在研磨幼猪内脏组织实验中 你有遇到过这些问题吗？

在研磨幼猪内脏组织实验中 你有遇到过这些问题吗？

本期昊诺斯第14期组织研磨和样品处理分享、讨论，我们给大家分享的内容是——研磨幼猪内脏组织测药物代谢，邀请到了昊诺斯销售经理给大家做分享。

那接下来，就让我们先睹为快，看看这个案例的情况。

实验前样品准备

实验：研磨幼猪内脏组织测药物代谢

试验样品：幼猪心、肝、脾、肺、肾、脑6个部位的组织

实验目的：药物代谢测定分析

实验步骤：

1、取出置于冰箱内的幼猪心、肝、脾、肺、肾、脑组织样品略解冻，每个部位的样品各取2份为一组对照，切成小块后分别置于离心管内，编号并放进冰盒中；

2、每次研磨将以对照组为单位进行。以脾脏研磨为例：将2份脾脏组织样品分别转移至2个鼎昊源TL1000小型组织研磨仪配套的硬质塑料研磨管中，每管各加入不锈钢珠1颗，其中一管加入磷酸盐组织液，另一管加入醋酸铵组织液，盖好管盖，安装上机；

3、采用自动间歇研磨方法，组织研磨仪转速适当，设置循环，组织研磨仪研磨完成后用吸管转移回之前对应编号的离心管中；

4、由于各内脏组织样品的韧性不同，针对肝和脑组织的研磨，采用仅一次研磨的方法，使研磨时间被缩短，但组织研磨仪研磨效果仍然很好；针对心脏组织的研磨，采用了鼎昊源TL1000小型组织研磨仪配套的不锈钢研磨罐，使研磨更加匀细。

实验结果：

A.磷酸盐组织液

B.醋酸铵组织液

C.最终结果图

此外，我们的分享嘉宾还跟群内用户进行了激烈的分享、讨论，让我们一同来看看擦出了怎样的火花吧！

昊诺斯嘉宾：大家好，今天本次讨论的主讲在上海展会，所以由我来代述一下。这次的实验样品还是内脏组织，但实验目的是成分的测定。

昊诺斯嘉宾：我记得以前曾经在讨论会中有相似的案例，说明目前做这类研究的实验室还是挺多的。做这类实验的一个共同的特点就是样品都比较新鲜，这和做生物大分子的实验有所不同，样品基本保持了原有的性状，这样有利于代谢产物的收集和测定的准确。

昊诺斯嘉宾：如果看过实验报告的老师会发现，在这6种组织中心肺的研磨是稍微费力一些的，其他组织都是容易处理的，但是这类实验虽然破碎样品难度不大，但要求的单个样本量却比较大，这是为了提取到足够的产物，所以我们在这个实验中，用的都是5ml的研磨管，在处理量上完全满足实验要求。

昊诺斯嘉宾：正如报告中所述，这次实验用了2种缓冲液，磷酸盐的效果好于醋酸盐的，这可能是跟酸性强弱有关，但两种溶液测定成分都是没有问题的。

用户：只是负20℃够吗？发现肌肉类很少用液氮的。

昊诺斯嘉宾：刚才提到了，这次实验的样本基本是新鲜的，-20℃只是暂时保存，就和超市里生鲜区的肉差不多。

用户：也就是说不用冻硬？这倒是我第一次见。

昊诺斯嘉宾：我们和很多老师讨论过，动物类的样本，特别是新鲜的，冻液氮会适得其反。

用户：哦，我只做过植物的。

昊诺斯嘉宾：因为里面的水分太多了，液氮无法使其彻底脱水，反而会结很硬的冰。

用户：嗯，植物会薄很多，表面积比体积比大，去水快。

昊诺斯嘉宾：是，也分情况。前两天碰到一个做苹果的老师，他也是冻液氮，结果一小块苹果冻得跟钢珠似得，反而也不好研磨了，后来干脆直接磨，磨好了。

用户：应该切片，而不是块，或许好些。

昊诺斯嘉宾：对，但这个老师的样品是从-80℃冰箱里直接拿出来的，采集时切的小块，他也是怕温度变化影响结果，所以才又没切又加液氮。

用户：可能是怕氧化。

昊诺斯嘉宾：他做的是DNA，只要不太高的温度都没问题，而且这种从-80℃冰箱里拿出来的样本，目前最多采用的是加缓冲液研磨，特别是动物样品。

用户：加缓冲液是为了保护？

昊诺斯嘉宾：一来有助于保护样本，二来是帮助化冻，还有的好处就是有利于均匀。

用户：嗯，液体容易混合均匀。

用户：这两种缓冲液有何区别？

昊诺斯嘉宾：应该就是成分不同，作用一致。

昊诺斯嘉宾：这次的实验也是这个老师摸索条件的一个过程，总结起来，我认为本次实验最主要的就是使用的研磨管合适。

用户：加液体积比也是摸索吗？

昊诺斯嘉宾：这个是实验方法固定的，按比例来的，就是因为实验的样本体积是固定的，所以才知道用多大的管子，咱们之前说过，研磨的加样体积也是有要求的。

用户：嗯，太稠了转不起来。

昊诺斯嘉宾：太多了阻力又大，所以本次实验的体积刚好在可控范围之内，而且大管子的研磨力度大，像大多数样本本身就比较好磨，用大管子就可以缩短时间，效率更高。

最后，让我们共同期待第13期“组织研磨和样品处理分享、讨论”活动吧！下期，我们不见不散！

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