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徕卡 101 样本诊断流程小贴士：第64-72步
第64-72步
徕卡101
组织脱水、透明、浸蜡、包埋
从患者到病理学家，准备样本进行诊断需要细心、经验以及合理的流程。
徕卡特地为大家整理了取材、组织脱水、透明、浸蜡、包埋以及染色等（常规、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，帮助大家更有效、更简单地获得实验方案，避免错误的发生。
步骤六十四
了解染色
?? 正确：了解你正在做的染色。
?? 错误：只是“跟随操作方法”，而不是真的知道染色结束需要观察什么，可能会导致不够好的染色结果。
A.PAs肝染色，正常情况下，脂褐素及糖原PA染色呈阳性，胆汁和含铁血黄素PAS染色呈阴性（分别为黄色和棕色）。
B.银 Gomer i染色方法染肺部真菌（曲霉属）感染。大多数城市居民和吸烟者肺中的一个共同特征，即真菌的菌丝在非染色情况下都是黑色的。
步骤六十五
使用阳性对照
?? 正确：总是使用阳性对照片可以清晰的知道，是否包含想要展示的结构/物质。
?? 错误：如果我们在玻片中没有看到想要显示的结构或物质，我们认为它是不存在的。
使用Perl’s方法证明肝硬化含铁血黄素（蓝色）包含铁。这是一个较好的铁阳性对照染色。
步骤六十六
使用精确时间
?? 正确：使用精确时间
?? 错误：时间总是大概。不精确的时间产生不一致的结果。
这两张皮肤玻片来自同一块蜡块，同样使用PAS染色。A玻片酸处理（氧化步骤）为5分钟，而B玻片只有30秒（错误）。结果B玻片基底膜染色效果很差。
步骤六十七
??正确：注意使用试剂的保质期。部分试剂或染料溶液会渐渐改变，另一些试剂和染料溶液不稳定，必须即配即用，还有的需要经过一段时间的氧化（成熟）才可以使用。
?? 错误：我们假设所有的试剂都可用于不确定的周期。
Weigert’s 苏木素由于过氧化呈现不干净的染色效果，请注意胶原的棕色染色。
步骤六十八
正确储存试剂
?? 正确：正确储存试剂。有些试剂需要冷藏，因为容易滋生真菌或霉菌。有的光敏感试剂，需要在黑暗中储存。
?? 错误：“我们所有的试剂都储存在染色平台上的架子上。有时我们能在玻片上看到散在的其他有机物。”
使用长了微生物的染色溶液（苏木素）对玻片进行染色，可见大量外来微生物覆盖在组织切片顶部。
步骤六十九
遵守染色方法
?? 正确：认真完成程序的每一步。
?? 错误：当使用相同的程序时，不同操作人员取得不同的染色结果。
福尔马林固定的粘膜下层进行马松三色染色( Masson trichrome)。在正确执行染色步骤时，包括第一步铬酸染色（敏化或二媒染），A玻片呈现红色的平滑肌。B玻片染色时,这一步被跳过，B玻片中可见肌肉缺乏差异性着色（小肠）。
步骤七十
记录所有更改
?? 正确：记录所有实验中偏离。
?? 错误：染色结果不好，却很难找寻原因，因为程序变化时没做记录。
浸银染色网状纤维有背景（沉淀），如果染色时没有精确的执行染色步骤，则很难确定引起这样问题的原因，( Gordon& Sweets染色法，肾脏）。
步骤七十一
??正确：注意洗涤步骤。尽可能规范操作，因为这经常引起结果的变化。
?? 错误：实验室工作人员使用不同的洗涤方法，有些人使用剧烈的搅拌，另一些则更为温和。
使用相同的方法进行肝染色，唯一的区别是操作人员冲洗，洗涤步骤。网状纤维均为黑色，但A比B呈现的更好( Gordon& Sweets法）。
步骤七十二
认真设置显微镜
??正确：在关键阶段，如分化步骤使用显微镜在微观下观察控制。要注意在玻片湿润未封片的情况下，显微镜的设置，可能呈现虚假的背景染色。
?? 错误：对所有染色方法都只用裸眼观察玻片。
A.湿组织(无盖玻片)在显微镜下看关闭闭聚光器和光阑。注意假背景。
B.湿组织(无盖玻片)在显微镜下看打开聚光器和光阑。注意清晰的背景。
接下来我们将会为大家带来切片、优化脱蜡和试剂应用、考虑抗体交叉反应等操作流程小贴士，感兴趣的话可以关注我们徕卡101系列，后续我们将会为您奉上更详尽的内容。
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