动物性食品中青霉素类、四环素类和氨基苷类多残留分析方法建立

        随着畜牧业的发展，抗生素在畜牧业生产中的运用不断增加，青霉素类，四环素类，氨基苷类等在畜牧业的运用广泛。抗生素不合理应用所产生的抗生素残留成为我国和世界各国所关注的对象。我国加入WTO以来，抗生素残留问题日益严重影响我国的进出口和国家的经济利益。为了适应残留监测的需要，建立灵敏度，准确度和精密度均符合残留检测要求的抗生素残留检测方法成为研究的重点。该文是在结合国内外文献和实验室多年残留分析经验的基础上，建立了能够分别检测青霉素类、四环素类、氨基苷类抗生素在动物性食品中多残留的高效液相色谱分析方法。三种方法采用不同的样品处理和检测方法，如固相萃取、柱前衍生离子对色谱、离子交换色谱柱后衍生荧光检测等。
        方法一，以固相萃取和柱前衍生等技术为基础，建立同时检测猪鸡可食性组织和牛奶中7种青霉素多残留的高效液相色谱分析法。肌肉组织中7种青霉素类抗生素直接采用磷酸缓冲液提取然后SPE净化，猪鸡肝脏、猪肾脏样品中7种青霉素类抗生素先用乙腈，并将乙腈层用45-50℃高纯氮气吹干，组织残渣再用磷酸缓冲液提取与乙腈吹干物混合供SPE净化，牛奶样品中7种青霉素类抗生素直接用溴化四丁基铵溶液提取旋转蒸干，再用磷酸缓冲液溶解供SPE净化。采用SPE固相萃取柱净化，乙腈洗脱，洗脱液45-50℃高纯氮气吹干，标准稀释液定容，1，2，4-三唑汞(Ⅱ)溶液衍生，反相高效液相色谱分离，紫外(325nm)检测。阿莫西林、青霉素G、氨苄青霉素、青霉素V标准溶液的最低定量限为10μg/kg，苯唑青霉素、乙氧萘青霉素、双氯青霉素的最低定量限为30μg/kg。牛奶样品经过浓缩，阿莫西林、青霉素G、氨苄青霉素、青霉素V的最低检测限和最低定量限为2μg/kg，苯唑青霉素、乙氧萘青霉素、双氯青霉素为15μg/kg。在组织样品中阿莫西林、青霉素G、氨苄青霉素、青霉素V的最低检测限和最低定量限为25μg/kg，苯唑青霉素、乙氧萘青霉素、双氯青霉素的最低检测限和最低定量限为75μg/kg。在2～300μg/kg添加浓度范围内，7种药物的回收率在64.4％～88.0％之间，变异系数CV≤19.4％。
        方法二，以液-液提取和固相萃取为基础，建立猪肌肉、猪肝脏、猪肾脏、鸡肌肉、鸡肝脏、鸡蛋、鱼肌肉和牛奶中盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素和强力霉素多残留高效液相色谱分析方法。样品中残留药物经Mcllvaine缓冲液提取、固相萃取净化，甲醇草酸溶液洗脱，洗脱液45-50℃高纯氮气吹干，流动相定容，反相高效液相色谱分离紫外(350nm)测定。四种药物标准溶液的最低定量限均为25μg/kg。在猪鸡鱼肌肉、猪鸡肝脏、猪肾脏、鸡蛋和牛奶样品中最低检测限和最低定量限为50μg/cg。在添加浓度为50、100、200μg/kg时，4种药物的回收率在70.4％～89.9％之间，变异系数CV≤16.0％。
        方法三,以固相萃取和柱后衍生等技术为基础，建立了庆大霉素、安普霉素、卡那霉素和新霉素在猪肉和牛奶中多残留高效液相色谱检测法。猪肉中残留的氨基苷类药物用水提取三氯乙酸沉淀蛋白，固相萃取净化；牛奶样品采用磷酸缓冲液提取，三氯乙酸沉淀蛋白，固相萃取净化，甲醇洗脱N2吹干。反相高效液相色谱法分离柱后衍生荧光检测。庆大霉素、安普霉素、卡那霉素标准溶液的最低定量限均为312μg/kg，新霉素标准溶液的最低定量限为625μg/kg。在猪肌肉和牛奶样品经过浓缩等处理，庆大霉素、安普霉素、卡那霉素标准溶液的最低定量限均为100μg/kg，新霉素标准溶液的最低定量限为200μg/kg。在100～800μg/kg添加浓度范围内，4种药物的回收率在71.1％～85.4％之间，变异系数CV≤18.9％。氨基苷类的最低检测限和最低定量限为100μg/kg。 三种方法的灵敏度，准确度和精密度均符合残留检测方法要求，也是我国首次建立这三类药物的多残留检测方法。三种方法的建立将为我国兽药管理部门、食品卫生检疫部门、进出口贸易等部门监控这三类药物多残留提供有力的技术力量，也为我国兽药多残留分析方法的建立奠定基础。

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