二酚 流动相：25:75乙腈/27mM H3PO4（溶于水中） 色谱柱尺寸：150 x 4.6mm流速：1.50ml/min温度：30℃波长：270nmACE C18-Amiede液相色谱柱可以使极性选择性增强 ACE C18-Amide与领先C18 UHPLC色谱柱的比较 色谱柱尺寸：50 x 2.1mm样品：1）间苯二酚 2）儿茶酚 3）2-甲基间苯二酚 4）4-甲基邻苯二酚 5）3-甲基邻苯二酚 6）4-硝基邻苯二酚 流动相：25:75甲醇/25mM H3PO4（溶于水中） 流速：0.30ml/min温度：30℃ 波长：214nm比较数据不代表所有应用。 利用替代选择性来进行方法开发 酸性、碱性和中性化合物的分离 样品：1）甲基苯基亚砜 2）吲哚洛尔 3）3-羟基苯甲酸 4）1,2-二甲氧基苯 5）小檗碱 6）杨梅素 7）胡椒碱 8）白杨素 流动相：A = 20mM甲酸铵（溶于水中）（pH 3.0）B = 20mM甲酸铵（pH3.0）（溶于90:10（v/v）甲醇/水中） 梯度：在5分钟内3 – 100% B色谱柱尺寸：50 x 2.1mm 流速：0.60ml/min 温度：40℃ 波长：254nm 与100%水含量的流动相兼容 葡萄酒中有机酸的分离 样品：1）草酸 2）酒石酸 3）苹果酸 4）乳酸 5）抗坏血酸 6）柠檬酸 流动相：40mM NH4H2PO4（溶于水中）(pH 2.5)色谱柱：ACE Excel 3 C18-Amide, 250 x 2.1mm 流速：0.21ml/min 温度：25℃ 波长：214nm ACE C18-Amide可以提供替代选择性 食品和饮料添加剂 - 香草醛 样品：1）香草酸 2）4-羟基苯甲酸 3）香草醛 4）4-羟基苯甲醛 5）愈创木酚 6）乙基香草醛 7）丁香酚 流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于乙腈中）梯度：在10分钟内30 – 55% B色谱柱尺寸：150 x 4.6mm流速：1.00ml/min温度：40℃波长：260nm类固醇 样品：1）泼尼松 2）泼尼松龙 3）雌三醇 4）皮质酮 5）11a-羟孕酮 6）11-酮孕酮 7）21-羟孕酮 8）β-雌二醇 9）17α-雌二醇 10）17α-乙炔基雌二醇 流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于乙腈中）梯度：在10分钟内25 – 80% B色谱柱尺寸：50 x 2.1mm流速：0.40ml/min温度：25℃波长：260nm有保证的可重现性和完全可扩展性 ACE C18-Amide的可重现性扩展 样品：1）尿嘧啶 2）4-羟基苯甲酸 3）乙酰水杨酸 4）苯甲酸 5）2-羟基苯甲酸 6）对羟基苯甲酸乙酯 流动相：35:65乙腈/0.1%TFA（溶于水中） 温度：22℃ 波长：254nm 将可用的2μm、3μm、5μm和10μm粒径与从UHPLC到制备型HPLC规模的一系列柱尺寸相结合，可确保方法可重现地放大或缩小。 图8中的色谱图显示，当硅胶批次和硅烷批次改变时可以获得卓越的可重现性，并当粒径和柱直径改变时可以获得可重现的可扩展性。  产品的可用性和规格    相官能团  封端粒径（μm）孔径（?）表面积（m2/g）碳载量最大pH范围100%水相兼容USP列表ACE C18-Amide   具有完整酰胺极性基团的十八烷基    是2, 3, 5, 1010030016.4   2.0-8.0a  YesL1/L60            为了获得最佳色谱柱寿命，推荐使用2-8的pH范围。为了在较高的pH值下增加色谱柱寿命，必须考虑有机缓冲液、低缓冲液浓度、高%有机溶剂和低温。 为了在HPLC条件（高达5000psi/350bar）下进一步延长色谱柱寿命，推荐使用ACE保护柱芯柱或ACE HPLC柱前过滤器。 为了在UHPLC条件（高达15000psi/1000bar）下进一步延长色谱柱寿命，推荐使用ACE UHPLC柱前过滤器。 对于高达5000psi（350bar）的HPLC色谱柱连接器，推荐使用PEEK手紧接头（p/n ACE-CC10）。 对于高达15000 psi（1000bar）的UHPLC色谱柱连接器，推荐可重复使用的接头（p/n EXL-CC10）。ACE®是Advanced Chromatography Technologies Limited的注册商标。ACE Excel™是Advanced Chromatography Technologies Limited的商标。Advanced Chromatography Technologies Limited承认Agilent Technologies Inc.、Phenomenex Inc.、Thermo Fisher Scientific和Waters Corporation的注册和未注册商标，且与上述这些公司没有任何隶属关系。  

结合CN的极性选择性与增强的疏水性ACE CN-ES液相色谱柱 ? 用于UHPLC和HPLC分离的新型固定相技术? 用于方法开发的替代极性选择性? 高柱效2μm、3μm、5μm和10μm颗粒? 超惰性，可获得最佳性能和可重现性 ACE CN-ES液相色谱柱 分离机制相互作用的强度 偶极-偶极相互作用强 强 疏水性结合的相互作用 强目标分析物 极性和非极性分析物 具有双键和三键的分析物 疏水性不同的分析物 在传统CN键合相上保留不佳的极性分子 所推荐的分离 强极性、极性和非极性分析物的混合物 适用于NP和RP分离 传统CN键合相显示稳定性/寿命不佳的分离 典型C18色谱柱不能提供充分分离的应用 作为方法开发中的正交相 ACE CN-ES液相色谱柱可以提供替代选择性 样品：1）甲硝唑 2）苄醇 3）氢氯噻嗪 4）香草醛 5）对羟基苯甲酸甲酯 6）1,2-二硝基苯 流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于90:10甲醇/水中） 梯度：在5分钟内3 - 100% B色谱柱尺寸：50 x 2.1mm流速：0.60ml/min温度：40℃ 波长：254nm为什么ACE CN-ES液相色谱柱可以提供替代选择性？■ 将极性CN基团与延长的间隔区相结合，可以提供与C18色谱柱类似的保留■ 与具有短链烷基间隔区（通常为C3/丙基）的传统CN键合相相比，延长间隔区技术可额外延长柱寿命 ACE CN-ES 可以提供与C18色谱柱相似的保留 中性化合物在RP条件下的分离 样品：1）尿嘧啶 2）邻苯二甲酸二甲酯 3）甲苯 4）联苯 5）菲 流动相：60:40 乙腈/水 色谱柱尺寸：150 x 4.6mm流速：1.00ml/min温度：22℃波长：254nm使用甲醇或乙腈的替代选择性 多模式相互作用对分离的优势 样品：1）1,3-二羟基苯 2）儿茶酚 3）氢氯噻嗪 4）氧烯洛尔 5）水杨酸 6）杨梅素 7）吡罗昔康 8）1,2-二硝基苯 9）托美汀 10）1-萘酚 11）胡椒碱 12）二氟尼柳13）丙基苯 14）1,2,3-三氯苯 流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于乙腈中） 梯度：在10分钟内3 - 100% B色谱柱尺寸：100 x 2.1mm流速：0.60ml/min温度：40℃波长：210nmNSAIDs的快速梯度 样品：1）2-乙酰氨基酚 2）乙酰苯胺 3）水杨酰胺 4）阿司匹林 5）非那西丁 6）水杨酸 流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于甲醇中） 梯度：在3.75分钟内5 - 38% B，保持38% B直至第5分钟 色谱柱尺寸：50 x 2.1mm流速：0.60ml/min温度：40℃波长：240nm在UHPLC上利用增强的选择性 采用UHPLC分离类固醇 样品：1）可的松 2）皮质酮 3）11α-羟孕酮 4）可的松-12-乙酸酯 5）11-酮孕酮 6）β-雌二醇 7）17α-雌二醇 8）17α-乙炔基雌二醇 9）雌酮 流动相：A = 0.1%甲酸（溶于水中） B = 0.1%甲酸（溶于乙腈中） 梯度：在5分钟内25 – 52.5% B色谱柱尺寸：50 x 2.1mm流速：0.40ml/min温度：40℃ 波长：260nmACE CN-ES与正相条件兼容 在NP条件下用取代芳族化合物进行的保留比较 样品：1）丁苯 2）苯甲酸甲酯 3）硝基苯 流动相：90:10庚烷/乙酸乙酯 色谱柱尺寸：150 x 4.6mm流速：1.00ml/min温度：22℃波长：254nm产品的可用性和规格 相 官能团   封端 粒径（μm） 孔径（?） 表面积（m2/g） 碳载量 最大pH范围 100%水相兼容 USP列表 ACE CN-ES 具有专有延长烷基间隔区的氰基 是 2, 3, 5, 10 100 300 12.6 2.0-8.0a Yes L10 

检测领域检测项目参考标准对应色谱耗材产品规格货号土     壤     有     机     污     染     物1.多环芳烃HJ   805-2016     《土壤和沉积物多环芳烃的测定气相色谱-质谱法》Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-302、有机氯农药HJ   报批稿     《土壤和沉积物有机氯农药的测定气相色谱-质谱法》Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-303、邻苯二甲酸酯类ISO   13913-2014     《土壤中邻苯二甲酸酯类的测定GC/MS法》SpeciClean PAE 1g/6ml，309B-S003-061000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-304、挥发性有机物HJ   642-2013     《土壤和沉积物挥发性有机物的测定顶空/气相色谱-质谱法》FBX-624 MS30m x 0.25mm x 1.40umM624-025-140-30HJ 605-2011     《土壤和沉积物挥发性有机物的测定吹扫捕集/气相色谱-质谱法》FBX-624 MS30m x 0.25mm x 1.40umM624-025-140-305、丙烯腈、乙腈HJ   679-2013     《土壤和沉积物丙烯醛、丙烯腈、乙腈的测定顶空-气相色谱法》FBX-WAX30m x 0.53mm x 1.00umXWAX-053-100-306、酚类HJ   703-2014     《土壤和沉积物酚类化合物的测定气相色谱法》FBX-1 或FBX-17毛细柱      30 m x 0.25 mm x 0.25 μmX001-025-025-30或   X017-025-025-307.多氯联苯HJ   743-2015     《土壤和沉积物多氯联苯的测定气相色谱-质谱法》Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000Superclean Silica1g/6ml,309B-T005-061000Superclean GCB1g/6ml,309B-T018-061000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-308、苯胺类EPA   method 8270D     《GC-MS测定半挥发性有机物》Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-309、硝基苯类EPA   method 8270D     《GC-MS测定半挥发性有机物》Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-3010、二噁英类和呋喃HJ   77.4-2008     《土壤和沉积物二噁英类的测定同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法》FBX-5 MS 毛细管柱子60m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-60地     下     水     有     机     污     染     物1、多环芳烃HJ   478-2009     《水质 多环芳烃的测定 液液萃取和固相萃取高效液相色谱法》Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000Superclean C181g/6ml，309B-T001-061000Superclean Silica1g/6ml,309B-T005-0610002、有机氯农药类HJ   699-2014     《HJ 699-2014 水质 有机氯农药和氯苯类化合物的测定 气相色谱-质谱法》Superclean Florisil500mg/6ml，309B-T008-06500Superclean C181g/6ml，309B-T001-061000FBX-35 MS 30m x 0.25mm x 0.25umM035-025-025-303、邻苯二甲酸酯类（）ISO   18856-2004     《水质 邻苯二甲酸酯类的测定GC/MS法》FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-304.石油烃（C10-C40）ISO   9377-2:2000     《水质.烃油指数的测定 溶剂萃取法和气相色谱》Superclean   Sodium SUL(无水硫酸钠)2g/6ml9B-T025-062000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-305、挥发性有机物HJ   810-2016     《水质 挥发性有机物的测定 顶空气相色谱-质谱法》FBX-624 MS30m x 0.25mm x 1.40umM624-025-140-30HJ 639-2012     《水质 挥发性有机物的测定 吹扫捕集气相色谱—质谱法》FBX-624 MS30m x 0.25mm x 1.40umM624-025-140-306、酚类HJ   744-2015     《水质酚类化合物的测定 气相色谱-质谱法FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-307、硝基苯类HJ   716-2014     《水质 硝基苯类化合物的测定 气相色谱-质谱法》Superclean C181g/6ml，309B-T001-061000Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000FBX-1 MS30m x 0.25mm x 0.25umM001-025-025-308、苯胺类USEPA   Method 8270D     《GC-MS测定半挥发性有机物》Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-309、多氯联苯HJ   715-2014     《水质 多氯联苯的测定 气相色谱-质谱法》Superclean Florisil1g/6ml，309B-T008-061000FBX-5 MS 毛细管柱子30m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-3010、二噁英类和呋喃HJ   77.1-2008     《水质 二噁英类的测定 同位素稀释高分辨气相色谱-高分辨质谱法》FBX-5 MS 毛细管柱子60m x 0.25mm x 0.25umM005-025-025-60

ACE C18-AR色谱柱超低流失相可以确保UV和LC/MS的兼容性 许多相显示有键合相的流失，当基线稳定性受到影响时，这可以在梯度条件下被最清晰地观察到。 尽管大多数超纯C18相可以预期产生低柱流失，但是需要谨慎选择替代选择性的键合相，以确保在低UV波长或LC/MS下进行分析时柱流失不会引起不可预见的问题。 ACE C18-AR显示UV下的低柱流失 色谱柱尺寸：150 x 4.6mm流速：1.00ml/min温度：60°C检测：UV, 214nm梯度：时间（分钟） %B                0              5                20          95                25          95               26             5 流动相： A. 20mM KH2PO4（溶于水中）(pH 2.7) B. 35:65 (v/v) 20mM KH2PO4（溶于水中）(pH 2.7) /甲醇 化合物：1）尼古丁2）苄胺3）普鲁卡因胺4）特布他林5）沙丁胺醇6）苯酚7）内标A 8）内标B 9）苯海拉明10）去甲替林 本实例对超纯ACE C18色谱柱（顶部）的低流失特性与苯基色谱柱（中间）的中等流失特性进行了比较。ACE C18-AR色谱柱（底部）显示其流失水平与ACE C18相当，尽管后者包含可以提供替代选择性的完整苯基官能团。UV流失的比较 领先的C18品牌和普通替代键合相的评估 在相同条件下对更宽范围的色谱柱的进一步分析证实，领先的高纯度C18柱品牌显示出相似的低水平色谱柱流失。 然而，传统上推荐改变选择性的替代键合相（即苯基，极性嵌入式，PFP和AQ型表面化学物质）的评估显示，所有这些非C18色谱柱均有显著更高的流失。ACE C18-AR将低流失水平（典型的领先C18色谱柱品牌）与替代选择性相结合，从而为分析者提供了有价值的方法开发工具。 当采用MS检测时，非C18相给分析者带来了传统上使用所出现的额外挑战。 在极端情况下，柱流失可能会污染检测器信号并掩盖重要分析物。 在以下实例中，在梯度运行的18-25分钟时段中监测柱流失，此时有机物的百分比增加至其最大水平，因此柱流失也是最高的。 MS Spectra（左边系列）提供了在该18-25分钟窗口中检测到流失的m/z裂解，而总离子色谱图（右边系列）阐明了在相同18-25分钟时间段内所获得的流失结果。 ACE C18-AR显示LC/MS下的低柱流失 色谱柱尺寸：150 x 3.0mm流速：0.43ml/min温度：60°C检测：+ ve ESI模式（ThermoFisher Deca LCQ离子阱），全扫描范围50 - 1500m/z 流动相： A. 0.1% v/v甲酸（溶于水中）B. 0.1% v/v甲酸（溶于乙腈中） 梯度： 时间（分钟） %B                    0            5                   20          90                   25          90                   26           5 通过LC/MS分析，极性嵌入式色谱柱的TIC追踪和MS光谱（之前通过UV检测显示有显著流失）再次显示柱流失水平较高。 来自空白运行（在没有连接色谱柱的情况下开展）的MS光谱可以使背景系统流失量化。ACE C18-AR色谱柱和领先的C18色谱柱均显示与空白运行相似的流失水平，这表明正在发生的柱流失可以忽略。结论：ACE C18-AR相可用于为领先的C18色谱柱提供不同的选择性，同时不会遇到与许多替代（即非C18）键合相相关的柱流失问题。 

ACE C18-AR色谱柱有保证的可重现性和完全可扩展性与替代选择性同等重要的是卓越的可重现性。 固定相的不同批次之间的变化是客户关注的最常见原因。 ACE固定相通过保持对整个制造过程的严格控制并建立纯度、选择性、保留、柱效和不对称性的严格规范，几乎完全消除硅醇基对HPLC分离的不可预测的不利影响。 因此，如下图所示，所有ACE C18-AR色谱柱均可以保证批次间和柱间的绝对可重现性。 色谱柱：ACE 5 C18-AR, 150 x 4.6mm（除非另有说明） 样品：1）尿嘧啶2）4-羟基苯甲酸3）乙酰水杨酸4）苯甲酸5）2-羟基苯甲酸6）对羟基苯甲酸乙酯 流动相：35:65乙腈/0.1%TFA（溶于水中）  温度：22°C  波长：254nm  流速：1.00ml/min  将可用的3μm、5μm和10μm粒径与从毛细管到制备规模的一系列柱尺寸相结合，可确保方法可重现地放大或缩小。上述色谱图显示，当硅胶批次和硅烷批次改变时可以获得卓越的可重现性，并当粒径和柱直径改变时可以获得可重现的可扩展性。材料特性  相  官能团  封端  粒径(μm)  孔径（?）  表面积(m2/g)  碳载量（％）  最大 pH 范围  C18-AR  具有嵌入式苯基官能团的十八烷基  是  3, 5, 10  100  300  15.5  1.5-10.0a  C18  十八烷基  是  3, 5, 10  100  300  15.5  1.5-10.0a  为了获得最佳色谱柱寿命，推荐使用2-8的pH范围。为了在高pH值下增加色谱柱寿命，必须考虑有机缓冲液、低缓冲液浓度、高%有机溶剂和低温。 应用:  Analgesic Separation    ConditionsColumn: ACE 3 C18-AR Dimensions: 150 x 4.6 mm Part Number: ACE-119-1546 Mobile Phase:A: 0.1% formic acid in H2O B: 0.1% formic acid in MeCN Gradient: Time (mins) %B                      0           5                      9         35                     14         35 Flow Rate: 1 mL/min Temperature: 40 °C Detection: UV, 240 nmAnalytes 1. 4-Acetamidophenol 2. 4-Aminobenzoic acid 3. 4-Hydroxybenzoic acid 4. Caffeine 5. 2-Acetamidophenol 6. 3-Hydroxybenzoic acid 7. Salicylamide 8. Acetanilide 9. Phenol 10. Acetylsalicylic acid 11. Benzoic acid 12. Sorbic acid 13. Salicylic acid 14. Phenacetin 15. Salicylaldehyde    

ACE C18-AR色谱柱为高温应用提供极佳的键合相稳定性温度和pH稳定性 在低pH值时，色谱柱退化是由键合相的水解所致，同时观察到保留值降低。 键合相的性质、硅胶表面的纯度和键合密度都是关键参数。 使用较低纯度的硅胶、较短的配体和较低的键合密度都是有助于加速配体断裂和降低柱寿命的因素。 酸性暴露条件： 流动相： 5:95 甲醇/0.1％TFA（溶于水中）（pH 1.9） 色谱柱尺寸：50 x 2.1mm流速： 0.20ml/min 0.20ml/min温度： 80°C 使用设计用于加速柱降解的条件，ACE C18-AR色谱柱显示保留损失极低，其寿命与高度稳定的ACE C18色谱柱相当。 两相均采用相同的超纯硅胶制造，并且这两种固定相比Zorbax SB C18耐久性更好（Zorbax SB C18是一种之前被认可的、可在高温和低pH应用中提供出色稳定性的固定相）。 正如预期，基于低纯度硅胶（Waters Spherisorb ODS2）的C18键合色谱柱在这些加速条件下显示寿命大大降低。 特别值得注意的是领先的苯基色谱柱与ACE C18-AR色谱柱之间的寿命比较结果。 尽管使用了超纯硅胶，但与ACE C18-AR色谱柱相比，苯基色谱柱的使用寿命降低，这表明ACE C18-AR色谱柱可能适用于常规苯基色谱柱呈现寿命降低的应用。应用#4 - 镇痛剂分离 化合物：1）4-乙酰氨基苯酚2）4-氨基苯甲酸3）4-羟基苯甲酸4）咖啡因5）2-乙酰氨基苯酚6）3-羟基苯甲酸7）水杨酰胺8）乙酰苯胺9）苯酚 10）乙酰水杨酸11）苯甲酸12）山梨酸13）水杨酸14）phenylacetin 15）水杨醛色谱柱尺寸：150 x 4.6mm 流速：1.00ml/min 温度：40°C 检测：UV, 240nm 流动相： A. 0.1% v/v甲酸（溶于水中） B. 0.1% v/v甲酸（溶于乙腈中） 梯度： 时间（分钟） %B                  0             5                  9             35 上述应用显示在ACE C18色谱柱上分离镇痛剂时，可以观察到4对共洗脱峰。 该分离也与其他领先的C18柱品牌可以预期的结果相同，由于相同（主要是疏水性）的相互作用，它们显示选择性极为相似。 基于与ACE C18相同的超惰性、超高纯度硅胶平台，独特的ACE C18-AR相可以提供替代选择性来使所有15种组分分离，包括之前确定的4个关键对。 经发现，证实不适合ACE C18的相同评估条件可以适用于ACE C18-AR柱，这就避免了冗长的方法再开发。 

ACE C18-AR色谱柱与高水含量的流动相兼容，以保留和分离极性化合物兼容高水含量的流动相 虽然主要设计是显示对“标准”C18色谱柱的替代选择性，但ACE C18-AR色谱柱也可在100％水性流动相中防止保留损失，并且可在快速梯度中使用，其中快速再平衡和防止保留损失至关重要。 高水含量条件下的最大可重现性 当分离强极性的水溶性化合物时，通常需要高水含量（> 95％）的流动相来达到足够的保留。 然而，在该条件下操作常规C18色谱柱可能会导致色谱分析的可重现性不佳。 随着时间的推移，色谱峰将以越来越短的保留时间被洗脱，色谱峰之间的分离度将越差。 该保留损失最初被认为是由于“固定相塌陷”，由此键合相配位体逐渐挤成一团，从而与样品的相互作用降低。 然而，最近的研究表明，实际上正在发生“孔脱湿”。 流动相可在高水含量条件下从孔中被排挤出来，并且保留损失是由接触表面积的损失所致。ACE C18-AR色谱柱的完整苯基官能团可防止孔脱湿和随后的保留损失，即使在高水含量的条件下也能实现高度可重现性的色谱分析。 100％水性流动相的可重现性色谱分析 用于极佳色谱分析的超惰性硅胶 设计用于高水含量条件下的许多色谱柱受所使用的低纯度硅胶的影响，并且极性碱性分子所呈现的峰形不佳。 这导致色谱分析不佳，并最终导致色谱柱的可重现性不佳。ACE C18-AR色谱柱由与所有ACE相相同的超惰性、高纯度硅胶制造，以确保获得优异的色谱分析和可重现性。 领先的竞品比较- 亲水基 样品：1）尼古丁2）苄胺3）普鲁卡因胺4）沙丁胺醇5）苯酚 流动相：3.3:96.7甲醇/20mM KH2PO4 (pH 2.7) 尺寸：150 x 4.6mm i.d. 流速：1.0ml/min, 温度：60°C， 波长：210nm Zorbax SB-Aq色谱柱显示峰1和3的性能显著损失，而超惰性ACE C18-AR色谱柱保持卓越的亲水基峰形。应用#3 - 含硫化合物 样品：1）甲基苯基亚砜2）甲基苯基砜3）甲苯4）茴香硫醚 流动相：A) 水B)甲醇T = 0 mins; 30% B; T = 5.0 mins, 30% B; T = 9.0 mins, 95% B色谱柱尺寸：50 x 2.1mm 流速：0.50ml/min 温度：22°C 检测：UV, 254nm 含硫化合物的高难度分离再次表明，领先的C18柱品牌提供基本相同的分离，同时获得两对共洗脱峰。 然而，C18-AR色谱柱提供的分离再次与领先的C18色谱柱品牌完全不同。 由ACE C18-AR色谱柱提供的附加芳香族（π-π）相互作用使得关键对1、2和3、4完全分离。