成功展开Aurora液体工作站 Versa1100 8ch NAP在MN血液基因试剂盒运用

液体工作站Versa1100 8ch MN血液基因试剂盒应用报告

磁珠法核酸自动提取仪基于其独特的磁珠分离技术，实现了核酸提取的高通量自动化，是传统手工提取方法的大革新。由于其操作简单、快速，重复性好，能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA 和RNA 来，可应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域

Aurora的VERSA 1100 Gene液体工作站是一款基于磁珠法的自动化核酸提取仪,VERSA 1100 Gene是一款灵活精确的自动化液体处理工作站，以经典的磁珠分离技术完成核酸提取过程，省时省力，有助于保证提取质量以及结果重现性。同时融合了生物反应体系的自动化构建，可直接对纯化后的核酸产物进行后续处理。

实验样品

Genomic DNA from blood NucleoMag® Blood 

200ul全血，48个样品

实验步骤

1.裂解样品 (Lyse samples)

2.磁珠结合DNA  (Bind DNA to NucleoMag® B-Beads)

3. MBL3洗涤Wash with MBL3

4.80%乙醇洗涤 Wash with 80 % ethanol

5. MBL4洗涤 Wash with MBL4

6.洗脱 Elute DNA（100ul洗脱液）

实验结果

使用Qubit3.0对DNA定量检测

纯度分析

凝胶电泳分析图 (the results of the gel electrophoresis)

实验分析

从浓度分布来看，液体工作站Versa1100 8ch NAP提取的48个全血样品一致性较好，波动范围在可接受范围内，且耗材成本低，节省人工成本。从凝胶电泳图可以看出Versa1100 8ch NAP提取的全血DNA条带清晰且条带单一，从紫外吸收A260/280的比值来看，所有用Aurora VERSA 1100 8ch NAP配合Genomic DNA from blood NucleoMag® Blood 200 μL提取的基因组DNA样品的A260/280均落在1.8左右，排除了杂蛋白和RNA、小分子量DNA杂质的掺入，产物可直接用于PCR、定量PCR、Luminex检测、SNP分析等下游应用。从这三点充分说明了Versa 1100 8ch NAP能够很好应用于核酸提取实验。

拓展实验

为了进一步探究使用Aurora Versa 1100 8ch提取的猪血DNA能否用于下游的PCR实验，我们设计了以Aurora Versa 1100 8ch NAP提取的DNA为模板进行猪内参基因β-actin的PCR实验，从48个样品中随机选择16个进行PCR

磁珠法介绍：

离心柱提取法应用较广泛，该方法是利用高分子硅材料吸附ＤＮＡ的特征，通过高盐酸性缓冲液去除样品中ＲＮＡ和蛋白质等杂质，通过低盐碱性缓冲液洗脱结合在吸附柱上的ＤＮＡ。离心柱提取法虽具有较高的核酸提取效果，但因需反复离心而对仪器设备依赖性较高，不利于大规模样品筛查及突发疫情的现场监测和控制。 

中国疾病预防控制中心传染病预防控制所张建中老师等人，将系列梯度稀释的ＨＰ标准菌株作为模板，分别采用磁珠提取法和离心柱提取法平行提取ＨＰ核酸，比较两种提取方法的核酸提取效果、变异系数（ＣＶ）；将３５份胃液标本作为模板，分别采用磁珠提取法和离心柱提取法平行提取ＨＰ核酸，比较两种提取方法对临床标本的检测能力。结果发现磁珠提取法在实时荧光定量PCR中的HP核酸提取效果优于离心柱提取法，而其重复性及临床样本检测能力与离心柱提取法相当。磁珠提取法能有效解决离心柱提取法的缺点，其通过纳米磁珠特异性吸附ＤＮＡ的原理而实现对核酸的简单高效提取，具有其他方法无可比拟的优势：（１）自动化程度高：不需要有机溶剂，也不需要反复离心，仅以核酸结合磁珠为基础，极大地减少了对操作人员的危害，并降低了对仪器设备的要求；（２）高通量：能同时对多样本进行核酸提取，现有许多自动化工作站能同时对９６个样品进行处理；（３）操作步骤简单、人工耗时短：整个操作流程大概需要30min；（４）成本低廉，适用于大规模样品筛查及检测。

 【参考文献：磁珠提取法和离心柱提取法在实时荧光定量聚合酶链反应中幽门螺杆菌核酸提取效果的对比研究，张建中等；】

结语：

液体工作站Versa1100 8ch NAP提取的48个全血样品一致性较好，波动范围在可接受范围内，且耗材成本低，节省人工成本。在对猪的β-actin基因进行扩增后，能够扩增出单一的目的条带。进一步表明，Aurora Versa 1100 8ch NAP可以配套MN公司生产的Genomic DNA from blood NucleoMag® Blood 200 μL试剂盒的使用，并且提取的基因组DNA可以用于下游实验。

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