改善液相色谱基线噪音的方法（下）

  前面三点讲的都是内在原因造成的基线噪音或者波动。如果你前面的原因都找过了，问题还没有解决，就得考虑一下是不是流动相里面有杂质了。

四、系统洁净程度

如何检查判断是否是流动相问题？

a. 每次更换一种流动相，看基线结果。

b. 重新配置所有流动相。这种方式比较快，但可能无法找到根本原因。

要特别注意在流动相的配置过程中，是否引入了污染，比如使用了不干净的玻璃器皿等。

c. 更换溶剂的品牌和批次也是方法之一。

色谱柱长期使用造成的污染有时候也会造成基线波动。

  有些时候样品里面可能有些保留非常强的组分，可能在色谱柱上很长时间才慢慢被冲出来，这时候已经不是一个峰了，而是基线的干扰或者波动了。

  避免这种问题的方法：在每次做样后，用甲醇或者乙腈长时间冲洗色谱柱。另外，专柱专用也是一个好的习惯。如果一根色谱柱上做很多不同的样品，也可能导致互相之间的污染和影响。

五、电路的噪音

对于UV检测器来说，就是采样频率不合适而产生的噪音。

  现在随着超高效液相的普及，检测器的采样频率也越来越高，有的可以达到80Hz以上。但是如果一味追求高采样频率，可能对灵敏度没有任何帮助，反倒产生比较大的噪音。

一般来说，我们需要保证一个色谱峰上面有15-20个点，来保证比较平滑的峰形和比较准确的定量结果。

如果我的一个峰的时间宽度是0.5min，就是是30s，那只要保证1Hz的采样频率就足够了。

如果在UPLC上面，一个峰的时间宽度是0.05min，也就是3s,就需要10Hz以上的采样频率。

那80Hz的采样频率什么时候用呢？你的一个峰只有0.5s的时候用。

理论上的计算是这样的：N=16（T/W）^2

N是柱效；T是保留时间；W是峰宽。

一般色谱如果柱效12000的塔板数，在5min的时候，出峰宽度大概计算出来是11s。

你可以根据计算结果来调整检测器合适的采样频率。

  上面从理论到实践，从各个方面分析了液相色谱基线噪音或者波动的来源，以及相应排除问题的方法，希望可以帮助到你。