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隔膜泵在饮料中微生物的检验（滤膜前处理法）中的作用
2023/03/13 13:43
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方案摘要：
产品配置单：
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型号： WHMIX drive6
产地： 德国
品牌： WIGGENS
¥1.44万
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型号： WH200-C
产地： 德国
品牌： WIGGENS
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型号： CSC520
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型号： WCI-180T
产地： 德国
品牌： WIGGENS
¥5万 - 10万
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WIGGENS DVR580真空控制器
型号： DVR580
产地： 德国
品牌： WIGGENS
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方案详情：
隔膜泵在饮料中微生物的检验（滤膜前处理法）中的作用
（根据中国饮料工业协会发布的团体标准T/CBIA005-2019 ）
一、原理
滤膜是一种微孔薄膜，当一定量的样液通过滤膜时，细菌、霉菌和酵母菌等微生物被截留在滤膜上。然后将滤膜贴于相应的培养基上培养，计数滤膜上生长的菌落数斌进行相应确认试验，即可相应测得该样品的菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母菌等微生物数量。
二、使用仪器
1. 无菌滤膜 微孔滤膜，直径47mm/50mm，孔径为0.45um
2. 过滤装置
3. 真空泵或隔膜泵
4. 抽滤瓶
5. 拍击式均质器及均质袋
6. 电子天平
7. 无菌平头镊子 无菌吸管 1ml、10ml或其他可精确刻度的无菌量器及吸头
8. 无菌瓶 500ml、无菌培养皿 直径50~90mm
9. 恒温培养箱：36±1℃，28±1℃
10. 恒温水浴箱：46±1℃
三、分析步骤
1. 样品制备 （1）液体样品混匀备用
（2）饮料浓浆和固体饮料样品 取25ml样品置盛有225ml无菌磷酸盐缓冲 液或无菌生理盐水的无菌均质袋中，用WIGGENS HG400 pro拍打式均质器拍打1~2min，制成1:10的样品匀液。
（3）根据对样品污染状况的估计，选择1~3个适宜稀释度的样品匀液抽滤检验，每份样品的过滤量不少于10ml。
2.过滤 （1）用WIGGENS BioVac630B 多联抽滤套装，用无菌平头镊子夹取无菌滤膜边缘部分，正面向上，贴放在已灭菌的滤床上，放入无菌滤杯并固定。
（2）无菌吸取不少于10ml待测样液至滤杯内，进行抽滤，当样液全部抽滤后，使用不少于15ml无菌稀释液至滤杯。抽滤后取下滤杯，用无菌平头镊子移取滤膜。
（3）将滤膜截留微生物面向上贴于相应的培养基平板上，平铺并避免在滤膜和培养基之间产生气泡。
（4）使用的无菌稀释液进行空白对照实验。
3.验证 （1）菌落总数参照GB4789.2-2016执行
（2）大肠菌群参照GB4789.3-2016执行
（3）霉菌和酵母参照GB4789.15执行
四、计算方法
1.若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计算范围内时，按照GB4789.2-2016中7.1.2执行
2.平板上的数值乘以相应稀释倍数，作为每毫升样品中菌落总数、大肠菌群、霉菌和酵母的计算结果。
3.菌落总数和大肠菌群应选取菌落数在100CFU以内无蔓延菌落生长的平板计数；霉菌和酵母应选取菌落数在50CFU以内无蔓延的WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器
4.当滤膜上有较大片状菌落生长时，则此平板结果不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板记录菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2，代表一个平板菌落数；细菌大于100CFU的可记录为多不可计，霉菌和酵母菌大于50CFU的可记录为多不可计。
5.当滤膜上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
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