进出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验 液相色谱一柱后衍生荧光检测法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0122-2011代替 SN 0122-19921
1 范围
进出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验
方法  液相色谱一柱后衍生荧光检测法
SN/T 0122-2011
本标准规定了进出口肉及肉制品中甲萘威残留量的液相色谱一柱后衍生荧光检测法。
本标准适用于进出口牛肉、鸡肉、虾肉、鱼肉及火腿罐头中甲萘威残留量的测定。
2 规范性引用文件
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件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
    GB/T 6682  分析实验室用水规格和试验方法
3  制样
3.1  肉
    将所取全部样品，充分搅碎混匀，取有代表性的样品，总量不少于500 9，装入清洁容器内，密封并标
明标记。
3.2罐头
    将所取全部样品整罐倒出，充分搅碎混匀，取有代表性的样品，总量不少于500 9，装入清洁容器密
封并标明标记。
4 试样保存
    试样应于-18℃以下保存。在抽样和制样的操作中，应防止样品受到污染或发生含量的变化，以
保证实验样品能代表总体样本。
5  原理
    用丙酮一石油醚混合溶液提取样品中的甲萘威残留物，经凝胶层析柱净化后，浓缩，高效液相色谱分
离，经柱后衍生后，用荧光检测器检测，外标法定量。
6  试剂和材料
    本标准所用试剂和水在没有注明其他耍求时，均指分析纯试剂，有机试剂为色谱纯和GB/T 6682
中规定的三级水。
6.1  乙腈。
6.2  乙酸乙酯。
6.3  环己烷。
6.4  丙酮。
6.5  石油醚：沸程30℃～60℃。
6.6  无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。
6.7  氯化钠。
6.8  柱后衍生试剂。
6.8.1  氢氧化钠溶液（0.2%，质量浓度）。
6.8.2  邻苯二甲醛( O-Phthaladehyde，OPA)。
6.8.3  邻苯二甲醛稀释液：硼砂溶液（0. 4%，质量浓度）。
6.8.4  巯基乙醇(Thiofluor)。
6.8.5  邻苯二甲醛试液的配制：溶剂储罐中注入945 mL OPA稀释剂，用惰性气体（氮气）吹扫至少
10 min．100 mg OPA固体溶解于约10 mL的色谱纯甲醇中，将OPA溶液加入除氧的OPA稀释剂中，
溶解2 9巯基乙醇固体于5 mL OPA稀释剂中，加入到储罐中，盖上瓶盖，打开气流，再不断的吹扫几分
钟，关闭排气阀，轻轻地搅动溶剂以使其完全混合。
6.9  乙酸乙酯一环己烷混合溶液（I+I，体积比）。
6. 10 0.45_um尼龙滤膜。
6. 11  甲萘威：分子式C12 H1i N02，CAS编号63-25-2，纯度大于99. 5%。
6. 12  甲萘威标准储备液：准确称取适量的甲奈威标准品，以乙腈溶解，4℃冰箱保存，有敖期为
6个月。
6. 13  甲萘威标准工作液：取一定量的标准储备液，用乙腈稀释至适当浓度，4℃冰箱保存，有效期为
1周。
7  仪器和设备
7.1  液相色谱仪：配有荧光检测器和柱后衍生单元。
7.2全自动凝胶色谱仪（配有馏分收集浓缩器）。
7.3  旋转蒸发装置。
7.4氮吹仪。
7.5组织匀浆机。
7.6振荡器。
8  分析步骤
8.1  提取及净化
8.1.1  样品的提取
    称取试样20 9（精确到0. OI 9），于IOO mL具塞三角瓶中，加水6 mL（视样品水分含量加水使总水
量约20 9，肉通常在70%左右，加水6 mL），加40 mL丙酮，匀浆1 min，加氯化钠6 9，充分摇匀，再加
30 mL石油醚，振摇30 min。取35 mL有机层上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约
1 mL，加2 mL乙酸乙酯一环己烷(6.9)溶液再浓缩，如此重复3次。乙酸乙酯一环己烷(6.9)定容为
5 mL，0.45 Um滤膜过滤，待净化。
8.1.2  样品的凝胶色谱(GPC)净化
8.1.2.1  凝胶色谱净化条件
8.1.2.1.1  净化柱：400 mm×30 mm，Bio Beads S-X3，或相当者。
8.1.2.1.2  流动相：乙酸乙酯一环己烷(6.9)。
8.1.2.1.3  流速：5.O mL/min。
8.1.2.1.4  样品定量环：5 mL。
8.1.2.1.5  馏分收集段：10.0 min～15.0 min。
8.1.2.1.6  净化柱平衡时间：5 min
8.1.2.2  凝胶色谱浓缩条件
8.1.2.2.2浓缩终点判定：液位传感模式。
8.1.2.2.3溶剂替换：2 mL乙腈，重复两次。
8.1.2.2.4  定容体积：1 mL。
8.1.2.3  凝胶色谱净化步骤
    将5 mL待净化液按8.1.2.1和8.1.2.2规定的条件进行净化与浓缩，最后得到1 mL净化液待测定。
8.2  测定
8.2.1  液相色谱条件
8.2.1.1  色谱柱：Cis，250 mm×4.6 mm×5弘m，或相当者。
8.2.1.2柱温：42℃。
8.2.1.3荧光检测器：A。。330 nm，Atn1465 nm。
8.2.1.4流动相：乙腈十水（40+60，体积比】。
8.2.1.5流速：1.O mL/min。
8.2.1.6进样量：20 uL。
8.2.2柱后衍生
8.2.2.1  衍生试剂1：水解试剂，0. 4%的氢氧化钠溶液，流速0.4 mL/min。
8.2.2.2  衍生试剂2：OPA试剂，流速0.4 mL/min。
8.2.2.3反应器温度：水解温度为100℃，衍生温度为室温。
8.2.3  色谱测定
    根据样液中被测甲萘威的含量情况，选定浓度相近的标准工作液，其响应值应在方法检测的线性范
围内。在上述液相色谱条件下，甲萘威保留时间为II.1 min，色谱图参见图A.1。
8.2.4  空白试验
    除不加试样外，均按上述步骤进行。
8.2.5  结果计算
    按式(l)计算试样中甲萘威的含量：
    
9测定低限
9.1  测定低限
    本方法的测定低限：0. 005 mg/kg。

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