中国福州 |2017年9月16日：榕城初秋，台风擦肩而过，中华医学会第二十二次全国眼科学术大会在烈日骄阳下圆满闭幕。高视远望在此次大会上带来了徕卡显微系统（简称“徕卡”）全新黑科技proveo 8融合光学显微镜，获得了参会者极大的关注。9月13日16点30分姚克教授与大会学术委员会主席成员来到高视展台，为高视医疗本次展会拉开序幕。姚克教授与徕卡显微系统销售总监蔡志雄先生共同为最新黑科技产品proveo 8融合光学显微镜揭幕与开机，标志着眼科手术显微镜即将进入全新的时代。「姚克教授与徕卡蔡志雄总监共同揭幕开机」9月14日10点30分众多参会者共聚高视展台，与十八位徕卡大师共同鉴证proveo 8融合光学显微镜新境界，探索proveo 8独有的fusionoptics融合光学专利技术将为眼科手术带来带来突破性的改变。大家对于徕卡黑科技充满了信心。 「众多参会者共聚高视展台」 「十八位徕卡大师为proveo 8融合光学显微镜题字」「参会者现场体验徕卡黑科技proveo 8融合光学显微镜」融合光学帮助您同时获得大景深和高分辨率眼后节手术往往需要在暗淡的光线下完成精准操作，这种手术需要耗时的反复调焦，但图像清晰度和细节展现也非常有限。proveo 8拥有独家的fusionoptics融合光学专利技术，使视野可见的区域更加清晰得同时，景深范围变得更广，从巩膜到视网膜，均能带来丰富神外立体视觉图像。这意味着更少的调焦操作，从而提高工作流程效率，达到最佳的手术效果。proveo 8，您所不了解徕卡全新黑科技震撼上市，与各位医学专家共同守护您的光明！如若了解更多产品详情，可登陆徕卡官方网站查询。关于徕卡显微系统leica microsystems 徕卡显微系统是全球显微科技与分析科学仪器之领导厂商，总部位于德国维兹拉(wetzlar, germany)。主要提供显微结构与纳米结构分析领域的研究级显微镜等专业科学仪器。自公司十九世纪成立以来，徕卡以其对光学成像的极致追求和不断进取的创新精神始终得到业界广泛认可。徕卡在复合显微镜、体视显微镜、数码显微系统、激光共聚焦扫描显微系统、电子显微镜样品制备和医疗手术显微技术等多个显微光学领域处于全球领先地位。 徕卡显微系统在全球有七大产品研发与生产基地，在二十多个国家拥有服务支持中心。徕卡在全球一百多个国家设有区域分公司或销售分支机构，并建有遍及全球的完善经销商服务网络体系。

从“未完成的”有机晶体到“已获奖的”半导体薄膜徕卡数字和立体显微镜正在帮助研究人员在纳米级电子学领域取得进展。他们使用它们来：观察有机半导体晶体的合成过程;筛选质量最好的晶体;和从晶体制备薄膜以测量其导电性。研究的目的是让许多电子设备有一天能常规地利用纳米级电子学。由碳基分子和聚合物而不是金属和硅制成的有机电子可用于生产廉价，灵活的超轻型电子设备。目前的一个应用是使用有机发光二极管（OLED）技术生产用于电视机、显示器、智能电话和平板电脑的显示器。许多有机电子器件都使用一种有机半导体材料的薄膜。它们的结构和电导率是影响性能的重要属性。山本浩司教授的实验室在日本的冈崎分子科学研究所。山本浩司教授正在使用徕卡EZ4立体显微镜，用于有机晶体的筛选和制备用于导电性分析的晶体薄膜。在日本冈崎分子科学研究所，山本浩司教授所在的研究小组对有机电子学有浓厚兴趣。该小组已经开发了半导体有机晶体，来生产莫特场效应晶体管（FET）和电子铁电有机材料。潜在的应用程序是用于内存和计算设备。 山本教授的小组对有机晶体生长过程付出巨大努力。他们使用带有附加软件的DMS数字显微镜来拍摄延时显微照片。显微镜设置在摆臂架上，使晶体生长装置内的观察更实用。通过更详细地了解生长过程，可以更好地优化研究，从而产生具有更好的半导体性质的晶体。有机晶体生长室设置在山本实验室。生长过程中的延时观察应该使用了来自徕卡显微系统的DMS数字显微镜。为了制作薄膜，选择最佳质量的晶体。它们通过其形状和存在的任何缺陷被选择。对于这种水晶检查过程，山本小组使用了带集成摄像头的EZ4立体显微镜。此外，显微镜被用于在薄膜上放置金导线，以便测量导电性。这种具有独立照相机的显微镜使研究人员能够在没有计算机的情况下记录高质量的显微照片，更容易分享结果，并培训新的小组成员。关于徕卡显微系统Leica Microsystems 徕卡显微系统是全球显微科技与分析科学仪器之领导厂商，总部位于德国维兹拉(Wetzlar, Germany)。主要提供显微结构与纳米结构分析领域的研究级显微镜等专业科学仪器。自公司十九世纪成立以来，徕卡以其对光学成像的极致追求和不断进取的创新精神始终得到业界广泛认可。徕卡在复合显微镜、体视显微镜、数码显微系统、激光共聚焦扫描显微系统、电子显微镜样品制备和医疗手术显微技术等多个显微光学领域处于全球领先地位。 徕卡显微系统在全球有七大产品研发与生产基地，在二十多个国家拥有服务支持中心。徕卡在全球一百多个国家设有区域分公司或销售分支机构，并建有遍及全球的完善经销商服务网络体系。

12显微镜成像提速啦！配备 las x synapse 控制系统的显微镜， 成像速度提升5倍。图文兼并告诉你显微镜提速的秘密

激光显微切割技术是在显微镜下从样本中高度选择性地分离、纯化单一类型细胞群或单个细胞的新技术，它可以根据显微形态直观选择提取目标区域或结构。激光显微切割技术在植物学、病理学、肿瘤研究、神经学、细胞生物学及法医取证等方面都有着广泛的应用。本篇文章主要列举了激光显微切割技术在中药学方面的应用。 中药研究中药（tcm- traditional chinese medicine 即“传统中医”或“传统中医药”）起源于中国。中药是指以中医药理论为指导，有着独特的理论体系和应用形式，用于预防和治疗疾病并具有康复与保健作用的天然药物及其加工代用品，主要包括植物药、动物药、矿物药。中药在我国的药品中具有非常重要的地位。中药之所以具有药用价值，主要是依靠其中所含有的生物碱或生物活性物质。虽然中药的发展在我国有上千年的历史，但是由于我们对于各种中药中活性成分的种类以及不同结构部位的含量、单分子的鉴定还不是很明确，所以限制了我国中药的深入发展。近年来对于中药的研究越来越火热，尤其是对于不同结构中生物碱的成分、含量、单体的鉴定越来越多。以前由于取材手段的限制，研究者们不能很精确的分离中药材的特定部位，所以给后来的鉴定带来了困扰。现在激光显微切割技术，作为一种能够在细胞水平上，分离特定组织结构的手段，解决了很多研究者的困难。激光显微切割技术是在显微镜下，依靠形态学或是荧光标记区分不同的细胞形态和结构，依靠高能的激光束分离、切割样品，获得高度单一纯化样品的技术。激光显微切割技术在中药的研究中越来越广泛得到应用。应用案例大麻毛状体研究：众所周知，香毛簇是大麻属植物产生大麻素的主要部位，也是大麻素含量最高的部位。本应用主要是利用激光显微切割技术获得8周时各种类型香毛簇并且结合液质联用分别鉴定成分的种类和含量的高低。徕卡激光显微切割独家的实时切割功能，灵活自如，成为了这种在实体药材上直接切割香毛簇的最佳方式。大黄的研究：激光显微切割与液质联用分析大黄的次级代谢产物。徕卡lmd6与lmd7徕卡作为显微镜生产和研发的世家及领导者，为广大用户提供优质的产品。徕卡推出了两款型号的激光显微切割系统：lmd6和lmd7。两款型号的区别在于所配备的激光器不同。lmd6配备固定频率的高能激光器，主要适合常规病理切片和一些相对较薄的植物或其它组织的切片。lmd7配备了一款功率更高、频率可调的高能固体激光器，它可以通过调节频率来改变激光的脉冲能量来适合不同样品。lmd7对样品的兼容性非常好，适合各种类型的样品包括组织切片、植物切片、涂片、活细胞等样品。                       lmd6                                      lmd7徕卡激光显微切割的最大特点是采用独家专利的激光扫描式切割，重力一步法收集。扫描式切割是在切割过程中，高能激光束快速、精准的切割样品，区别于物台移动方式切割。重力一步法收集是最温和和最高效的收集方式，完成切割即完成收集，提高实验速度。lmd7拥有目前最大功率的激光器，非常适合切割例如中药等植物切片。大家还可以登录徕卡的science lab网站，上面有各种产品的最新相关应用。http://www.leica-microsystems.com/science-lab/topics/参考文献：1、analysis of cannabinoids in laser-microdissected trichomes of medicinal cannabis sativa using lcms and cryogenic nmr .  n. happyana et al. / phytochemistry 87 (2013) 51–592、profiling of secondar y metabolites in tiss uesfrom rheum palmatum l. using laser microdissectionand liquid chromatography mass spectrometry.   z. liang et al anal bioanal chem (2013) 405:4199-4212

一年前的今天华人科学界的各个圈子都在为一条消息而惊愕和惋惜。        钱永健（1952-2016）来源：wiki 2008年诺贝尔化学奖得主、美籍华裔科学家钱永健（Roger Tsien），于2016年8月24日在美国俄勒冈州尤金县去世，享年64岁。加州大学圣迭戈分校的讣告上写道：“钱永健教授的工作照亮了科学”。的确，在绿色荧光蛋白的发展史上，钱永健占了浓墨重彩的一笔，他成功改造了绿色荧光蛋白，并拓展了绿色以外的其他颜色荧光蛋白，使荧光蛋白的应用得到了极大的普及，为同时追踪多种生物细胞变化的研究奠定了基础。如今发表的生物医药领域科研成果有一半以上都用了这一技术。  纪念钱永健：天才学霸的人生钱永健1952年出生于美国纽约，在新泽西州利文斯顿长大。钱永健的家族可谓是“科学世家”，出了多位科学家和工程师。他是中国著名科学家钱学森的堂侄。钱永健小时候患有哮喘，只能经常待在家里。他对化学实验感兴趣，常常在家中地下室里做化学实验，一做就是几个小时。他8岁时的实验记录本如今被收藏在瑞典斯德哥尔摩的诺贝尔博物馆中。16岁时，钱永健获得生平第一个重要奖项，也是美国授予高中生完成科研项目的最高奖：西屋科学天才奖，当时他研究的是金属如何与硫氰酸盐结合。 上图：时任美国总统尼克松祝贺获得西屋天才奖一等奖的钱永健  钱永健后来获得美国国家优等生奖学金进入哈佛大学学习，20岁获得化学物理学士学位并前往剑桥大学深造，后获生理学博士学位。他于1989年起在加州大学圣迭戈分校工作，至今已有27年。钱永健去年8月24日单独骑车后没有回家，被找到时已经去世。世人猜测钱永健是在骑自行车时去世的。钱永健生前乐衷自行车运动  他的工作“点亮了科学”钱永健一生获奖无数，几乎囊括所有生命科学领域大奖，也是唯一一位华人沃尔夫奖和诺贝尔奖“双得主”。是美国国家科学院院士、美国国家医学院院士、美国艺术与科学院院士。而其年少成名，更是当之无愧的少年天才。著名生物学家饶毅曾写道：“钱永健的工作，从上世纪八十年代一开始就引人瞩目。他可能是世界上被邀请作学术报告最多的科学家，因为化学和生物界都爱听他的报告，既有技术应用，也有一些很有趣的现象……很多人认为钱永健会得诺贝尔奖，可以是化学奖，也可以是生理学与医学奖。”得益于严谨的家教，人们印象中的钱永健总是谦逊、低调、诚恳。看问题的眼光独到、犀利，对科学研究充满热情和专注，对学生和同事慷慨无私。  会发光的蛋白GFP20世纪后期，以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)为代表的一系列生物荧光标记蛋白的发现与应用，为生物学的大发展提供了一种全新的工具。自此之后，科学家们能够很方便地观察到活细胞的细微结构和生理过程，之前难以观察及研究的例如胚胎的发育过程、癌细胞的扩散方式等，如今变得轻而易举。绿色荧光蛋白（GFP）的形状就像一个圆柱体来源：圣迭戈大学钱永健实验室 绿色荧光蛋白不仅无毒，而且不需要借助其他辅酶，自身就能发光，可以让科学家在分子水平上研究活细胞的动态过程。当绿色荧光蛋白的基因和我们感兴趣的有机体内所拟研究的蛋白质基因相融合时，蛋白质既能保持其原有的活性，绿色荧光蛋白的发光能力也不受影响。通过显微镜观察这种发光的“标签”，科学家就能做到对蛋白质的位置、运动、活性以及相互作用等一目了然。在一个活体中有数万种不同的蛋白质，这些蛋白质精细地控制着重要的化学进程。如果蛋白机制发生故障，通常就会发生疾病。绿色荧光蛋白可帮助研究这类机制，这就是为什么绿色荧光蛋白成为生物科学极其重要的工具。在它的帮助下，科学家还能对各种细胞的命运了如指掌，比如，脑神经细胞是如何发育起来的，或者癌症细胞是如何扩散的…… 徕卡双光子四维成像的斑马鱼胚胎的Expression of cytoplasmic GFP in the notochord and prechordal plate, 980nm. Nuclei stain through RNA injection H2B-mCherry @1030 nm. Courtesy of BioEmergences USR3695 (IBiSA FBI), Gif sur Yvettes, France.  连续33h的小鼠胚胎异染色质的形成需要关键的组蛋白变体H3.3，表达的EGFP。摄自Leica活细胞工作站DMi8。  通体表达GFP发出绿色荧光的小鼠，摄自Leica体视镜M205FA。 由于使用传统荧光染料有深层组织标记困难、难以用于活体标记、长时间成像易淬灭等瓶颈，所以在荧光蛋白家族出现之前，以上这些活体深层成像，长时间活细胞成像的实验效果，都是使用传统荧光染料所无法想象的。使用荧光蛋白对活体标本进行示踪，为传统生物学研究带来了崭新的实验方法，使多个生物领域一跃进入了活体动态过程的定量研究阶段。 荧光蛋白现在广泛应用于生物学研究。可以通过常规的基因操纵手段，将荧光蛋白用来标记其他目标蛋白，这样可以观察、跟踪目标蛋白的时间、空间变化。提供了以前不能达到的时间和空间分辨率，而且可以在活细胞、甚至活体动物中观察到一些分子。荧光蛋白技术也使得人们可以研究某些分子的活性，而不仅仅是其存在与否。 对于有些研究来说，荧光蛋白的作用可以形容为“起死回生”：原来有些方法，需要把生物变成死物才能研究一些现象和过程，而荧光蛋白为主要支柱之一的现代成像技术，使科学家在活的细胞中观察和研究这些过程，使一部分“死物学”变成“生物学”。  2008年的诺贝尔化学奖 正因为GFP家族如此巨大地改变了生命科学的研究进程，瑞典皇家科学院将2008年的诺贝尔化学奖授予对GFP的发现、表达和开发做出了杰出贡献的三位科学家：下村修(Osamu Shimomura,1928-)、马丁·查尔菲(Martin Chalfie,1947-)和钱永健(Roger Yonchien Tsien,1952-2016)。   上图从左至右分别为：美国科学家马丁·查尔菲（Martin Chalfie）任职于哥伦比亚大学、日本科学家下村修（Osamu Shimomura）当时任职于美国Woods Hole海洋生物学实验室（MBL）、美籍华裔科学家钱永健（Roger Y. Tsien），任职于加州大学圣迭戈分校 下村修首次从Aequorea victoria中分离出GFP。他发现该蛋白在紫外线下会发出明亮的绿光。 Martin Chalfie证明了GFP作为多种生物学现象的发光遗传标记的价值。在最初的一项实验中，他用GFP使秀丽隐杆线虫的6个单独细胞有了颜色。 钱永健的主要贡献在于让人们理解了GFP发出荧光的机制。同时，他拓展出绿色之外的可用于标记的其他颜色，从而使科学家能够对各种蛋白和细胞施以不同的色彩。这一切，令在同一时间跟踪多个不同的生物学过程成为现实。  实际上，从绿色荧光蛋白的发现到荧光蛋白标记法的发明应用，过程相当复杂。可以说，如果没有众多科学家接力，GFP的火把就不会成功穿越间隔在发现与发明之间漫长的“黑暗”，荧光蛋白标记法就不可能获得普及。 在GFP发现和普及过程中的几个关键人物。其中下村修，查尔菲和钱永健获得2008年诺贝尔化学奖。  下村修：阿甘一样的执着和快乐说到GFP，毫无争议的发现者是日本科学家下村修（Osamu Shimomura，下村脩）和已故美国科学家约翰森（Frank H. Johnson,1908-1990）。他们1961到1974年发现两种发光的蛋白质：水母素（aequorin）和GFP。1962年，下村修和约翰森等在《细胞和比较生理学杂志》上报道，他们分离纯化了Aequorea victoria水母中发光蛋白水母素。据说下村修用水母提取发光蛋白时，有天下班要回家了，他把产物倒进水池里，临出门前关灯后，回头看一眼水池，结果见水池闪闪发光。因为养鱼缸的废水也流到同一水池，他怀疑是鱼缸排出的成分影响水母素，不久他就确定钙离子增强水母素发光。1963年，他们在《科学》杂志报道钙和水母素发光的关系。1962年下村修和约翰森那篇纯化水母素的文章中，有个注脚，说还发现了另一种蛋白，它在阳光下呈绿色、钨丝灯下呈黄色、紫外光下发强烈绿色。其后他们仔细研究了其发光特性。1974年，他们得到了这个蛋白，当时称绿色蛋白、以后称绿色荧光蛋白（GFP）。Morin和Hastings提出水母素和GFP之间可以发生能量转移。水母素在钙刺激下发光，其能量可转移到GFP，刺激GFP发光。这是物理化学中已知最早的荧光共振能量转移(FRET)在生物中的发现。下村修当时并没有料到，自己不经意间发现的GFP后来竟成了科学家们深入揭示生命活动奥秘的一个非常重要的工具。 下村修的童年少年时光都是在战乱中度过的。战后初期，他在长崎医科大学（长崎大学前身）附属药学专科部完成了三年的高等教育，（嗯，就是原子弹爆炸的那个长崎。原子弹在他16岁时爆炸，他曾数周失明。）1955年，下村被选派到名古屋大学理学院化学系天然有机化学研究室进修。在那里，他对发光海萤(Cypridina hilgendorfri)体内的荧光素提取出来并获得结晶，并为最终确定荧光素的分子结构奠定基础。由于此项工作在当时难度极大，普林斯顿大学哈维(Newton Harvey,1887-1959)教授带着学生干了好多年仍未取得成功。于是，引起了哈维的弟子——普林斯顿大学生物学系教授约翰逊(Frank Johnson,1908-1990)的注意，他盛情邀请刚被名古屋大学破格授予理学博士学位的下村于1960年9月来到普林斯顿，开始从事为期三年的关于多管水母(Aequorea victoria)的博士后研究。下村修在演讲中展示的水母图片其中下左图为日光状态、下右图为黑暗中状态  他们提取到了5毫克高纯度多管水母发光物质，对其进行分析后发现，该发光物质确实是一种蛋白质，加微量钙离子后会发蓝光，而且在真空状态下也能发光。下村等人将这种特殊蛋白质命名为“aequorin”，即水母素。在纯化水母素过程中，下村等人还发现了一个副产品——一种含量很低、在自然光的照射下发浅绿色荧光的新型蛋白质。于是，在该年投给《细胞和比较生理学学报》的论文脚注中，下村等人首次公开了这项发现。当时，他们将这种新型蛋白质称为“绿色蛋白质”，也就是今天的GFP。加微量钙离子后会发蓝光的“绿色蛋白质”来源：下村修演讲报告 1963年初，下村修和约翰逊等把水母素对钙离子敏感的相关研究整理成文，发表在美国的《科学》杂志同年6月刊上。为获得研究所用的足量的水母素，从1960年代开始，下村修每年夏天都要带上家人开车足足七天，横跨美国到到美国西北海岸的星期五港湾（Friday  Harbor）去大量捕捞多管水母。没想到，一捞就是19个夏天。过程虽然非常辛苦，但他乐此不疲。糟糕的是，期间发生了一件事，下村等人多年积攒起来的多管水母GFP被“猪队友“约翰逊带去参加学术会议时丢失了。而当时的生物技术还不甚发达，做一次GFP结构分析实验需要上百毫克的GFP。所以，此后数年下村不得不仍旧带着家人去星期五港湾大量捕捞多管水母。但他没有气馁，直到1979年，他才攒足100毫克GFP。推测出了多管水母GFP发光基团的化学结构，并在《欧洲生物化学学会联盟通讯》上公开了这一研究成果。如果想继续进行更深入的理化性质和分子结构研究，则需要在一个夏天抓2.5 吨共50000个发光的小水母！下村修带着自己的妻子儿女和几个帮手，整个夏天的早晚都拎着小桶在水边抓水母。回到实验室，他还要忙着把水母的伞盖下缘切下来，不厌其烦地分离和分析各种成分。剪切，挤压，过滤，搅拌，沉淀……图片来源：https://www.nobelprize.org上图：多年后，下村修、钱永健带领助手及学生到星期五港湾故地重游。下村修：三排左起第三位，钱永健：二排左起第一位。  与钱永健的天才不一样下村是一位阿甘型的科学家52岁的他还只是个博士后，不但没有什么地位和知名度，似乎也没有什么特别的天分更不必说多么深远的眼光。尤其不懂包装和推销自己。就是在科学界，他也不是一个什么人物。在公众的眼里，可能就显得呆傻有余灵光不足。如果不给他这个诺贝尔化学奖，这个日裔美国老者可能很快就和曾和他一起发现GFP后默然离世的恩师约翰森一样，很快被人彻底遗忘掉。昨天，下村修在获悉自己获得诺贝尔化学奖后，在美国的家中接受日本媒体采访时坦陈：“有传言说是生理学或医学奖，我本以为得化学奖的可能性为零。昨天几位日本人获物理学奖是当之无愧，我获奖只是偶然的幸运。”  下村是绿色荧光蛋白的第一个发现者。但他谦逊地把这一成果归之于一系列“幸运”。““我一生一共抓了85万只水母。从大量原材料中榨取一点点物质，这可是最传统的化学研究。” MBL（Marine Biological Laboratory at Woods Hole）的新闻发布会上，他说出来的也是尽人皆知的大白话：“如果你发现一个有意思的题目，要一直做下去，直到发现一些东西。如果你碰到困难，想办法克服。不要沮丧。科学研究中总有困难。”他在获奖后举行的新闻发布会上说，经历过苦难的人，不会轻易产生畏难情绪。他寄语后进说，年轻人遇到困难时容易产生畏难情绪，但是，一旦发现自己感兴趣的课题，应该排除万难，奋力攀登。 1980年，约翰森退休不久，下村修只有离开普林斯顿，直到这个时候已经52岁的下村修其实还是一个博士后。下村修在1961年33岁时作出了重要发现（1962年发表），到1974年46岁时，全部关键实验完成。在他学术生命的黄金时间里面，他一直只是博士后。1982年至2001年，他到麻省Woods  Hole海洋生物学研究所（MBL）工作，兼波士顿大学教授。2001年MBL退休后，他在没有任何资助的情况下，继续作研究，把家里的地下室作为“光蛋白实验室”，如今已经是80多岁高龄的耄耋老者，还用家庭地址发表文章。  承前继后的马丁·沙尔菲将GFP表达到其他生物体这项工作，1994年由两个实验室独立进行：美国哥伦比亚大学做线虫的Marty Chalfie实验室，和加州大学圣迭哥分校、Scripps海洋研究所的两位日裔科学家Inouye和Tsuji。其中，Chalfie等于1994年在《科学》上发表的文章就被引用了3349次。 1988年，绿色荧光蛋白在一次大会上被偶然提起，在座的哥伦比亚大学教授马丁·沙尔菲突然联想：何不让它走出水母，到其它生物中去发光？一个突发奇想，因为种种原因却在4年后才在实验室付诸实施；大肠杆菌被神速地变成了“绿色荧光蛋白生产车间”，产量颇高以至于细胞在日光下就呈绿色。沙尔菲继续将目光转向他最喜欢的科研物种——线虫。这种一毫米长的低等小生物通体透明，全身的900多个细胞清晰可辨。经过沙尔菲的改造，整条虫仅有的6个触觉感受细胞开始“生产”绿色荧光蛋白，在紫外光的照耀下，这6个细胞在蠕动的小虫体内就好像用荧光笔描画出来了一样。   GFP家族“照亮了生物学研究的未来”后来，钱永健等人拓宽了多色的荧光蛋白，先后变出了蓝色系列、青色系列、黄色系列、橙色系列的荧光蛋白。  之后的十几年中，绿色荧光蛋白又被用到了病毒、酵母、小鼠、植物甚至人类等各种生物——它们前所未有地在生命活着的状态下被涂上了颜色：癌细胞装载了绿色荧光，就与周围细胞区别开来，它们扩张领地的脚步一览无余；小得难以追踪的HIV病毒被镶了荧光，它们如何进入细胞、躲在细胞哪个角落、怎样从细胞中冒出去的种种过程就都被暴露在世人眼前……研究还可以进入更微观的层次。一枚细胞中的蛋白成千上万，不仅长相相似，而且都是“隐身”的，科学家将绿色荧光蛋白专门连在他们喜欢的蛋白上，就像在蛋白后边拖了一颗灯泡。小灯泡在黑暗的细胞中熠熠发光，看到它们跑来跑去，你就知道蛋白躲在哪里，大约在做什么事情。委员会成员在评论绿色荧光蛋白的功绩时说，它“照亮了生物学研究的未来”，不仅如此，它也扩展了我们视野所及的范围。 著名生物科学家饶毅评价说“这个领域，最重要的工作显然是下村修和约翰森做的。钱永健在两个方面做出了重要的贡献，如果钱与下村修合得奖也很合理。第三重要的是普瑞舍。他承前启后，有助于推广应用下村修的发现。”  细胞里的彩虹 尽管有许多成功的例子， 但是野生绿色荧光蛋白毕竟是为水母而非实验室而设计。它有时候不够亮，有时候灭得太快，有时候在细胞里扎成一团给细胞造成麻烦，还有时甚至不听话地把科学家喜欢的蛋白拽到错误的地方；更严重的是，激发野生绿色荧光蛋白需要用高能量的紫外线，这就使得观察的过程不可避免地对细胞造成了损害。幸好第三位诺贝尔奖得主钱永健出场了，他是第一位致力于改造绿色荧光蛋白的人。今天，改造工程仍在世界上若干实验室继续，但是荧光蛋白的应用范围已经得到大大拓宽。除了让绿色荧光蛋白变得更加完美，钱永健等人还用它做模板，先后变出了蓝色系列、青色系列、黄色系列、橙色系列的荧光蛋白。再后来，一些科学家从一种海葵中分离出了红色，人们亲切地将其衍生出的红粉系列命名为草莓、樱桃、甜瓜、香蕉、橙子、梅子和覆盆子。至此，荧光蛋白终于能在细胞中画出一道完整的彩虹。 上图：用产生不同颜色荧光蛋白的细菌创作的图画。来源wiki 一组科学家让这道彩虹华丽升空。他们用多种颜色的荧光蛋白“标记”了小鼠大脑中上百个细胞。一个个拖着长长神经纤维的神经细胞就像一个个 五颜六色的风筝，整齐排布或者彼此相交。科学家们可以看出红色细胞如何同绿色细胞并行不悖，蓝色的又如何和紫色的相互纠缠，他们调侃地将小鼠命名为脑虹——Brainbow（来自英语单词Rainbow，意为彩虹）；而这只具有彩色大脑的小鼠也让实验室外的普通人一睹荧光蛋白的魅力。  绿色荧光蛋白在地球上已存在了一亿六千万年。直到公元一世纪，“发光的水母”才第一次被文字记载。又过了两千年，神秘的荧光蛋白终于爬出海洋，钻进了其它动物的细胞。至今也没有人知道那些在那不勒斯港随波徜徉的水母究竟如何享用自然送给它们这个闪耀的礼物，然而它无疑已经深入我们所在的“异域”，并帮助人类照亮了周围那些本不可见的世界。 参考文献1.    Shimomura O, Johnson FH, Saiga Y (1962). Extraction, purification and properties of aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan, Aequorea. J. Cell. Comp. Physiol. 59:223-239.2.    Shimomura O, Johnson FH, Saiga Y (1963). Microdetermination of calcium by aequorin luminescence. Science 140:1339-1340.3.    Morise H, Shimomura O, Johnson FH, Winant J. (1974). Intermolecular energy transfer in the bioluminescent system of Aequorea. Biochemistry 13:2656– 62.4.    Prasher D, McCann RO, Cormier MJ (1985). Cloning and expression of the cDNA coding for aequorin, a bioluminescent calcium-activated protein. Biochem. Biophys. Res. Commun. 126:1259–1268.5.    Inouye, S., Noguchi, M., Sakaki, Y., Takagi, Y., Miyata, T., Iwanaga, S., Miyata, T. & Tsuji, F.I. (1985) Cloning and sequence analysis of cDNA for the luminescent protein aequorin. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 82, 3154–3158.6.    Prasher DC, Eckenrode VK, Ward WW, Prendergast FG, Cormier MJ. (1992). Primary structure of the Aequorea victoria green-fluorescent protein. Gene 111:229-33.7.    Chalfie M, Tu Y, Euskirchen G, Ward WW, Prasher DC (1994). Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science 263:802-805.8.    Inouye S, Tsuji FI. (1994). Aequorea green fluorescent protein. Expression of the gene and fluorescence characteristics of the recombinant protein FEBS Lett. 341: 277– 80.9.    Heim R, Prasher DC, Tsien RY (1994). Wavelength mutations and posttranslational autoxidation of green fluorescent protein. Proc Natl Acad Sci USA 91:12501-12504.10.  Matz, M.V., Fradkov, A.F., Labas, Y.A., Savitsky, A.P., Zaraisky, A.G., Markelov, M.L. & Lukyanov, S.A. (1999) Fluorescent proteins from nonbioluminescent anthozoa species. Nature Biotechnol. 17:969–973.11.  Tsien RY (1980). New calcium indicators and buffers with high selectivity against magnesium and protons: design, synthesis, and properties of prototype structures. Biochemistry 19:2396-2404.12.  Tsien, R.Y. 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  精准的表面分析是在众多生产和研发过程中不可或缺的因素，以此来确保材料和组件的性能优化。在日益复杂的半导体加工行业中，对器件的结构检测要求也越来越高；在汽车和航空航天行业，组件的表面粗糙度是决定组件性能至关重要的因素。 然而，样品表面错综复杂的结构，不同的高倾斜度，会要求横向分辨率达到亚微米，垂直方向分辨率甚至达到纳米级。如何获取高质量的二维图像，执行复杂的三维表面分析，得出精准的分析结果？ 测量光栅的周期，高度 放大倍数：1000x  光栅周期曲线图（样品及测试环境：北京大学微电子工艺实验室）硅结构器件 硅墙 放大倍数：2100x用不同颜色展现样品表面的高低形貌（样品及测试环境：北京大学微电子工艺实验室）半导体结构器件表面损伤观察 放大倍数2100x（样品及测试环境：中国科学院半导体研究所）用不同颜色展现样品表面的高低形貌观察光栅 放大倍数：2100x用不同颜色展现样品表面的高低形貌（样品及测试环境：中国科学院半导体研究所）硅片表面结构3D图像 放大倍数2100x用不同颜色展现样品表面的高低形貌金属材料3D形貌，奥氏体 放大倍数：1000x真彩共聚焦模式下拍摄的奥氏体感谢北京大学微电子工艺实验室与中国科学院半导体研究所提供的检测样品及测试环境。希望立足于此，将来为中国科学研究及精密测量领域提供更优质的设备与服务。      

中国贵阳 | 2017年8月12日：中华医学会神经外科学分会第十六次学术会议胜利闭幕。徕卡显微系统（简称“徕卡”）携全球顶尖手术显微镜M530 OHX与即将上市的AR荧光（增强现实荧光技术MFL800）亮相此会议。众多参会者对即将上市的AR荧光表现出极大的关注，成为国内第一批血管荧光突破性新技术的见证者，共同见证“AR荧光”将不可能变成可能。AR荧光完美好地弥补了手术显微镜传统成像及观察方式的缺陷，是目前市场上唯一可实现“实时可视”的白光血管造影，搭载徕卡M530系列显微镜，为您提供脑血管病的全新解决方案。徕卡显微系统总裁Mr.Markus Lusser介绍说“在精密且复杂的神经外科手术中，手术显微镜仅提供卓越的光学质量是远远不够的。徕卡显微系统一直致力于发展创新技术，聆听客户的需求，这促使我们开发出创新的方法来增加外科手术的可视化，让外科医生能够尽可能的看得更多，增强手术信心。此外，我们也确保AR荧光这项新技术可以集成到徕卡现有高端神经外科手术显微镜中，这将使手术医生和医院具有更高的购买灵活性，并帮助他们在AR荧光的发展中始终保持领先优势。”AR荧光（MFL800）可以将近红外荧光成像与白光图像相结合，形成一个单一实时的可视化白光图像。外科医生将能够实时看到白光图像及彩色荧光图像，而不需要在白光图像和黑白荧光图像之间切换。通过将AR荧光图像投射到双目镜筒中，手术医生可通过目镜实时观察解剖结构及荧光效果，为手术决策提供实时有效的信息。MFL800的上市将解决当前的脑血管病手术中，使用血管荧光造影时术者的目光需要不停地在目镜下的白光图像和屏幕上的黑白图像中来回切换问题，实现在目镜下看到实时的白光解剖图像，同时呈现彩色的血流荧光图像，从而帮助术者始终将注意力放于手术操作上。【Leica M530 OH6手术显微镜与MFL800的完美结合】感谢德国科隆医疗中心神经外科Cleopatra Charalampaki教授提供的手术照片作为MFL800的搭载平台M530 OHX显微镜同样受到众多问询。 — M530 OHX拥有融合光学专利技术，结合智能的精显照明技术和全复消色差光学元件，呈现骄人成像品质。 — FusionOptics 融合光学技术巧妙地利用人眼的双眼视觉本能，独辟蹊径，从分别精密设计的两条光路中摄取不同的信息，并通过大脑将这些视觉信息合成为一副最佳的立体图像，视野可见的清晰区域 (景深范围)变得更广。【展台现场徕卡销售进行专业讲解】徕卡自1849年创立以来始终致力于推动光学技术进步，突破视觉极限帮助客户提升洞察、探索世界徕卡将通过持续的创新，带来更多尖端、前沿的产品让我们共同期待 想了解更多精彩资讯，请关注徕卡显微系统公众号，或登录徕卡显微系统官方网站查询。关于徕卡显微系统Leica Microsystems徕卡显微系统是全球显微科技与分析科学仪器之领导厂商，总部位于德国维兹拉(Wetzlar, Germany)。主要提供显微结构与纳米结构分析领域的研究级显微镜等专业科学仪器。自公司十九世纪成立以来，徕卡以其对光学成像的极致追求和不断进取的创新精神始终得到业界广泛认可。徕卡在复合显微镜、体视显微镜、数码显微系统、激光共聚焦扫描显微系统、电子显微镜样品制备和医疗手术显微技术等多个显微光学领域处于全球领先地位。 徕卡显微系统在全球有七大产品研发与生产基地，在二十多个国家拥有服务支持中心。徕卡在全球一百多个国家设有区域分公司或销售分支机构，并建有遍及全球的完善经销商服务网络体系。

金相大赛的由来来金相大赛的由来全国大学生金相技能大赛是一项大学生专业技能比赛，因在显微镜下观察金属材料的内部组织结构称为显微组织或金相组织而得名。最初是由清华大学、北京科技大学、昆明理工大学、重庆大学、东南大学、中南大学、国防科技大学、湖南大学、上海应用技术学院等高校联合发起的一项大学生赛事。2012年，徕卡显微系统作为显微镜观测技术的领航人，为了给参赛师生创造更好的比赛环境，正式加入全国大学生金相大赛，为比赛提供裁判用机，开启了“徕卡杯”的历程。多年来全国大学生金相技能大赛一直秉承以赛促教，以赛促改，以赛促学，促进校际交流的宗旨，成为一项得到教育部有关部门认可的全国性大学生赛事。今年第六届“徕卡杯”全国金相大赛由南昌大学、南昌航空大学和江西科技师范大学联合承办。经过激烈的层层厮杀，最终共150所大学晋级本次全国总决赛，2017年10月9日会师于江西南昌。本届大赛无论是参赛高校数还是参赛选手数，都有望创下全国大学生金相大赛的历史新高  华东预赛场：上海应用技术大学上海应用技术大学作为全国金相大赛首批参与的学校之一，六年来徕卡显微系统一如既往的助力学校师生在金相研究领域的不断自我突破。 华北预赛区：内蒙古 内蒙古工业大学和内蒙古科技大学，作为近两年来大赛的新鲜力量，给大赛带来了更多活力，更进一步扩大了“徕卡杯”金相大赛的影响力。  华南预赛区：华南理工大学 对于徕卡显微系统和华南理工来说，今年都是不平凡的一年，是“徕卡”第一年在预赛阶段就走入校园，学生一路过关斩将勇闯决赛，期待着大家在南昌的巅峰对决中再创佳绩。 相聚南昌 金秋10月，金相天骄，相约徕卡，一决高下！ 关注徕卡官微，可以持续了解后续赛事详情！成相神器-神奇的成像！  如果大家有任何成像问题，欢迎投稿或者在公众号里留言！         

徕卡邀您共赴2017神经外科年会中国贵阳 2017年8月10-12日：中华医学会神经外科学分会第十六次学术会议将在中国避暑之都贵阳举行。届时徕卡显微系统（简称“徕卡”）将携全球顶尖手术显微镜M530 OHX亮相此会议。盛夏的贵阳，气候依然凉爽宜人，花溪水依偎于青岩镇边，甲秀楼屹立在南明河畔。徕卡诚邀您出席会议，欢迎您来展台莅临参观并现场操作试用。 融合光学帮助您同时获得大景深和高分辨率您是否在为同一图像中同时获得大景深和高分辨率而困扰？徕卡M530 OHX以其创新的FusionOptics 融合光学技术解决了这一困扰。FusionOptics 融合光学技术巧妙地利用人眼的双眼视觉本能，独辟蹊径，从分别精密设计的两条光路中摄取不同的信息，使左眼获取具有最佳分辨率的图像，右眼则获取具有最大景深的图像。并通过大脑将这些视觉信息合成为一副最佳的立体图像，视野可见的清晰区域 (景深范围)变得更广，图像清晰度令人惊叹。更大的图像清晰范围 (景深范围)意味着更少的调焦操作，从而提高工作流程效率。双荧光让您看得更多Leica M530 OHX 可以同时内置两种荧光模块：Leica FL800血管荧光模块以及Leica FL560荧光模块。只需一键切换，就可轻松地从白光模式切换为任意一种荧光模式或在两种荧光模式之间切换。可方便地在屏幕上查看并记录极佳的高清荧光影像。个性化设置让您更专注为满足您及您独特的手术需求，徕卡M530 OHX的智能人体工学特性和顺畅的操控特性可减少暂停手术或者分散注意力的次数，使用方便、操作流畅、一键实现六个轴完全平衡的自动平衡系统，从而帮助您始终将注意力放于手术操作上。更可根据您的需要个性化配置各种影像系统，通过模块化集成式设计，无论是现在或将来，都可轻松配置。想要了解更多徕卡M530 OHX吗？欢迎您莅临徕卡展台（贵阳国际生态会议中心1F B34-35展位）参观操作我们将有专人为您带来更多更深入的解读。关于徕卡显微系统Leica Microsystems 徕卡显微系统是全球显微科技与分析科学仪器之领导厂商，总部位于德国维兹拉(Wetzlar, Germany)。主要提供显微结构与纳米结构分析领域的研究级显微镜等专业科学仪器。自公司十九世纪成立以来，徕卡以其对光学成像的极致追求和不断进取的创新精神始终得到业界广泛认可。徕卡在复合显微镜、体视显微镜、数码显微系统、激光共聚焦扫描显微系统、电子显微镜样品制备和医疗手术显微技术等多个显微光学领域处于全球领先地位。 徕卡显微系统在全球有七大产品研发与生产基地，在二十多个国家拥有服务支持中心。徕卡在全球一百多个国家设有区域分公司或销售分支机构，并建有遍及全球的完善经销商服务网络体系。

中国贵阳 2017年8月10-12日：中华医学会神经外科学分会第十六次学术会议将在中国避暑之都贵阳举行。徕卡显微系统（简称“徕卡”）此次将为各位专家带来即将上市的增强现实的荧光技术（MFL800）。您是否在困扰？由于当前的技术与产品的局限，在脑血管病手术中使用血管荧光造影，术者的目光需要不停地在目镜下的白光图像和屏幕上的黑白图像中来回切换。您是否在思考，如何才能够抛开如此麻烦的流程？您是否在期待，有一种技术可以实现在目镜下看到实时的白光解剖图像，同时呈现彩色的血流荧光图像？您的困扰与期待，徕卡都了解，即将上市的增强现实的AR荧光技术（MFL800）将为您的手术带来不可思议的改变。*照片来自德国科隆医疗中心神经外科Cleopatra Charalampaki教授，以及日本旭川医科大学神经外科Kyousuke Kamada教授想要了解更多徕卡增强现实的荧光技术（MFL800）欢迎您莅临徕卡展台（贵阳国际生态会议中心1F B34-35展位）我们将有专人为您详细介绍该技术或点击“阅读原文”，在页面中提交您的详细信息，我们将为您奉上相关手术视频和文献！增强现实的荧光技术（MFL800）coming soon敬请期待！关于徕卡显微系统Leica Microsystems 徕卡显微系统是全球显微科技与分析科学仪器之领导厂商，总部位于德国维兹拉(Wetzlar, Germany)。主要提供显微结构与纳米结构分析领域的研究级显微镜等专业科学仪器。自公司十九世纪成立以来，徕卡以其对光学成像的极致追求和不断进取的创新精神始终得到业界广泛认可。徕卡在复合显微镜、体视显微镜、数码显微系统、激光共聚焦扫描显微系统、电子显微镜样品制备和医疗手术显微技术等多个显微光学领域处于全球领先地位。 徕卡显微系统在全球有七大产品研发与生产基地，在二十多个国家拥有服务支持中心。徕卡在全球一百多个国家设有区域分公司或销售分支机构，并建有遍及全球的完善经销商服务网络体系。

作者：Thomas Veitinger 博士比率成像技术被广泛用于研究高动态细胞内的离子、电压以及 pH 变化，但这项技术最普遍的应用领域却是钙成像。除此之外，比率成像技术还被用于研究细胞信号通路，比如，钙离子在同种细胞或不同细胞类型之间传递并形成浓度梯度，从而改变细胞的离子浓度、电压或 pH 值。同时，比率成像技术对 FRET 检测也大有裨益，它能够极大的改善所获取图像的信噪比。*比率成像技术的典型应用领域比率成像被广泛用于研究高动态细胞内离子、电压或 pH 的变化。但这项技术最普遍的应用领域却是钙成像。钙离子是最重要的第二信使之一，受到众多研究人员的特别关注，它能够调节各种不同的细胞功能，例如，突触传递（胞吐）、肌肉收缩、细胞凋亡，并可作为很多酶类的辅助因子。钙离子可在高度特异性、高度动态性以及偶尔空间受限的方式下，发挥这些功能。细胞内钙浓度的微小变化会对细胞状态产生深远影响。因此，细胞生物学家对测定绝对钙浓度（通常为离子浓度）有着浓厚的兴趣。此外，还应注意的是，在细胞中很多离子、电压或 pH 值的变化并不是一致的，它们在不同的细胞区室中起着不同的作用。在上述研究中，细胞中不同部位的绝对或相对钙离子浓度受到研究人员的广泛关注。在一个细胞中，不同形态区域的钙浓度仅可通过比率成像技术进行可靠比对。比率成像技术还被用于研究各种细胞信号通路，其中，钙离子在同种细胞或不同细胞类型间传递形成的相对钙浓度梯度可以动态地改变离子、电压或 pH 值。要了解细胞信号通路，就必须了解离子、电压或 pH 值的绝对和相对变化。再次强调，只有通过比率成像技术，方可获取可靠的定量和参考结果。除此之外，比率成像技术对 FRET 检测也大有裨益，它能够极大改善所获取图像的信噪比。*特定荧光基团是比率成像技术的关键所在要完成比率成像，必须满足与成像设备相关的几个前提条件。首先，必须选择适当的荧光基团或荧光基团组合，这些可以是合成染料或蛋白质结构。本文详细描述了几种用于比率成像的染料，这些染料可因离子结合、电压改变或 pH 变化而出现发射位移的现象。检测上述位移有两种方式：其一，由两个独立波长的光交替激发双激发染料，并在单一波长处检测发射位移（例如，fura-2，图 1a）。第二，由单一波长的光激发染料，并在两个独立的波长处检测发射位移（例如，indo-1，图 1b）。原则上，还可以在细胞内同时载入两种不同的荧光染料，这时出现光强变化而非发射位移（例如，fluo-3 和 fura red，图 1c）。本文还介绍了将对离子、电压或 pH 不敏感的荧光基团共同载入细胞的现象，上述荧光基团可充当参考染料。组合染料的优势是可以使用激发波长较长的染料。这种染料对细胞的损伤要比使用受紫外光或近紫外光激发的比率染料对细胞造成的损伤更小（例如，Fura-2），因为波长可见的光，其光毒性较小。而这种方法的缺点在于，必须将两种染料都载入细胞内。但是，组合荧光基团要具有相似的发射或激发波长，这一点是非常重要的。最后，很多专门用于 FRET 检测的蛋白结构也适用于比率成像。图 1：部分钙敏感型染料或染料组合的光谱。(A) 在 510 nm 处的 fura-2 发射染料适用于不同的激发波长（通常用波长为 340 nm 和 380 nm 的光进行双重激发）。依据钙浓度，在 340 nm 波长处荧光强度将增加，并在 380 nm 降低。(B) 利用 338 nm 激发的 indo-1 发射光谱。发射强度将在 400 nm 波长处增加，并在 500 nm 波长处降低。(C) 在 488 nm 波长处激发的 fluo-3 和 fura red 组合。fluo-3 强度将在 520 nm 波长处增加，而 fura red 强度将在 660 nm 处降低，从而实现比率成像。(D) 在 488 nm 波长处激发的非比率染料 calcium green 的发射光谱。在 510 nm 波长处的光强将因钙结合而增加。在这种情况下，无法实现比率成像。图片来源：Molecular Probes® 公司手册——在线版本。*化学染料、染料组合和蛋白质结构下面是部分满足比率成像的化学染料、染料组合以及蛋白质结构的列表：表1：适用于比率钙成像的荧光基团/荧光基团组合   表2：适用于比率离子成像的荧光基团表3：适用于比率 pH 成像的荧光基团表4：适用于比率电压成像的荧光基团表 1-4 中的所有激发和发射波长均为近似值。表中所示的 Kd 值不尽相同，这主要取决于（体外/原位，缓冲溶液）实验条件以及与其他离子发生串色现象还有其自身相应的浓度。有关详细光谱和 Kd 值，请查看Molecular Probes® 公司手册 —— 第 11版。*专业化设备是比率成像的前提条件要实现比率成像，计算比率所需的两个灰度图像采集间隔时间必须尽量短。为满足上述要求，必须实现激发或检测波长的快速切换、保持短暂激发持续时间以及快速图像获取。为尽可能缩短激发持续时间，建议采用能高效发射激发波长的大功率光源（例如，大功率直流灯 (>200 W)、激光）和光学器件，以满足所需波长的条件。采用快速荧光滤块转盘与强光源可实现激发/发射波长之间的快速切换，仅需数毫秒即可实现激发/发射波长之间的切换。此外，单色光镜或激光与 AOTF（声光可调谐滤色器）配合使用，可实现激发波长之间的快速切换。最后一个重点是，一台功能良好的照相机（可以是EM-CCD）兼具了合理的分辨率以及高灵敏度的优势，可快速获取图像，这是最新比率成像实验的前提条件。比率成像技术本身具备的高帧速率就是一项显著优势，因为很多研究过程都具有高度动态性，并且条件可在数秒内变化。 *影响受测荧光光强的因素荧光基团浓度细胞内的荧光基团浓度对发射的荧光光强会造成较大影响。可以很容易想到，细胞内的荧光基团越多，发射的光就越多。不幸的是，实验中很难控制细胞内的荧光基团浓度。合成染料（例如，Fura-2）的穿透细胞膜的能力会受到细胞外侧的荧光基团浓度以及孵化时间的影响。但是，最终到达细胞内的染料数量很大程度上取决于制备类型（例如，切片）、细胞类型或细胞系。一般情况下，在组织切片中，染料渗入细胞的效果要比细胞系、原始培养物或分离的单细胞中差一些。此外，不同细胞中的染料数目也不尽相同（取决于细胞健康状态、代谢状况等）。使用蛋白荧光基团取代合成染料时，胞质溶胶中的荧光基团数量取决于转录/翻译速率以及蛋白质转换。通过使用特殊的启动子（插入特定DNA 或氨基酸序列来得到），可以控制蛋白质的转录和翻译速率。但这只能为实验者带来有限的控制效果，因为合成蛋白质的实际速率取决于很多因素（例如，细胞的健康状态、细胞龄以及细胞类型）。再次强调，即使在同个细胞系或一个单细胞内，转录/翻译速率、转运速率以及蛋白质转换速率也可能不尽相同。基于上述因素，我们无法估算一个细胞或部分细胞中的实际荧光基团数量。样本直径常规荧光成像的另一个问题是，z 轴中的样本直径 (d) 存在差异。样本直径的范围很广，从几纳米（部分单一细胞，例如，树突、轴突、精子鞭毛）到几微米（单层细胞、单一细胞体质）再到几百微米（例如，棒状切片）。在荧光成像技术中，光路中的所有染料均受到激发和检测（例外情况：共聚焦显微成像，TIRF），导致样本较厚部分的荧光光强大大高于其他部分的荧光光强。这很容易产生误释，因为较薄结构可能不如细胞其他部分那样“亮”，但实际上其离子（例如，钙）浓度却比其它部位高很多。尽管如此，这些部分的亮度看起来仍大大低于光路中相应的荧光基团数量，因此，检测到的光强较低。光学常数最后一个重点是，不同样本（细胞类型；切片、细胞培养物、单一细胞等）中的光学常数 (K) 以及成像设备各有不同。不同的细胞类型拥有不同的折射率和透光率，这主要取决于这些细胞的形态。在设备方面，不同的制造商提供的光学部件，例如，二向色镜、滤光片、物镜等，也分别具备不同的透光率。此外，不同的光源具备不同的光发射强度（例如，激光、氙弧灯、汞弧灯），其会对荧光基团激发效率产生较大影响，并因此影响由荧光基团发射出来的光数量。最后，在发射光的检测方面，也表现出巨大不同，这取决于所用的常规 CCD 照相机、EM-CCD 照相机或光电倍增管等。此外，不同制造商以及相同制造商提供的不同产品类型在光子灵敏度方面也存在着显著差异。还有一点值得注意，即使同一制造商生产的相同产品类型，例如，物镜或照相机等，也存在着差异。所有这些条件都使得每个单一成像设备存在轻微差别，而每个单一成像设备也具有其自身的光学常数(K)。这再次验证了上述观点，即无法通过简单测量光强估算出细胞中钙离子等的数量。    作者简介：Thomas博士毕业于德国波鸿鲁尔大学，主攻生物学，并获得发育神经生物学博士学位。在一篇博士论文中，他研究人精子中由气味驱动的亚细胞钙动态变化，在活细胞成像方法和生理学方面积累丰富经验。作为博士后，他曾在德国亚琛大学化学系工作。在那里，他使用膜片钳技术和活细胞成像来研究雄性干细胞。自2011年5月起，他作为产品经理加入徕卡显微系统，主要负责活细胞成像，电生理和神经科学方面的应用。   

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