2010版药典附录Ⅸ Ⅴ：黄曲霉毒素测定法

2010 版药典附录Ⅸ Ⅴ：黄曲霉毒素测定法 本法系用高效液相色谱法（附录 VI D）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以 黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1 和黄曲霉毒素 G2 总量计），除另有规 定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40： 18：42）为流动相，流速每分钟 0.8 mL；采用柱后衍生法检测，衍生溶液为 0.05%的碘 溶液 (取碘 0.5 g，加入甲醇 100 mL 使溶解，用水稀释至 1000 mL 制成），衍生化泵流 速每分钟0.3 mL，衍生化温度70℃；以荧光检测器检测，激发波长λex=360 nm(或365 nm)， 发射波长 λem= 450 nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于 1.5。 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒 素 B2、黄曲霉毒素 G1 和黄曲霉毒素 G2 标 示 浓 度 分 别 为 1.0 μg /mL，0.3 μg /mL， 1.0 μg /mL，0.3 μg /mL) 0.5 mL， 置 1 0 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。 精密量取储备液 l mL，置 25 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 供试品溶液的制备 取供试品粉末约 15 g (过二号筛），精密称定，加入氯化钠 3g，置 于均质瓶中，精密加入 70%甲醇溶液 75 mL，高速搅拌 2 分钟（搅拌速度大于 11000 转 /分钟），离心 5 分钟（离心速度 2500 转/分钟），精密量取上清液 15 mL，置 50 mL 量 瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜 (0.45 μm)滤过，量取续滤液 20.0 mL，通过 免疫亲合柱（Afla Test @ P)，流速每分钟 3mL，用水 20 mL 洗脱，洗脱液弃去，使空气 进人柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置 2 mL 量瓶中，并用甲 醇稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液 5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，注入 液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精 密吸取上述供试品溶液 25 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试 品中相当于黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1 和黄曲霉毒素 G2 的量， 计算，即得。 【附注】（1）本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。 （2）残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有 10%次氯酸钠溶液）内，浸泡 24 小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。