技术分享：

美国epa 445.0标准方法，测定海水和淡水的藻类叶绿素a和脱镁叶绿素是采样特纳荧光仪作为测试的设备。下文提供了详细的测试准备和过程。

epa 445.0标准方法：通过荧光法测定试管中的海水和淡水的藻类叶绿素a和脱镁叶绿素

引文：

arar，e。j.和g. b. collins。通过荧光法测定试管中的海水和淡水的藻类叶绿素a和脱镁叶绿素。美国环境保护局，华盛顿特区，1997年。

描述：

该方法提供了一种通过荧光检测低浓度测定海洋和淡水浮游植物中叶绿素a（chl a）及其游离镁衍生物，ophophytin a（pheo a）的程序。（1,2）测定样品中存在的磷脂统称为脱镁叶绿素a。对于主要对chl a感兴趣的用户，目前可以使用一组非常窄的带通激发和发射滤光片（turner designs公司，位于加利福尼亚州桑尼维尔），几乎可以消除由pheo和叶绿素b引起的光谱干扰。改进的方法与常规的荧光法之间的区别在于，使用了不经苯酚a校正即可确定氯a的方程式（未校正的氯a），而不是使用了“校正的氯a”方程式。该epa实验室评估了改进的过滤器，发现该技术是使用pheo校正技术的常规荧光法的可接受替代方案。 （3）

原文链接：

https://cfpub.epa.gov/si/si_public_record_report.cfm?lab=nerl&direntryid=309417

所需材料

·       trilogy实验室荧光仪                                                      p/n：7200-000/002

·       叶绿素a酸化模块                                                            p/n：7200-040(-w)

·       12x75mm圆底玻璃试管                                                  p/n：10-029a

·       12毫米圆形小瓶适配器（包括在trilogy附件内）      p/n：016-0810

·       玻璃器皿-仅用于p/n7200-040-w                                  p/n :7000-955

·       叶绿素a标准溶液-可从特纳购买                                   p/n：10-850

可选材料

·       固体二级标准（参考用户手册进行指导）                  p/n：8000-952

测试过程：

1.             打开trilogy实验室荧光仪的盖子。

2.             将叶绿素a酸化模块插入trilogy实验室荧光仪。

3.             如果使用玻璃试管，请将12毫米圆形小瓶适配器插入模块。

4.             关闭盖子，打开荧光仪。

5.             按触摸屏上的“chl-a”按钮选择酸化模块。

6.             确认正确的模块被折断后按“确定”进入主屏幕。

7.             从主屏幕中选择“校准”按钮。

8.             选择“运行新校准”并选择“µg/l”。

9.             插入90%丙酮空白溶液并按“ok”键”。 等待测量完成。

10.         取出空白，插入已知浓度的标准。

注：如果您将输入多个标准，您必须按照浓度增加的顺序输入它们，我们建议输入的第一个标准不低于1μg/l 。

11.         使用触摸屏上的键盘输入浓度，然后按“ok”键”。

12.         按“ok”测量酸化前。 等待测量完成。

13.         酸化标准，每毫升标准加入0.03毫升0.1n 盐酸，等待90秒，同时轻轻倒置小瓶约10次，并插入仪器。

14.         按“确定”测量酸化后。 等待测量完成。

15.         酸比将显示在屏幕上，按“确定”继续。

注：可接受的酸化比>1.7；最佳酸化比为1.9-2.0。

如果你的酸化比是<1.7，那么你可以尝试以下三个步骤之一来获得一个可接受的酸化比：

a.        重新调整标准浓度作为您在校准中的第一个标准

b.        在校准中使用更高的标准浓度作为您的第一个标准(最多5µg/l)

c.        获得一个新的标准，以重新制作您的所有标准浓度再校准

d.        重新制备0.1n 盐酸

16.         您可以输入多达5个标准，增加浓度，或继续进行当前校准。

注：酸化比仅计算输入的第一个标准。

17.         保存校准。

18.         提取所有过滤后的样品，如所述 环保局方法445.0，rev。 1.2（1997年9月），第11.1款。

19.         插入样品并按下“测量荧光”按钮。

20.         当提示时输入卷过滤和提取卷。

21.         按“ok”测量酸化前的荧光。

22.         每毫升样品加入0.03ml的0.1n 盐酸酸化样品，等待90秒，同时轻轻倒置小瓶约10次，并插入仪器。

23.         按“ok”测量酸化后的荧光。

24.         根据校正后的叶绿素a和脱镁叶绿素在整个水样中的浓度， 依据 环保局 方法445.0第12.2和12.3节中的方程将显示在主屏幕上。