食品中无机砷的测定

第一法  液相色谱一原子荧光光谱法( LC-AFS)法

24原理

    食品中无机砷经稀硝酸提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物在酸性环境下与KBH4反应，生成气态砷化合物，以原子荧光光谱仪进行测定。按保留时间定性，外标法定量。

25试剂和材料

    注：除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

25.1  试剂

25.1.1  磷酸二氢铵(NH4 H2P04)：分析纯。

25.1.2碉氢化钾(KBH4)：分析纯。

25.1.3  氢氧化钾(KOH3)。

25.1.4  硝酸(HNO3)。

25.1.5盐酸(HCI)。

25.1.6  氨水(NH3 · H2o)。

25.1.7  正己烷[CH3(CH2)4CH3]。

25.2试剂配制

25.2.1  盐酸溶液[20%（体积分数）]：量取200 mL盐酸，溶于水并稀释至1 000 mL。

25.2.2  硝酸溶液(0.15 mol/L)：量取10 mL硝酸，溶于水并稀释至1 000 mL。

25.2.3  氢氧化钾溶液(100 g/L)：称取10 g氢氧化钾，溶于水并稀释至100 mL。

25.2.4  氢氧化钾溶液(5 g/L)：称取5g氢氧化钾，溶于水并稀释至1 000 mL。

25.2.5  硼氢化钾溶液(30 g/L)：称取30g硼氢化钾，用5 g/L氢氧化钾溶液溶解并定容至1 000 mL。现用现配。

25.2.6磷酸二氢铵溶液(20 mmol/L)：称取2.3 g磷酸二氢铵，溶于1 000 mL水中，以氨水调节pH至8.0，经0.45μm水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30 min，备用。

25.2.7  磷酸二氢铵溶液(1 mmol/L)：量取20 mmol/L磷酸二氢铵溶液50 mL，水稀释至1 000 mL，以氨水调pH至9.0，经0.45μm水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30 min，备用。

25.2.8磷酸二氢铵溶液(15 mmol/L)：称取1.7 g磷酸二氢铵，溶于1 000 mL水中，以氨水调节pH至6.0，经0.45 μm水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气30 min，备用。

25.3标准品

25.3.1  三氧化二砷(As203)标准品：纯度≥99.50/。

25.3.2  砷酸二氢钾(KH2As04)标准品：纯度≥99.5%。

25.4标准溶液配制

25.4.1  亚砷酸盐[As(m)]标准储备液（100 mg/L，按As计）：准确称取三氧化二砷0.013 2 g，加100 g/l。氢氧化钾溶液1 mL和少量水溶解，转入I00 mL容量瓶中，加入适量盐酸调整其酸度近中性，加水稀释至刻度。4℃保存，保存期一年。或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液物质。

25.4.2  砷酸盐[As(V)]标准储备液（100 mg/L，按As计）：准确称取砷酸二氢钾0.024 0 g，水溶解，转入100mL容量瓶中并用水稀释至刻度。4℃保存，保存期一年。或购买经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液物质。

25.4.3  As(Ⅲ)、As(V)混合标准使用液（1.00 mg/L，按As计）：分别准确吸取1.0 mL As(Ⅲ)标准储备液(100 mg/L)、1.0 mL As( V)标准储备液(100 mg/L)于100 mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度。现用现配。

26  仪器和设备

    注：所用玻璃器皿均需以硝酸溶液(1+4)浸泡24 h，用水反复冲洗，最后用去离子水冲洗干净。

26.1  液相色谱原子荧光光谱联用仪(LC-AFS)：由液相色谱仪（包括液相色谱泵和手动进样阀）与原子荧光光谱仪组成。

26.2组织匀浆器。

26.3高速粉碎机。

26.4泠冻干燥机。

26.5  离心机：转速≥8 000 r/min。

26.6  pH计：精度为0.01。

26.7  天平：感量为0.1 mg和1 mg。

26.8恒温干燥箱(50℃～300℃)。

26.9  C18净化小柱或等效柱。

27  分析步骤

27.1  试样预处理

27.2试样提取

27.2.1  稻米样品

称取约1.0g稻米试样（准确至0.001g）于50 mL塑料离心管中，加入20 mL 0.15 mol/L硝酸溶液，放置过夜。于90℃恒温箱中热浸提2.5 h，每0.5 h振摇1 min。提取完毕，取出冷却至室温，8 000 r/min离心15 min，取上层清液，经0.45μm有机滤膜过滤后进样测定。按同一操作方法作空白试验。

27.2.2  水产动物样品

    称取约1.0g水产动物湿样（准确至0.001g），置于50 mL塑料离心管中，加入20 mL 0.15 mol/L硝酸溶液，放置过夜。于90℃恒温箱中热浸提2.5 h，每0.5 h振摇1 min。提取完毕，取m冷却至室温，8 000 r/min离心15 min。取5 mL上清液置于离心管中，加入5 mL正己烷，振摇1 min后，8 000 r/min离心15 min，弃去上层正己烷。按此过程重复一次。吸取下层清液，经0.45 μm有机滤膜过滤及C18小柱净化后进样。按同一操作方法作空白试验。

27.2.3  婴幼儿辅助食品样品

 称取婴幼儿辅助食品约1.0g准确至0.001 g）于15 mL塑料离心管中，加入10 mL 0.15 mol/L稍酸溶液，放置过夜。于90℃恒温箱中热浸提2.5 h，每0.5 h振摇1 min，提取完毕，取m冷却至室温。8 000 r/min离心15 min。取5 mL上清液置于离心管中，加入5 mL正己烷，振摇1 min，8 000 r/min离心15 min，弃去上层正己烷。按此过程重复一次。吸取下层清液，经0.45 μm有机滤膜过滤及C18小柱净化后进行分析。按同一操作方法作空白试验。

27.3  仪器参考条件

27.3.1  液相色谱参考条件

    色谱柱：阴离子交换色谱柱（柱长250 mm，内径4 mm），或等效柱。阴离子交换色谱保护柱（柱长10mm，内径4 mm），或等效柱。

    流动相组成：

    a)  等度洗脱流动相：15 mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH 6.0)，流动相洗脱方式：

    等度洗脱。流动相流速：1.0 mL/min;进样体积：100μL。等度洗脱适用于稻米及稻米加T 食品。

    b)  梯度洗脱：流动相A：1 mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH 9.0)；流动相B：20 mmol/L磷酸二氢铵

    溶液(pH 8.0)。（梯度洗脱程序见附录A中的表A.4。）流动相流速：1.0 mL/min；进样体积：100 μL。梯度洗脱适用于水产动物样品、含水产动物组成的样品、含藻类等诲产植物的样品以及婴。

27.3.2  原子荧光检测参考条件

    负高压：320 V；砷灯总电流：90 mA；主电流／辅助电流：55/35；原子化方式：火焰原子化；原子化器温度：中温。载液：20%盐酸溶液，流速4 mL/min;还原剂：30 g/L硼氢化钾溶液，流速4 mL/min;载气流速：400 mL/min；辅助气流速：400 mL/min。

27.4标准曲线制作

取7支10mL容量瓶，分别准确加入1.00mg/L混合标准使用液0.00 mL、0.050 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL、0.50 mL和1.0 mL，加水稀释至刻度，此标准系列溶液的浓度分别为0.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、30ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL。

    吸取标准系列溶液100μL注入液相色谱原子荧光光谱联用仪进行分析，得到色谱图，以保留时间定性。以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液色谱图见附录B中的图B.l、图B.2。

27.5试样溶液的测定

    吸取试样溶液100 μL注入液相色谱原子荧光光谱联用仪中，得到色谱图，以保留时间定性。根据标准曲线得到试样溶液中As(Ⅲ)与As( V)含量，As(Ⅲ)与As(V)含量的加和为总无机砷含量，平行测定次数不少于两次。

28  分析结果的表述

式中：

X——样品中无机砷的含量（以As计），单位为毫克每千克(mg/kg)；

c。——空白溶液中无机砷化合物浓度，单位为纳克每毫升( ng/mL)；

c——测定溶液中无机砷化合物浓度，单位为纳克每毫升( ng/mL)；

V——试样消化液体积，单位为毫升(mL)；

Ⅲ——试样质量，单位为克(g)；

1 000——换算系数。

总无机砷含量等于As(Ⅲ)含量与As(V)含量的加和。

计算结果保留两位有效数字。

29精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

30  其他

    本方法检m限：取样量为1 9，定容体积为20 mL时，检出限为：稻米0.02 mg/kg、水产动物0.03 mg/kg、婴幼儿辅助食品0.02 mg/kg;定量限为：稻米0.05 mg/kg、水产动物0.08 mg/kg、婴幼儿辅助食品0.05 mg/kg。

天津兰博专注液相十五年

Series 4010液相系统

美国兰博原装进口

Series 4010液相系统采用经典的积木式结构设计，使用者可依据自己的使用需求，在Series 4000液相系统的基础上任意添加检测器。

　　系统组成：

　　型款泵4000型  2台

　　紫外检测器 1台

　　手动或自动进样系统一套

　　分析色谱柱 1支

　　工作站一套