HALO-2.7 RP 氨基柱的技术特性

　　●对C8和C18键合相的替代和性能补充

　　●特别推荐用于酸性或碱性样品

　　●与高水相流动相兼容，更加易于保留和分离极性化合物

　　●增强键合相的稳定性包括耐用性、柱寿命及极低流失适用于LC/MS

　　●碱性去活使其分离碱性化合物时具有良好峰形

　　●其较低的反压使其在传统HPLC仪器上也可以表现出与UHPLC相近的性能

　　●使用了2 μm孔径的筛板，减少了由于筛板堵塞压力增加带来的不便，使HALO柱更便于使用

　　HALO RP-Amide柱对包含酸性和碱性化合物的样品具有更佳的选择性。而且当C18或C8无法实现充分分离时HALO AP-Amide是个不错的选择。HALO RP-Amide也特别适合于需要高比例水流动相的水溶性化合物的分离，因为极性的酰胺基团确保固定相完全是“可润湿的”，甚至可以在100%纯水流动相中使用。

　　HALO RP-Amide不等同于其他具有弱水解稳定性的嵌入式酰胺键合相。HALO RP-Amide键合相的制备过程中使用了专有的化学键合技术，使其达到了优异的稳定性和很长的柱寿命。另外，超低流失的特点使其特别适合用于LC / MS。

　　和HALO C18和C8键合相一样，超纯试剂、“B型”硅胶、密集键合技术以及完全的封端，使其成为了一种对极性化合物显示出极好峰形的碱性去活固定相。

　　分离机理

　　HALO RP-Amide柱上的分离受其表面的疏水烷基链的疏水作用和嵌入式酰胺基团组的氢键作用的影响。(参见图1 反相酰胺结构键合相结构示意图)。可以预计，带有氢键给体的分析物在HALO RP-Amide键合相上保留更长。通过图2这个例子可以看出，2-氯酚、3-乙基苯酚和丁基苯在HALO RP-Amide上比在HALO C18上具有更强的保留。通常和HALO C18相比，HALO RP-Amide对酸性物质保留更强一些，对碱性物质被保留略弱，对中性分析物将有几乎相同的保留。

　　HALO RP-Amide的这种“不同”选择性，使其成为非常有用的C18键合相替代相。在C18相上分离比较差的化合物，可以在HALO RP-Amide上的得很好的分离。图3是一个很好的例子， 2 -硝基苯胺，4-溴乙酰苯胺和2,2' -联苯酚在C18键合相上同时被洗脱，但在HALO RP-Amide上实现了基线分离。

一个稳定的酰胺基嵌入C18链的键合相用于HALO RP-Amide

图1  HALO RP-Amide键合相结构

图2  HALO RP-Amide为C18提供一个另一种选择性

　　色谱条件：

　　色谱柱：4.6×50 mm

　　流动相：50/50 ACN/20 mM phosphate buffer pH=7.0

　　流速：2.0 mL/min

　　压力：～175 bar

　　温度：26℃

　　样品：

　　1.苯甲醇

　　2. 2-氯苯酚

　　3. 3-乙基苯酚

　　4. 苯甲酸卞酯

　　5. 尼泊金丁酯

　　6. 4-氯-3-硝基苯甲醚

　　7. N，N’-二甲基苯胺

　　氢键给予体物质,像2-氯苯酚,3-乙基苯酚、尼泊金丁酯在HALO RP-Amide上比在HALO C18上具有更强的保留。碱性化合物，如N，N-二甲基苯胺在HALO C18上的保留明显弱于在HALO RP-Amide上的保留。这种选择性差异使得HALO RP-Amide 是有效的HALO C18 替代键合相。

图3：不同的选择性使得HALO RP-Amide产生更好的分离效果

　　色谱条件：

　　色谱柱：4.6×50 mm

　　流动相：35/65 ACN/20 mM phosphate buffer，pH=7.0

　　流速：3.0 mL/min

　　压力：310 bar

　　温度：26℃

　　样品：

　　1. 2-硝基苯胺

　　2. 对溴乙酰苯胺

　　3. 2,2’-联苯酚

　　4. 苯甲酸卞酯

　　在本例中3个化合物混合在C18上不分开。然而，在同样流动相的条件下，他们可以在HALO RP-Amide上基线分离。

烷基酰胺键的选择性结合快速高效的熔融核技术实现了在80 s内12种化合物的分离

图4  12种化合物的混合物在HALO RP-Amide柱上的快速分离

　　色谱条件：

　　色谱柱：4.6×50 mm

　　流动相：35/65 CACN/20 mM phosphate buffer,pH=7.0

　　流速：3.0 mL/min

　　压力：310 bar

　　温度：26℃

　　样品：

　　1. 尿嘧啶

　　2. 苯甲酰胺

　　3. 苯胺

　　4. 肉桂醇

　　5. 邻苯二甲酸二甲酯

　　6. 苯乙腈

　　7.硝基苯胺

　　8.对溴乙酰苯胺

　　9.苯甲酸卞酯

　　10.2,2’-联苯酚

　　11.4,4’-联苯

　　12. N，N’-二甲基苯胺

　　HALO色谱柱技术咨询：

　　通微苏州分公司-苏州环球色谱有限责任公司 李静博士

　　江苏省苏州高新区滨河路1326号125 邮编: 215011

　　电话：0512-68054587、68312081-8022

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　　附录：HALO色谱柱及熔融核(核-壳)技术简介

　　熔融核技术是由杰克柯克兰(J.J.Kirkland)所发明的。柯克兰教授被公认为是HPLC的创建者之一，并且他的研究和贡献是被色谱界人士广泛认同的。他发表了超过150份主要研究文献和6本书籍。柯克兰博士还拥有30项专利，并且在色谱领域已经获得了很多著名奖项。

　　HALO柱填料不是按照常规方式制作的。相反,HALO UHPLC所填充的填料是利用Fused-core(熔融核/核壳)技术制备出来的，可以实现超快速色谱分离，同时避免了UHPLC的一些不足之处。

HALO 熔融核颗粒

　　Fused-core 填料技术是由 Jack Kirkland 发明的，该类填料最初是为了使得UHPLC色谱柱比常规2μm填料UHPLC色谱柱更坚固可靠。正如它的名字一样，Fused-core 即是将多孔硅胶壳熔融到实心硅胶颗粒表面。

　　HALO色谱柱所产生的反压明显低于UHPLC色谱柱。这样的低反压可以使仪器承受压力降低，使操作起来更为方便。正是HALO柱适度的反压使得他们能用于常规的HPLC仪器却实现近似UHPLC的性能。此外，HALO色谱柱所用的筛板的孔径要远远大于UHPLC色谱柱(2 μm vs 0.5 μm)。这个更大的孔隙柱入口筛板减少了UHPLC柱入口筛板的堵塞问题。事实上,HALO柱的入口筛板不会比常规的填充5μm颗粒的柱子上的筛板小，不可思议吧。

　　“熔融核硅胶柱能减少扩散质路径，允许使用更短的柱子和较高的流速以达到明显的快速高分辨率分离。”

　　——Analytical chemistry，2007年8月