从分析型HPLC数据校正生成ACCQ Prep制备色谱聚焦梯度

C18色谱柱运行与C8色谱柱校准

通用测试混合物(PN 60-5234-835)在RediSep® C8制备色谱柱(20x150mm,5µ,200Å,PN 69-2203-858)上运行，使用甲醇/水溶剂系统，得到第一个保留时间在6min的洗脱峰，如在Teledyne ISCO 网站Technical Note 52 (TN52)所述的《校准分析型HPLC系统》。

相匹配的C8 UHPLC色谱柱(2x50 mm, PN 69-2203- 853)在水/甲醇体系中运行(5min 5 - 100% B，在100%甲醇下等度保持2.5min)，峰洗脱时间为3.757min，对应于ACCQPrep上的峰洗脱时间为6min。

制备色谱运行

C8分析柱更换为RediSep Prep UHPLC C18分析柱(2x50 mm, PN 69-2203-854)，测试混合物在水/甲醇梯度中运行，梯度与C8柱相同。正如预期的那样，由于C18色谱柱填料100Å孔径使得保留增加，化合物在梯度中较晚被洗脱。

使用C18分析运行的数据计算图2中的制备型梯度，同时使用图1中的C8色谱柱的校准。制备纯化是采用RediSep Prep C18柱(20x150 mm, 5µ，100Å， PN 69-2203-810)。两种情况下，化合物洗脱时间都接近预期的6分钟洗脱时间。

同时在C8制备型高效液相色谱柱上运行测试混合物，并进行C8校准；利用图1中的分析数据计算第2洗脱峰在4.451min时的梯度。

色谱图看起来与C18柱几乎相同，唯一的区别是由于两色谱柱之间的保留差异聚焦梯度开始和结束的溶剂组成不同。

硅胶色谱柱运行与C18校准

4.6 × 150 mmRediSep Prep C18柱在AgilentHPLC分析系统上进行校正，如TN52中所述，梯度6min内从5到100%甲醇，然后以1.0mL/min的流速100%甲醇保持6min。溶剂改为正己烷/乙酸乙酯，色谱柱改为4.6 × 150 mm RediSep Prep硅胶柱。同样的梯度法用于新溶剂体系和色谱柱，梯度6min内5至100%乙酸乙酯，将methyl paraben样品注入，在20x150mm的RediSep Prep硅胶柱上，在正己烷/乙酸乙酯中进行聚焦梯度的保留时间如图4所示，样品在计算梯度的中间附近被洗脱。