高效液相色谱仪测定茶叶中黄曲霉毒素B1

1.适用范围 本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验。 2.原理概要 样品用三氯甲烷提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。 3.主要试剂和仪器 3.1.主要试剂 三氯甲烷； 正己烷； 苯； 甲醇：紫外光谱级； 乙腈：紫外光谱级； 三氟乙酸； 乙腈-水溶液（1＋1）； 三氯甲烷-甲醇溶液（95＋5）； 苯-乙腈溶液（98＋2）； 黄曲霉毒素B1标准品：纯度≥99%； 黄曲霉毒素B1标准溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成浓度为10μg/mL标准贮备液。根据需要，再配成适当浓度的标准工作溶液。 3.2.仪器 高效液相色谱仪，配有荧光检测器； 天津恒奥硅胶小柱； 天津恒奥振荡器：HMS系列； 天津恒奥超声波：HU、HS系列； 天津恒奥氮吹仪； 天津恒奥滤膜：有机系用，0.45μm； 天津恒奥微孔滤膜过滤器 旋转蒸发器； 微量注射器； 离心管：5mL具塞磨口； 粉碎机。 4.试样的抽取与制备 4.1.抽样方法 从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取2.2规定的件数，逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上，用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约500g。将所取样品充分混匀，用四分法或分样器逐步缩分出500g，装入洁净密封的样品筒内，加封后，标明标记，及时送实验室。 4.2.试样制备 将所取回样品全部磨碎，通过20目筛，混匀，均分成两份试样，装入洁净容器内，密封，标明标记。 4.3.试样保存 将试样于室温下保存。 注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 5.过程简述 5.1.提取 称取试样5.0g（精确到0.1g）置于100mL具塞锥形烧瓶中，加入15mL三氯甲烷，于振荡器上提取30min，然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内，并用三氯甲烷洗涤滤渣，收集滤液至约20mL。 5.2.净化 用旋转蒸发器将上述滤液在50℃水浴中浓缩至约1mL，经0.45μm滤膜过滤后，注入硅胶小柱中。用2～4mL正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱，弃去流出液。然后用3～4mL三氯甲烷-甲醇溶液以每秒钟2滴的流速洗脱，收集洗脱液于离心管中。用氮气仪缓缓吹干，供衍生用。 5.3.衍生 5.3.1.试样 加200μL正己烷和50μL三氟乙酸于上述离心管中，盖紧磨口塞，超声振荡1min，静置10min，用氮吹仪缓缓至干。用乙腈-水溶液（1＋1）定容至1.0mL，超声1min，用0.5μm滤膜过滤，滤液供液相色谱用。 5.3.2.标准工作溶液 取1.0mL标准工作溶液，用氮吹仪缓缓吹干，按5.3.1步骤操作。 5.4.测定 5.4.1.色谱条件 色谱柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm（内径）； 流动相：甲醇-水溶液（42＋58）； 流速：0.8mL/min； 荧光检测器：激发波长375 nm，发射波长425 nm； 色谱柱温度：室温。 5.4.2.测定 根据样液中黄曲霉毒素B1的含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中黄曲霉毒素B1衍生物的响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液的衍生物溶液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，黄曲霉毒素B1衍生物保留时间约为8min。 5.4.3.空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行。 6.结果计算 用色谱数据处理机进行数据处理 7.低限和回收率测定 7.1.低限 本方法的测定低限为0.001mg/kg。 7.2.回收率 回收率的实验数据：黄曲霉毒素B1的添加浓度在0.001～0.5mg/kg范围内，回收率为89.1%～104.9%。 由上表可以看出：使用天津恒奥设备处理样品，可以得到预期的结果。