FlowSight 量化成像分析流式细胞仪

生命科学的研究已进入了细胞组学的研究，科学家们渴求探究细胞深层次和综合性信息，既提供细胞群体的群体信息，也关注个体细胞的差异，既能看到细胞表型的特点，更能研究细胞的功能，但目前的流式细胞技术已无法满足科学家们的应用需求。Merck Millipore公司2012年推出的FlowSight多维全景流式细胞仪第一次实现了从群体到个体，从表型到功能的综合细胞分析，引领流式细胞技术进入了崭新的时代。
 

FlowSight是下一代专家级流式细胞仪
FlowSight是一款体积小巧，但是功能强大的下一代专家级流式细胞仪。该系统革命性地设计提高了信噪比以及荧光检测的灵敏度。标配12个检测通道，除了传统荧光强度信息，还能获得“每个细胞”的明场、暗场以及10个荧光图像。FlowSight可以最多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），并加配785nm激光器专用于SSC信号检测，同时还可配置96孔板自动上样系统（AutoSampler）。FlowSight具有低于10MESF的超高检测灵敏度，特别对于弱信号的检测，有明显的优势。
 

FlowSight突破传统流式局限，实现圈门不再靠猜
FlowSight与其他传统流式细胞仪不同之处在于它带来了每个细胞的真实图像。对于每个细胞，它能够生成12张图片。所获得的图片能够鉴别来自细胞质、细胞膜和细胞核的荧光。您只需点击散点图中的每个点或直方图中的每个点，即可查看与之对应的细胞图片。因此使用者再也不用靠猜测来判断设门是否准确。在FlowSight中，设门后，使用者可以通过观察所设门内外的细胞图片来确认设门是否准确。

FlowSight拓展了流式细胞技术的应用范围，获得前所未有的深入的细胞信息
1. 细胞周期细化分析
FlowSight可以将细胞周期分析和有丝分裂细胞分析结合起来。如下图所示，研究人员利用FlowSight对THP-1细胞周期进行分析（如下图左图所示），通过观察每个时期的细胞图片，FlowSight不仅可以分析细胞的G0/G1,S,G2/M期，还可将M期细分为分裂前期，中期，晚期，末期，获得最全面的细胞周期数据。
 

2. 八色免疫分型
免疫分型通常用来鉴别血细胞亚群。FlowSight最多能够同时检测10色荧光，最大程度地满足研究者的实验需求。在这个例子中，研究人员用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗体以及DAPI染料对细胞进行标记。通过一系列设门分析，他们鉴别了以下细胞类群： (A) CD3+ T细胞, CD4+ 辅助T细胞; (B) CD16+ 粒细胞; (C) CD19+ B 细胞; (D) CD14+ 单核细胞; (E) CD123+ pDC/嗜碱性粒细胞.

3．NFkB核转位研究
NF-κβ作为一种广泛存在的转录因子，被激活由胞浆转入胞核，从而参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡、肿瘤发生等。可以将细胞核和NF-κβ分别用DAPI和FITC染色，FlowSight可观察每个细胞是否发生 NF-κβ核转位，并量化分析NFkB核转位程度以及发生核转位细胞的比例。

FlowSight革命性地光路设计，实现独特应用
FlowSight系统平台也是由液流系统，光学系统和电子系统等三大部分组成。液流系统将样本细胞悬液和系统鞘液注入流动室中，使细胞在鞘液流的约束下聚焦在液流的中心，逐个流过检测窗口。光学系统中光源照射通过检测窗口的细胞，从而产生光信号。光源分为两种，其一用于产生明场细胞图像，另一种是用于产生荧光细胞图像的激光器。光源照射细胞产生的光信号被大数值孔径的物镜收集，然后通过光路系统传递到由二向色镜构成的滤光片堆栈（Dichroic Filter Stack）。光信号在这里被分成不同波段投射到TDI CCD的相应检测通道上，产生一个明场细胞图像，一个暗场细胞图像（Side Scatter，SSC）及至多10个不同荧光通道的细胞图像。FlowSight的光路系统能够自动调整焦距，并实时测定细胞运动速度，而其采用高端航空遥拍CCD进行信号采集，信噪比比PMT提高10-20倍，上述这些手段保证了系统采集到的细胞图像的质量和荧光信号的灵敏度。

 
综上，FlowSight多维全景流式细胞仪，采用革命性的技术，解决了传统流式细胞仪无法获得细胞个体信息的局限，真正让流式细胞仪睁开了“眼睛”，不仅可以对大量细胞进行统计学分析，而且还能观察细胞形态，极大地拓展了传统流式细胞仪的应用。虽然FlowSight是在2011年推出的，但是Amnis公司的下一代流式技术已经非常成熟，全球装机已经超过200台，超过300篇文献发表，其中大量Nature、Science和Blood等高水平文章。