【飞诺美色谱】畜禽肉中甲硝唑、地美硝唑残留量检测 LC-MS/MS 法

硝基咪唑类 (Nitroimidazoles) 药物是带有硝基的咪唑化合物，其性状为白色或淡黄色结晶，弱碱性，能和酸结合成盐，遇光易分解，易溶于甲醇，微溶于水，主要用于预防和治疗家禽的滴虫病、猪的出血性下痢及厌氧菌感染， 并具有促生长作用，但是该类药物对哺乳动物具有致癌、致畸、致突变作用和遗传毒性。因此欧盟、北美和我国等都禁止了硝基咪唑在食品动物中的使用。农业部 1025 号公告-2-2008 规定了在畜禽肉中硝基咪唑类药物残留方法检出限为 1 µg/kg。

1.样品提取
称取 2.00 g (精确到 0.01 g) 均质好的样品，置于 50.0 mL 离心管中，加入 15.0 mL 乙酸乙酯，涡旋振荡 2min， 4000 rpm 离心 5min，上清液转移至 80 mL 顶空瓶中，残渣用 15.0 mL 乙酸乙酯重复提取一次，合并两次提取液，加入 4 g 氯化钠和 20.0 mL 正己烷，振荡器上振荡 10 min，
4200 rpm 离心 10 min，小心吸取下层乙酸乙酯层于另一离心管中，氮气吹至近干， 用 6 mL 0.1 mol/L 盐酸溶液溶解残渣备用。

2.净化方法
先将 Cleanert® PCX (60mg / 3mL)小柱分别用 2.0 mL 甲醇、2.0 mL 0.1 mol/L 盐酸水溶液活化平衡，然后样品残液过柱 (流速控制在 2~3 mL/min)，弃去滤液；再用 1.0 mL 0.1 mol/L 盐酸水溶液、1.0 mL 甲醇和 1.0 mL 甲醇-水 (1:9，v/ v) 淋洗 SPE 柱，弃去淋洗液，最后用 3.0 mL 甲醇-5%氨水(3:2，v/v) 洗脱于锥形试管中，40℃氮气吹干。用 1 mL甲醇- 水溶液 (1:9，v/v) 溶解残留物，过 0.22 µm 滤膜后待测。

3.检测方法

3.1色谱条件
色谱柱：Venusil® ASB C18，
2.1×100 mm，5 µm，150 Å； 流动相：A 相-水，B 相-乙腈
柱 温：35℃； 进样量：5 µL；

表 1 液相色谱梯度洗脱条件

3.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子扫描

电喷雾电压：5500 V

雾化气压力：55 psi
气帘气压力：13 psi

辅助气压力：60 psi

离子源温度：600℃
采集方式：多反应监测 (MRM)
Q1、Q3均为单位分辨率质谱参数 (见表2)

4.实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测甲硝唑和地美硝唑，加标量为 1.0 µg/kg 加标回收率为90%~100%，能够满足检测要求。由图1可看出经 Cleanert® PCX 固相萃取柱净化，采用 Venusil® ASB C18 色谱柱检测能够使甲硝唑和地美硝唑得到良好的分离，且两种物质峰形良好，保留时间稳定。

结论：

本实验建立了硝基咪唑类残留量检测的 LC-MS/MS 检测方法，并结合固相萃取技术对禽畜类肉中硝基咪唑类药物的残留量进行了测定。对于加标量为 1 µg/kg 的样品进行了检测，回收率在 90%~100%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中的硝基咪唑残留量。

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