PBMC检测新方法 ——Countstar助力免疫学研究发展

pbmc是指外周血中具有单个核的细胞，包含淋巴细胞、单核细胞等，常用于免疫学领域的科研活动（包括自身免疫性疾病），传染病，血液恶性肿瘤，疫苗开发，移植免疫学和高通量筛选。作为免疫学功能研究中最常用的细胞模型，pbmc在免疫学研究以及免疫治疗领域发挥至关重要的作用。

传统的pbmcs血球计数板方法往往存在操作繁琐，耗费时间长等问题，再加上个体（如正常人和病人）和人工分离提取的差异，以及红细胞和血小板污染的程度差异，这都大大增加了准确计数pbmc和检测 pbmc活性的难度。

近日countstar fl细胞荧光分析仪通过层层筛选，成功斩获了三家来自广东的细胞免疫学研究单位的订单。而 countstar fl之所以受到的青睐，除了它能对pbmc细胞进行准确稳定的检测，还可通过其独特的荧光图像成像系统，让您可以“看”到细胞。

由于红细胞的存在，使得pbmcs测定的结果受到干扰。通常情况下需要通过2种方式去除红细胞的干扰：1. 将红细胞裂解去除红细胞；2. 密度梯度离心方法去除红细胞。

countstar fl提供了一种更加简便和准确的pbmcs的分析方法，可是使用户在不裂解红细胞的情况下即可对pbmcs进行分析。

活死单个核细胞可呈现荧光信号。而成熟的红细胞及血小板，因为没有细胞核，不能被ao/pi染色，因此可以完全被排除在外不被计数。可以精确计数分离后的pbmc以及活力分析。  

虽然有研究者使用2种方法的组合来去除红细胞，但是同样被证明无法完全去除红细胞。现在的研究者在pbmcs研究中遇到的挑战：研究者们依然在使用传统的血球计数板分析pbmcs细胞；在分析的时候会pbmcs会受到红细胞的干扰；红细胞仅能用肉眼识别，并且需要有一定经验的实验者；

血细胞经pbs稀释后，在明场条件下，因为有大量的红细胞，血浆等干扰，无法进行计数，双荧光法可明显识别pbmc。

梯度稀释后测定pbmcs浓度

血细胞，用pbs稀释不同比例（1:5,1:10,1:15,1:20,

1:25），使用ao/pi染色方法染色并在countstar仪器上进行检测。结果如图所示。经过稀释后，可以看到检测结果拥有良好的线性。 

双荧光法对密度梯度离心法获得pbmc进行计数

双荧光法可准确区分密度梯度离心后pbmc的死活，并有效排除干扰物质对细胞计数的影响     

双荧光法对密度梯度离心法获得pbmc进行计数

左图：对pbmc进行梯度稀释后，countstar对浓度的测试具有很好的线性；右图：对pbmc进行梯度稀释后，countstar®对活率的测定具有很好的一致性

countstar测试结果显示界面