离心技术对于外泌体研究有多重要？看完这个你就会知道！

文章源自赛默飞

外泌体研究是一项非常实用的课题，而在这个领域里，离心技术则发挥着不可忽视的重要作用。

要说外泌体研究和离心机的关系，大概就是牛郎和织女、至尊宝和紫霞仙子、hip-hop 和“药药切克闹”的 freestyle~

那么，离心技术在外泌体研究中到底是如何运用的，以及理想的离心机配置又是怎样的呢？

外泌体是由细胞（正常细胞和异常细胞）分泌的，大多数外泌体直径分布在 30~100nm 之间。外泌体中携带有母细胞的多种蛋白质、脂类、dna 和 rna 等重要信息。目前的主流观点认为，外泌体的产生过程为：细胞膜内陷，形成内体（endosome），再形成多泡体（multivesicular bodies,mvb），最后分泌到胞外成为外泌体。 

在细胞培养中，以及各种体液中，如血液、唾液、尿液、脑脊液和乳液中，均可找到外泌体的踪迹。其分泌和重摄入的确切的分子机理，以及其内包容物的组成、及其所具备的功能，正在逐渐揭开其神秘的面纱。

原来人们认为外泌体仅仅起着细胞 “垃圾袋”的功能，用以将细胞内不需要的大分子去除掉。现在的研究逐渐认识到外泌体是细胞特异分泌的载体，可用于细胞间的通讯。现在对外泌体研究的兴趣呈现指数成长, 包括对其功能的基础性研究，也包含应用性研究，即如何通过研究其功能，将其应用于非侵入性的体外诊断，甚至直接用于疾病如癌症等的治疗。 

研究外泌体，首先需要分离提纯到足够数量及纯度的外泌体。综合国内外的研究进展，离心技术在外泌体的分离提纯中发挥着重要的作用，小编下面就来总结介绍它的离心步骤：

配备 0.25m 蔗糖溶液，调 ph 至 7.5；取上述配好的蔗糖溶液，分别加入碘克沙醇，使其百分比分别达到 40%、20%、10%、5%，即配好相应的密度梯度，其密度分别是 1.160、1.147、1.133 和 1.120g/ml；将前述配好的梯度液按密度从大到小的顺序，依次从下到上分层铺到离心管内。

针对培养细胞的外泌体分离，首先将细胞培养至对数期约 24 小时(细胞浓度约 1x106cells/ml)。用 st40r 离心机、tx-750 转头及适配器，用 50ml 尖底管离心，750xg，15 分钟，沉淀细胞；接着 2,000xg，15 分钟沉淀死细胞及细胞碎片。

接着，用 st40r 离心机，highconic 转头，10,000xg，4°c，离心 45 分钟去处细胞碎片。用 0.22μm 膜过滤，准备上超离离心。使用 wx100+ 离心机，f50l-8×39 转头，100,000xg 离心 90 分钟。沉淀下来的外泌体用 1ml 磷酸缓冲液清洗并重悬。重悬液铺于制备好的密度梯度液上。用 wx100+ 离心机和 surespin 转头，100,000xg，4°c，离心 18 小时，加、减速设置为最大。收集相关馏分，用 wx100+ 离心机和 f50l-24×1.5ml 转头, 100,000xg 离心 1 小时，用于沉淀收集外泌体。沉淀用 1.2ml pbs 重悬。上述沉降离心步骤重复数次，以去除过量的梯度液残留。沉淀最后用 100μl 1 x pbs 重新溶解，即可达到纯化的外泌体。

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