结核病是严重威胁人类健康的重要传染性疾病之一。如何准确快速诊断和鉴别诊断结核病及其耐药性,对指导临床开展早期精准有效治疗至关重要。本篇将主要介绍核酸质谱技术在鉴定结核病及其耐药性方面的内容……
结核病是严重威胁人类健康的重要传染性疾病之一。来自世界卫生组织的数据显示:2021年全球有1060万例新发结核病患者,死亡近160万例,新增45万例耐多药/利福平耐药结核病患者;我国新发78万例结核病患者,新增耐多药/利福平耐药结核病患者约3.3万例,是全球结核病及耐药结核病高负担国家之一;肺外结核占所有结核病的15%~40%,因其容易导致器官或组织功能性损伤和器质性障碍而成为近年来结核病领域关注的重点(数据摘自《中国防痨杂志》)。
因此,准确快速诊断和鉴别诊断结核病及其耐药性,对指导临床开展早期精准有效治疗至关重要。
常见的结核病及其耐药性的诊断方法
目前对诊断结核病及其耐药性的方法有:实时荧光定量PCR技术、恒温扩增技术、基因芯片/线性探针技术、基因测序技术和核酸质谱技术等。
核酸质谱技术鉴定结核分枝杆菌的优势
目前,核酸质谱技术可鉴定结核分枝杆菌复合群8个亚种和40个非分枝杆菌菌种及其亚种,合计48个分枝杆菌菌种和亚种,几乎覆盖了临床上分枝杆菌病的所有常见致病菌。而对于分枝杆菌的保守基因片段,核酸质谱技术可以针对基因的多态性进行设计和鉴定。其优势如下:
敏感度高:目前核酸扩增技术的结核分枝杆菌检测均基于IS6110、IS1081等位点进行扩增,选择其中的1个或2个,而核酸质谱技术可在此基础上增加其他位点的多肽性检测;
特异性高:核酸质谱可以用多基因结果验证,保证结核分枝杆菌检测的特异度;
耐药性检测方面应用范围广:几乎覆盖了目前常用的抗结核和抗分枝杆菌病的药物,检测针对性强、准确性高;
检测速度快:近百例样本同时进行检测分析,检测周期短于一代和二代测序,对少量样本也能进行多基因多位点检测。无需培养,实现单个核苷酸碱基的直接鉴定。
核酸质谱技术鉴定结核分枝杆菌抗结核药物
目前核酸质谱技术可检测结核分枝杆菌4种一线抗结核药物(异烟肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇)和常用的二线抗结核药物(氟喹诺酮类、链霉素等)的耐药基因型。药物的检测结果与表型药物敏感性(简称“药敏”)试验结果具有很好的一致性;并可根据耐药相关的基因多态性进行设计,从而获得相关的耐药基因突变结果。可用于检测常用一线、二线抗结核药物的耐药基因位点。如利福平和异烟肼等。
* 利福平:利福平的耐药决定区集中了95%以上的临床耐药菌株。核酸质谱技术能够检测出此决定区的所有突变位点,以及区外的常见位点,从而较全面地预测利福平耐药性。同时,核酸质谱法检测的结果还会提示是低水平耐药还是高水平耐药,从而避免出现使用药敏方法检测时的遗漏。
综上所述:对于结核病的诊断,我国主要通过患者的临床表现、影像学检查结果及免疫学检测结果进行综合分析,但缺点是检测时间长及准确率有待提高。近年来,分子诊断技术包括核酸质谱技术的迅速崛起和发展,为结核病的快速诊断提供了新的方法。
东西分析经过数年的开发,基于飞行时间质谱技术平台开发出快速鉴定结核分枝杆菌及其抗结核药物的应用方案。基于用户的具体需求,通过核酸质谱这个快速及强有力的辅助诊断工具,东西分析可对结核分枝杆菌进行精确到种乃至亚种水平的鉴定,从而为临床提供早期精准诊断和治疗参考建议。对于阳性的检测结果,还可进一步进行耐药性检测。即根据检测结果,临床医生不仅能够进行高效精准的结核病诊断,还能够及时调整治疗药物,从而优化治疗方案。
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