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冻存细胞的复苏方法及注意事项
非玻璃化冻存复苏方法
主要材料:
(1)仪器设备:电热恒温水槽、高速离心机。
(2)培养用液:完全培养液。
复苏过程:
(1)调配37℃~ 40℃的温水，或将电热恒温水槽的温度调节至37℃~ 40℃。
(2)从液氮中取出冻存管，立即投入37℃~40℃温水中迅速晃动，直至冻存液完全溶解。
(3)将细胞冻存悬液转移到离心管内，加入约5ml培养液，轻轻吹打混匀。
(4)将细胞悬液经800~1000r/min离心5min，弃上清夜。
(5)向细胞沉淀内加入完全培养液，轻轻吹打混匀，将细胞悬液转移到培养瓶内，补足培养液进行培养。
结果:
复苏后的细胞应该保持其冻存时的活力，活细胞数达90%以上。
注意事项:
细胞冻存悬液一旦融解后，要尽快离心除去冷冻保护液，防止冷冻保护剂对细胞产生毒性。实验人员在复苏细胞过程中，同样应具有自我保护意识，避免被液氮冻伤。
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