用 Retsch MM301基因组DNA快速提取

2007-03-15 10:50

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资料摘要：

实验时对所有材料的DNA提取均采用同一方法，即CTAB法，且这些材料的DNA提取都使用RETSCH MM301 DNA提取仪在同一时间(同一工作日)内完成，以尽量缩小材料间DNA 提取的浓度差异。 CT A B法快速提取植物基因组DNA的操作步骤如下: A. 2 m1 离心管中加入1cm }新鲜叶片2片; B. 加入 CTAB缓冲液500u1，研磨机(RETSCH MM 301)研磨成匀浆; C. 65 ℃水浴1小时; D. 置于4℃冰箱冷却至150C以下; E. 加入 250ul 24:1 氯仿/异戊醉，上下混匀5分钟，保证样品与氯仿充分混匀; F. 1 30 00rpm离心10分钟: G. 取上清液200ul，加入预先加好200ul异丙醇的1.5m l离心管中，轻轻上下颠倒混匀: H. 4 0C 冰箱静置30分钟以上; I. 1 30 0Drpm离心10分钟，弃上清液，凉干; 7 加入100u1Hz0(含luIRNase)溶解DNA; K. 37 ℃水浴30分钟去除RNA; L 用 1 %琼脂糖凝胶电泳检测DNA浓度及质量; M. 稀释 DNA至所需浓度(约60ng/ul)后于一20℃冰箱中保存待用。

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