【飞诺美色谱】动物源性食品中氯霉素残留量检测 LC-MS/MS 法

氯霉素 (chloramphenicol，chloromycetin) 是由委内瑞拉链霉菌产生的抗生素。属广谱抑菌抗生素,是治疗伤寒, 副伤寒的首选药,治疗厌氧菌感染的特效药物之一,其次用于敏感微生物所致的各种感染性疾病的治疗。用于治疗由伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、流感杆菌、布氏杆菌、肺炎球菌等引起的感染由于氯霉素可引起严重的毒副作用， 故临床仅用于敏感伤寒菌株引起的伤寒感染、流感杆菌感染、重症脆弱拟杆菌感染、脑脓肿、肺炎链球菌或脑膜炎球菌性脑膜炎同时对青霉素过敏的患者，由于不良反应严重现用得越来越少。中国行业标准 SN/T 1864-2007 中规定其检测底限为 0.1 µg/kg。

1.样品提取
称取 5.0 g (精确到0.1 g) 粉碎好的样品，置于 50 mL 离心管中，加入 20 mL 乙酸乙酯，在均质器中以 14000 rpm均质 30 s，以 3000 rpm 离心 5 min，定量滤纸漏斗加约 25 g 无水硫酸钠于浓缩瓶口，将离心过的上层乙酸乙酯提取液由滤纸漏斗过滤至浓缩瓶中，重复两次。合并滤液于50℃以下减压浓缩至近干，用 4 mL 正己烷和 4 mL 水依次将残渣转移至 10 mL 玻璃离心管中，2000 rpm 涡旋混合 1 min，2000 rpm 离心 3 min，弃去上层正己烷溶液，再加入4 mL 正己烷，重复上述操作，下层水层做待净化液。

2.净化方法
先将 Cleanert® C18 (500mg / 3mL) 小柱分别用 5 mL 甲醇和5 mL水平衡，然后将待净化液过柱(流速控制在2~3 mL/min)，10 mL 水两次洗涤离心瓶，弃去滤液；再用 5 mL 甲醇:水 (2:8, v/v) 溶液淋洗，弃去淋洗液，将小柱负压抽干；最后用 6 mL 甲醇洗脱。收集洗脱液于 40℃ 氮气吹近干，5 mL 水复溶，过 0.22 µm 滤膜后待测。

3.检测方法

3.1色谱条件
色谱柱：Venusil® MP C18，
2.1×50 mm，2.5 µm，100 Å； 流动相：A 相-水，B 相-乙腈
柱 温：35℃； 进样量：5 µL；
表 1 液相色谱梯度洗脱条件

3.2质谱条件
离子源：电喷雾离子源

扫描方式：负离子扫描

电喷雾电压：-5500 V

雾化气压力：60 psi
气帘气压力：12 psi

辅助气压力：50 psi

离子源温度：600℃
采集方式：多反应监测 (MRM)
Q1、Q3 均为单位分辨率质谱参数 (见表2)

4.实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测氯霉素，加标量为 1.0 µg/kg、10 µg/kg 加标回收率在70%~120% 之间，RSD 值小于10%，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经 Cleanert® C18 固相萃取柱净化，采用Venusil® MP C18 色谱柱检测得到的氯霉素峰形良好，且保留时间稳定。

结论：
本实验建立了动物源性食品中氯霉素残留的 LC-MS/MS 检测方法，并结合固相萃取技术对氯霉素的残留量进行了测定。对于加标量为 1 µg/kg、10 µg/kg 的样品进行了检测，回收率在 70%~120%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中的氯霉素残留。

5.订货信息