第17期分享讨论：小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物（文末有彩蛋）

第17期分享讨论：小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物（文末有彩蛋）

本周昊诺斯第17期组织研磨和样品处理分享、讨论，我们邀请到了实验动物监测所袁老师给大家分享，内容是——小鼠内脏组织样品研磨提取核酸、微生物。

那接下来，就让我们先睹为快，看看这个案例的情况。

实例1：加裂解液直接匀浆（使用trizol提取组织rna）

1、取适量组织装入离心管，组织尽量剪碎成小块；

2、在离心管中加入氧化锆珠数颗（一次性使用）；

3、先加入trizol（不建议加入太多 trizol，液体体积过大影响匀浆效果），盖好管盖，装入鼎昊源tl2020组织研磨仪适配器中，安装上机。

4、组织研磨仪研磨参数设置为一定转速，研磨时间为2~5min（不同组织研磨时间不同，脑1min，肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min，可能更长，中间应停顿1~2次防止温度过高，研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷）；

5、再加入适量trizol至总体积；

6、后面步骤按trizol说明进行。

实例2：先匀浆，再取一定量液体加裂解液进行核酸抽提，本protocol适用提取小鼠组织中的病毒的核酸

1、取适量组织装入离心管，组织尽量剪碎成小块，样品量较多时使用大离心管；

2、在离心管中加入氧化锆珠数颗，使用大离心管时，可以将氧化锆珠数量增加；

3、加入适量的灭菌pbs或生理盐水，总体积为离心管单管体积的1/3~1/2为好，盖好管盖，装入鼎昊源tl2020组织研磨仪适配器中，安装上机（研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱预冷）。

4、组织研磨仪研磨参数设置为一定转速，研磨时间为1~5min（不同组织研磨时间不同，脑1min，肝脏、脾脏和肾脏2min、肺脏比较难研磨需3~5min，可能更长，中间应停顿1~2次防止温度过高），若研磨不充分，可以继续研磨到充分为止；

5、一定温度、转速，离心数分钟；

6、取上清液按照试剂盒说明书进行后续提取步骤。

实验1中，我们之前试过一齐加1ml的trizol，可能是体积过大，反而匀浆效果不好，所以就改成先加一部分裂解先匀浆，然后再补齐1ml体积。

昊诺斯嘉宾：实验1中，我们之前试过一齐加1ml的trizol，可能是体积过大，反而匀浆效果不好，所以就改成先加一部分裂解先匀浆，然后再补齐1ml体积。

昊诺斯嘉宾：如果前面匀浆充分了，后面补齐裂解后不需要再研磨的，只需稍微混匀就可以。

用户：可以选择干磨吗？就组织直接扔进去弄成匀浆或者粉末，我再根据需要加trizol或者蛋白裂解液

昊诺斯嘉宾：跟大家分享下，我们最近用组织研磨仪用于抗原加佐剂的乳化，效果还不错。一机两用。

昊诺斯嘉宾：组织干磨效果不好，需要加入适量的液体，没有液体很多组织挂在壁上。

用户：提取下的核酸用途是什么？这个是我最关心的。

昊诺斯嘉宾：我们用于病原微生物检测。

用户：怎么个检测法您能给我简单介绍一下吗？

昊诺斯嘉宾：所以我们用的最多的是实验2，先匀浆，破碎组织，释放组织细胞中的病毒，。

昊诺斯嘉宾：主要采用pcr为基础的分子生物学检测。

用户：嗯，pcr，我知道了，谢谢。

昊诺斯嘉宾：不客气。一般的组织核酸抽提试剂盒中，都会有一部匀浆的步骤。

昊诺斯嘉宾：以前没有研磨仪的时候都是用研钵手工匀浆，一天几十上百个样品，累成狗。

用户：研磨如果用液氮处理，里面的液体不会冻住吗？

用户：我也有这个疑问，看来这个仪器是核酸分析必须的。

昊诺斯嘉宾：开始会冻住，等研磨到一定时间就自然解冻了，我们处理时只是让它预冷一下，最好不要冻住。所以一般是放在-80度冰箱稍预冷一下就可以了

用户：嗯！

用户：谢谢

昊诺斯嘉宾：是的，核酸检测必备。

用户：早些天我看一个打沙棘的视频，冻掉以后，直接就打下来了，所以冷冻还是有效果的，原理是一样的。

昊诺斯嘉宾：还要讲一下，选质量好的ep管，现在一些国产的ep管质量太差，盖不严，导致液体漏出。如果预冷的话，一些ep管就可能被打碎了，我们有过这样的例子。

用户：我们也因为质量不好的ep管影响过实验，所以试剂耗材也很重要。

昊诺斯嘉宾：同意。

用户：一定要选择质量有保证的产品。

昊诺斯嘉宾：是啊。关于振动频率说明一下，我们选的频率比较高，我看到有的资料上讲一般动物样品如大脑、心脏、肺、胃、肝脏等无骨骼组织的研磨推荐频率是1000-1100r/min研磨时间是1-2min，具体的频率可根据样品材料及数量的不同，做适当的调整。过大的频率或者时间都可能会导致部分dna的断裂，建议每次研磨时间在1mm左右，中间停顿一会，重复2-3次。

用户：谢谢袁老师。

最后，让我们共同期待第18期“组织研磨和样品处理分享、讨论”活动吧！下期，我们不见不散！

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