徕卡101样本诊断流程小贴士：第20-30步

徕卡101

??正确：按照组织的类型和大小选择合适的脱水程序；

?? 错误：使用不适合的脱水程序，比如：小组织长时间脱水，大组织或者脂肪组织脱水时间过短。

A. 内窥镜活检 (H&E)脱水时间过长， 组织变得很脆，导致大量的

切片裂痕，而且切片技术不好会加剧这个现象；

B. 镜下可见从大的脂肪样本中选取的皮下组织脱水不足，纤维脂

肪组织浸蜡不充分，核界变得支离破碎。

??正确：优质的脱水效果以及好的组织形态基于充分的固定，所以在脱水前中加入固定步骤；

?? 错误：在没有充分固定的情况下，直接放入乙醇中产生“带状固定”  （福尔马林固定的是样本表面，而乙醇则是固定更深层次的区域）  。

A. 骨髓穿刺“带状固定”图：左上部的红细胞完整，而右下角细胞

则部分溶血；

B. 三色染色的肝组织“带状固定”图：外层和里层的染色结果是不一样的。

??正确：脱水试剂更换严格按照标准化的操作指南进行（最理想的就是按照 Leica 最先进的组织脱水机 Peloris Il 上的试剂管理系统要求操作）；

?? 错误：不按照指南进行操作，忽略脱水试剂更换，这意味着使用无效的、受污染的或者浓度过低的试剂（比如忽略Peloris试剂管理系统“超过临界值”的警告），由此导致差的脱水质量。

从大皮肤样本中取出的切片，由于不充分的组织脱水导致大量胶原蛋白流失。这个案例很可能就是使用了严重污染的超过“临界值”的试剂。

??正确：高质量的石蜡用于浸蜡和包埋，确保高质量的蜡块，易于切片；

?? 错误：便宜的、低质量的石蜡产品进行浸蜡和包埋，导致切片困难。

蜡块冷却后进行缓慢的切片可以切成蜡带。图中虽然在低温下进行切片，切片仍有轻微的皱缩，主要是由于低质量的石蜡使切片不能很好的成片

??正确：可能使用无二甲苯程序（如 Leica Peloris II 高端脱水机），在确保更安全的工作环境的同时也能获得最好的脱水效果;；

?? 错误：没有考虑二甲苯对身体的影响，不使用二甲苯替代物。

二甲苯替代物在保证操作人员的安全同时确保脱水质量。

??正确：样本必需按照正确的方向放置。高质量的取材方式，可以确保样本表面平整。技术员必需经过良好的培训才能进行包埋，并且随时可根据样本情况进行样本描述；

?? 错误：如果样本方向错误，就要重新进行包埋，这有可能导致组织的丢失。样本包埋得不好的话，可能会需要修片多一点，以获得更全的切面。

这个内窥镜活检组织放置的方向不对，仅显示了黏膜的表面。

??正确：针对每一个样本选择大小合适的模具；

?? 错误：一种的模具用于所有的样本。有可能样本已经碰到模具的边缘了。

A. 对这个样本来说，这个模具太小了，样本已经到蜡块边缘了，切片可能会很难；

B. 不同大小的模具适合不同大小的样本。

??正确：包埋过程中轻轻地夹取样本；

?? 错误：为了使样本平贴在模具中，样本被强力挤压，这会导致有些组织断裂。

脾脏的 H&E 染色切片：包埋过程中为了样本平贴在模具中，强力挤压，导致组织中间断裂。

??正确：夹取组织之前，热钳加热到蜡刚刚融化的温度；

?? 错误：热钳加热温度超过蜡的熔点，这可能会引起局部过热或者靠近热钳的地方变形。

肝脏的 H&E 染色切片：局部破坏（组织基本没法辨识），这是由于包埋过程中组织局部过热引起。

??正确：定期检查热盘和蜡缸的温度；

?? 错误：从来不检查热盘的温度，导致样本会因局部过热而被破坏。

淋巴结由于热盘过热而被破坏，图中可以看到细胞萎缩、核固缩以及细胞开裂。细胞开裂也可能的原因是展片时温度过热或者热盘干燥时没有充分排水。 

??正确：模具加蜡适量，不能过多；

?? 错误：模具加蜡过多，需要刮掉包埋盒边缘的以及底部的石蜡,再进行切片。蜡过多的蜡块可能在切片机上不稳定，由此导致切片过程中对组织的破坏。

包埋过程中包埋模具加蜡过多的蜡块