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用恒温培养箱做花生四烯酸的检测
花生四烯酸是一种ω-6多不饱和脂肪酸，为花生油中饱和的花生酸的相对物。用恒温培养箱对它进行检测也是科学研究的重要环节。下面就简单介绍一下花生四烯酸的检测步骤：
需要提供的试剂和器材：
1、37℃恒温培养箱
2、 酶标仪
3、 移液器及一次性吸头
4、 蒸馏水
5、 一次性试管
6、 吸水纸
实验步骤：
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL，空白对照孔不加。
4、在37℃水浴锅中温育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。
7、温育：在37℃水浴锅中温育30min。
8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次。
9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。
10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。
12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
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