药物研究ADME包括吸收、分配、代谢、排泄和毒性等多个方面,而吸收是第一步。在细胞模型上进行内皮细胞通透性、药物渗透等实验中,默克生命科学Millipore的Millicell®细胞电阻仪和细胞培养板是常用的产品组合。
Millicell®ERS-2电阻仪是测定培养的上皮细胞的电阻或跨上皮细胞电阻(TEER) 的可靠设备。采用交流电(AC)定量检测单层的健康状态和细胞融合度。两个电极尖端的Ag/AgCl用来测量电压。由于电极设计得非常小,实验者可以非常方便地测量微孔膜上生长的上皮细胞的膜电压及电阻。交流电设计与传统直流电装置相比也具有一些优势:膜电压和电极偏移不会影响电阻的精确测定;细胞上的零静电荷消除了DC电流对细胞膜产生的不利影响;没有金属电极的电化学沉积问题。
◆ Millicell®ERS2测量仪,包括电源线、可充电池。
◆ 固定电极对(MERSSTX01,电极间距固定,用于测量)
◆ 1000Ω校验电极(MERSSTX04,用于校验)
◆ 600级超细砂纸
◆ A/C电源和充电器
◆ 用户手册
Millicell® ERS-2 细胞电阻仪(目录号MERS00002)的规格参数与产品构成:
膜电压范围: ± 200.0 mV
电压测量: 0.1 mV
电阻范围: 0 ~ 9999 Ω
电阻分辨率: 1 Ω
交流方波电流: ± 10 μA nominal at 12.5 Hz
电源: 内置 6 V NiMH 2,200 mAH电池,外接12 VDC电源供充电
每充电12h电池可用时间: 8–10 hrs
模拟输出: 1–10 V (1 mV/ohm)
环境要求: 50–100 °F (10–38 °C)
0–90% non-condensing relative humidity
尺寸:19 × 11 × 6 cm
重量:1.4 kg
Millicell® ERS-2 细胞电阻仪的使用:
用途:在不损伤细胞单层致密结构的情况下测量上皮细胞电压电阻,用来监控细胞单层的健康状况以及致密程度。
工作原理: 电阻读数不受膜电容和膜电压影响;系统采用交流电,避免了对组织产生不利影响;在电极上不会有金属沉淀;细胞上零净电荷消除了直流电流在细胞膜上的不利影响。
常用的药物渗透实验的细胞系:人结肠腺癌细胞系Caco-2、HT-29、Lovo、SW-480,人结肠上皮细胞T84,狗肾上皮细胞系MDCK,猪肾上皮细胞系LLC/PK1等。
实验用品准备:
1. 完全充好电的Millicell ERS-2系统
2. STX04测试电极
3. STX01或者STX03电极(用于检测Millicell 6, 12和24孔板), STX00电极(用于检测Millicell 96孔板),如果要测量电压则要先进行电极平衡
4. 未培养细胞的Millicell培养皿(对照)
5. 培养了细胞的Millicell培养皿
6. 70%的乙醇
7. 3/32”平头螺丝刀
Millicell®细胞培养板或细胞培养小室:
PET膜或PCF膜,膜孔径为0.4μm或1μm
常用的产品包括:
◇目录号PSHT010R5:PCF膜,膜孔径0.4μm 24孔板
◇目录号PSRP004R5:PET膜,膜孔径1.0μm,96孔膜板
◇目录号PSHT004R5:PCF膜,膜孔径0.4μm,96孔膜板
◇目录号MACAC0RS5:Caco2无菌带盖96孔板
Caco-2细胞在细胞小室上培养15天,每隔3天测量电阻值(未分化),直到第15天(完全分化)。每个时间点设置6个复孔。
James C. Fleet, and Richard J. Wood Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 1999;276:G958-G964
固定电极(MERSSTX01)
★ 每个探针都包含内外电极
内:银芯片
外:银/氯芯片
★ 电极长度不等,保证电极放在合适的位置进行测量
校验电极(MERSSTX04)
★ 用于常规校验测量仪的模拟检测
可调节电极(MERSSTX03)
★ 类似于固定电极,不过当滤膜底部和板底部的间距更大时
会更精准一些(例如Millipore的millicell®小室)。
高通量专用电极(MERSSTX00)
★ 专门用于测量millicell® 96孔板细胞培养小室
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“细胞电阻仪”您可以免费获取:
o 电阻仪中文说明书
o 电阻仪报价
o 配套Millicell细胞培养板信息
o 药物跨内皮细胞渗透性实验实验指南
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