缓激肽是一种含有9种氨基酸的生理和药理活性肽,由蛋白质的激肽基团衍生而来。激肽是可以促使血管舒张、血管通透性增强、一氧化氮释放和花生四烯酸流动的效应因子。它是血压、肾功能和心脏功能的重要调节因子,还参与炎症反应。缓激肽可引起血管扩张,从而导致血压降低。因此,对这种激素肽的变化进行高灵敏度、高选择性和高准确度地定量,并将其作为疾病进展或药物治疗的评估指标,将会极为有利。尽管以往都是通过配体结合试验(LBAs)对生物制剂进行定量分析,但在过去几年中利用LC-MS/MS分析大分子已成为一种趋势。这在某种程度上是因为LBAs产生显著的交叉反应问题并且缺乏标准化。LC-MS/MS具有多种优势,例如开发时间更短、准确度和精度更高、可重复进样,并且容易区分相似度很高的类似物、代谢物或内源性干扰物。常见的肽通常难以通过LC-MS/MS进行分析,这是因为其不易离子化以及不易产生理想的碎片离子而导致MS灵敏度较低,从而使得LC和样品制备方法开发非常困难。由于缓激肽在血浆中的浓度低至pg/mL水平且代谢速度快,在采血和样品制备过程中还可通过蛋白水解人为生成,因此对其进行准确定量相当困难。 本研究开发了一种用于提取人血浆中缓激肽的混合模式SPE提取方法。通过一种快速、简单、分析级的LC方法将缓激肽与相似度很高的内源性干扰物分离开来。 本方法还证实了采用合适的蛋白酶抑制剂样品收集方式对于准确测定缓激肽内源性浓度的重要性。此外,如果需要执行进一步验证,本方法在通过LC-MS/MS对PK和临床研究的患者样品进行高灵敏度的缓激肽定量方面也表现出巨大的潜力。 下载应用纪要请点击:http://www.instrument.com.cn/netshow/sh100287/s274071.htm
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2014.02.13
质谱技术的进步,使得分析方法的检测限不断降低,推动了许多有关环境和食品中痕量污染物的研究。通常情况下,亚ppb级的污染物水平分析,首选串联四极杆质谱,但这只使用与目标物的分析方法。使用Waters Xevo G2-S QTof可轻松实现对ppb级已知和未知化合物的筛查。然而,如果我们增大样品进样体积,还可进一步提高灵敏度。结合Xevo G2-S QTof的高精确质量数准确度(查实验,对许多环境分析具有较高的实用性。而仅依靠MS/MS,是无法得到未知物或大量污染物的分析结果的。使用沃特世基于UNIFI的农残筛查平台,在较大进样体积下进行检测时,可有效分析水样中痕量污染物。在ACQUITY UPLC I-Class系统上安装100μL扩充定量环,可增大样品体积。本研究中使用了两种不同水样,即瓶装饮用水和本地自来水。下载详细纪要请点击:http://www.instrument.com.cn/netshow/sh100287/s273918.htm
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2014.02.11
2014年2月26日(周三) 常规药物制剂分析中的UPLC柱故障排查与应用维护在分析测试行业,无论是科研专家还是技术人员,都已认可:UPLC能够最大化生产效率同时降低能耗,液相方法从HPLC升级到UPLC是必然趋势,同时也正在进行过程中。但是,人们难免有所担心,UPLC能否被顺利实施,特别关乎色谱柱的使用寿命。本次网络课程中,我们将为大家介绍UPLC柱应用于常规药物制剂分析工作的故障排查与应用维护,内容包括:沃特世USP方法转换项目(制剂药物)UPLC成功应用策略:预防性措施,故障排查,污染根源案例分析:关于样品制备(布地奈德鼻吸雾剂),关于样品基质(多奈哌齐片)注册链接:http://www.waters.com/waters/eventInstance.htm?locale=zh_CN&eiid=134779976 2014年2月27日(周四) 最新糖类分析解决方案——Xbridge Amide色谱柱的使用与方法开发糖类是自然界最广泛存在的一类有机物,在生理过程中具有重要意义。在实际检测中我们也会遇到很多问题:丙氨基键合硅胶柱寿命低,还原性糖定量不准确,还原糖的旋光异构造成了色谱峰分岔。讲座中我们将对以上这些问题进行讲解:碳水化合物分析难点解析Xbridge Amide色谱柱应用亮点和优势应用实例:牛奶,水果,面包,酒,薯片,动物饲料,止咳糖浆方法开发策略经验总结注册链接:http://www.waters.com/waters/eventInstance.htm?locale=zh_CN&eiid=134780137 2014年2月28日(周五) 多肽生物药生物分析解决方案生物药品,如艾塞那肽、亮丙瑞林等肽类,由于其药效好,毒副作用小和合成过程环保等特点,越来越受到化学家们的关注。然而,肽类物质由于带多电荷、非特异性吸附强、残留大等等方面的影响,给分析检测增加了很多困难。沃特世科技有限公司凭借完整多肽生物分析解决方案助您轻松领跑于生物药生物分析领域。本次网络课堂重点介绍: 如何应对多肽回收率底、灵敏度差等问题; 如何选择专属离子对提高信噪比等。注册链接:http://www.waters.com/waters/eventInstance.htm?eiid=134779990&locale=zh_CN
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2014.01.28
Nicholas A. Cellar1,James E. Denison1,C. Thomas Siepelt1,Marian Twohig2,和Jennifer A. Burgess21雅培营养(美国俄亥俄州哥伦布市)2沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市)应用优势■ 使用UPLC/MS/MS系统通过一种方法定量七种水溶性维生素■ 精度显著提高,所有维生素的RSD值均小于3%沃特世解决方案ACQUITY UPLC系统XevoTQ-S质谱仪ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱MassLynx软件关键词水溶性维生素、婴儿配方奶粉、Xevo TQ-S简介对于使用婴儿配方奶粉和成人营养品的消费者来说,含人体健康必需维生素的强化配方被谱遍认为是满足营养需求的必要条件。研究者们通过大量的研究从健康益处和安全角度确保能够提供相应含量的这些维生素。为确保产品在保质期内可以提供相应含量的维生素,制造商必须考虑到维生素会随时间发生分解,从而增加强化维生素的初始剂量进行弥补。由于这些维生素存在最高和最低含量限制,因此必须在富余与降解之间达到精确的平衡。精密和准确的维生素浓度测定就变得至关重要。在不同实验室中完成分析目标给本就相当复杂的维生素分析带来更大的挑战,研究者们几乎难以应对。要使实验室之间以及实验室内部的分析结果满足分析要求,具有良好的重现性,就必须减少实验中的变异因素。LC/MS/MS技术日益广泛地应用于食品中强化维生素的定量分析。在选择性和灵敏度方面的优势,以及通过单次进样分析其中多种分析物的能力,使这一技术成为此类应用的最优之选。LC/MS/MS的最新发展进一步降低了可达到的检测限。但在本文中,LC/MS/MS的最新进展特别用于获取更低的RSD,比之前采用此类多分析物方法所达到的RSD还要低得多。这种高度重现性能够在保证所有产品消费者健康与安全的同时解决标示量纠纷,最大程度减少过剩量,并维持利润。下载完整应用纪要请点击:http://www.instrument.com.cn/netshow/sh100287/s273321.htm
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2014.01.22
Lisa J Calton,Scott D Gillingwater, Gareth W Hammond, Donald P Cooper沃特世公司临床业务部(英国曼彻斯特阿特拉斯商业园)简介临床研究表明:维生素D缺乏症在世界许多地区的成人和儿童中非常普遍。除了众所周知的影响(例如与钙吸收障碍相关的佝偻病、骨质疏松症和骨软化症)外,现在越来越多的证据表明维生素D缺乏症还会增加罹患某些癌症的风险,并对许多其它疾病有一定的影响1,2。维生素D具有两种存在形式,一种是皮肤暴露于日光下所产生的维生素D3(D3) ,另一种则是存在于多种补品中的植物衍生物—维生素D2(D2)。维生素D在肝脏中代谢形成25-羟基维生素D [25OHD],后者在肾脏中进一步代谢形成活性代谢物1,25-二羟基维生素D。25OHD的水平被认为是评价体内维生素D水平的最佳临床指标3。维生素D水平的评估对于维生素D缺乏症的诊断和补充治疗的监测非常重要。最近,相对于竞争性结合检测、免疫检测和HPLC法等其它方法,利用LC/MS/MS方法定量分析25OHD2和25OHD3在提高检测质量和降低成本方面,更加受到人们的青睐。免疫检测的主要问题是无法区分25OHD2和25OHD3,还需依靠抗体与25OHD2的交叉反应才能测定25OHD的总浓度 。如果该交叉反应低于100%,那 么D2治疗可能无法得到准确监测4。 图1. 沃特世ACQUITY UPLC/TQD的系统配置实验将Waters ACQUITY 串联四极杆检测器(TQD)与ACQUITY UPLC联用以进行各项分析。完整的系统配置如图1所示。仪器通过MassLynx 4.1软件在电喷雾正离子模式下运行,并采用QuanLynx应用软件自动进行数据处理。对锥孔电压进行优化,使得进入离子源的母离子的丰度最大化,并通过第一级四极杆选择相应的母离子进入碰撞池。利用氩气和碰撞能量促使碰撞诱导解离,生成特征性产物离子。利用此方法建立特异的多重反应监测(MRM) ,实验如表1所示。LC条件LC系统: Waters ACQUITY UPLC系统色谱柱: ACQUITY UPLC BEH C8,2.1x50mm, 1.7μm柱温: 45 ℃流速: 400μL/min流动相A:2 mM醋酸铵+0.1%甲酸的水溶液流动相B:2 mM醋酸铵+0.1%甲酸的甲醇溶液梯度:流动相B在73%保持2 min,在1.5 min内从73%增加至98% MS条件MS系统:Waters ACQUITY TQD电离模式:ESI+ 毛细管电压:2.5 kV锥孔电压:24 V脱溶剂气温度:400℃脱溶剂气流量:900 L/h源温度:120℃碰撞气流速:7.10 x 10-3mbar 校准品和QC标准品按照各个生产厂家的说明制备单一浓度的校准品和双浓度水平的QC标准品(Chromsystem,德国慕尼黑)。通过混合人血清并加入已知浓度的25OHD2和25OHD3,制备低浓度QC标准品溶液。低、中和高浓度QC样品中25OHD2的最终浓度分别为19、27和84 ng/mL,25OHD3的最终浓度则分别为13、29和89 ng/mL。使用哺乳动物血清制备校准品用以线性评估,其中25OHD2和25OHD3的浓度范围为1-100ng/mL。在264 nm下检测储备液,然后将其调整至最终浓度。 样品制备吸取血清(150μL)至2 mL微量离心管(Anachem)中,加入10μL内标(250ng/mL六氘代25OHD3,合成AS,以80%甲醇/20% IPA为溶剂) ,涡旋混合(10s)。加入0.2 M ZnSO4溶液(150μL)并涡旋混合(10 s)以增强反应 。加入甲醇 (300μL)并混合(10s),以沉淀血清中存在的蛋白质。加入己烷(750μL),用以提取25OHD。混合30s,然后将样品在13000rpm下离心5 min。移 取己烷层并将其置于沃特世最大回收样品瓶中,在50摄氏度的氮气下蒸发至干。将样品复溶于75μL70%甲醇水溶液中,借助ACQUITY样品管理器的预加载功能将20μL样品注入UPLC/MS/MS系统中,进样间隔时间为6 min。离子抑制将人血清样品混合低浓度的25OHD2和25OHD3并使用柱后添加对其进行分析,以100 ng/mL浓度和10 μL/min流速通过ACQUITY TQD集成式样品流路。 结果线性使用QuanLynx定量软件和ApexTrack积分算法进行数据处理 。以2.5-100 ng/mL的浓度范围内向血清中加入已知浓度的25OHD2和25OHD3,对分析方法的线性进行考察。25OHD3的确定系数(R2)>0.999(图2),计算所得的校准品浓度均在指定值的±4%范围之内。25OHD2的确定系数(R2)>0.997(图3) ,计算所得的校准品浓度均在指定值的±10%范围之内。图2 .血清中25OHD3的校准曲线。图3 .血清中25(OH)D2的校准曲线。 准确度通过分析购自DEQAS(www.deqas.org)的外部质量控制样品考察分析方法的准确性。利用Chromsystem单点校准品绘制出一条过零点的校准曲线,用以计算DEQAS样 品浓度。采用Passing-Bablok线性回归(Microsoft Office Excel 2003,带Analyse-It插件1.73版)将Waters 25OHD3的结果与通过DEQAS LC/MS方法所得的结果平均值进行对比。所有结果均在预期值的±11.5%偏差范围之内(图4)。 图4 .将Waters 25OHD3结果与DEQAS LC/MS方法所得的结果平均值进行对比的Passing-Bablok线性回归分析。精度通过提取低 、中和高浓度的QC样品并重复分析5次以测定批内精度。根据这三个浓度水平计算25OHD的变异系数(CV) 。对低 、中和高浓度的QC样品进行连续5天的分析,测定批间精度。结果如表2所示。 灵敏度提取所得的最低浓度内部血清校准品的色谱图如图5所示。各色谱图标记了化合物名称、峰间信噪比(SNR)和浓度。所有响应均高于检测限(SN R 5:1),因此,本方法可检出维生素D严重缺乏症患者的维生素D水平( 图5 .色谱图显示了最低浓度校准品和各个分析物的信噪比测定结果。离子抑制离子抑制研究表明25OHD3在离子抑制区域部分洗脱,如图6所示。 图6 .25OHD离子抑制分析,通过放大视图显示了25OHD2和25OHD3的洗脱分析结果。需使用一种稳定同位素标记内标物来补偿所观测到的各个分析物之间的基质效应差异5 讨论本文中开发了一种利用UPLC/MS/MS分析血清中25OHD2和25OHD3的方法。该方法通过从血清中进行液-液萃取以及利用定性和定量离子进行各个分析物定量检测。此外,通过监测定性离子比率提高了准确识别分析物的可靠性。测定结果表明,本方法具有良好的灵敏度以及批内和批间精密度。采用本方法,可以每天分析多达100个样品。 结论本文中开发的分析血清中25OHD2和25OHD3的方法具有良好的线性、灵敏度和精度。本方法与传统的免疫测定法相比,可提供更加可靠的结果。UPLC/MS/MS能够准确可靠地测定血清中的25OHD2和25OHD3,防止误报接受D2补充治疗的患者体内的维生素D总体浓度。 参考文献1. GorhamED, Garland CF, Garland FC, Grant WB, Mohr SB, Lipkin M, et al. Optimalvitamin D status for colorectal cancer prevention: a quantitativemeta-analysis. Am J Prev Med 2007;32:210–6.2. GarlandCF, Gorham ED, Mohr SB, Grant WB, Giovannucci EL, Lipkin M, et al. Vitamin Dand prevention of breast cancer: pooled analysis. J Steroid BiochemMol Biol 2007;103:708 –11.3. Standing Committee on the Scientific Evaluation of DietaryReference IntakesInstitute of Medicine. DRI Dietary Reference Intakes for calciumphosphorus, magnesium, vitamin D and fluoride. National Academy Press,Washington, DC; 1997.4. HollisB. Editorial: The Determination of Circulating 25-HydroxyvitaminD: No Easy Task. J Clin Endocrinol Metab, July 2004,89(7):3149–3151.5. Viswanathan CT. et al. Quantitative Bioanalytical MethodsValidation andImplementation: Best Practices for Chromatographic and Ligand Binding Assays.Pharmaceutical Research 2007; 24(10):1962-1973.
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2014.01.21
Ian Edwards、JayneKirk和Joanne Williams沃特世公司(英国曼彻斯特)应用优势■ 简化了工作流程、验证和数据解析 ■ 设计用于大规模代谢组学和蛋白质组学数据集■ 集成式组学平台可用于各种各样的全面定性和定量分析沃特世解决方案包括TransOmics信息学软件的组学研究平台解决方案ACQUITY UPLC I-Class 系统nanoACQUITY UPLC 系统Xevo G2-S QTofTransOmics 信息学软件MassPREP 蛋白质酶解标准品 关键词组学,代谢组学,脂类组学,蛋白质组学,MSE,主成分分析,无标记LC/MS 简介近年来,包括基于LC-MS的代谢组学、脂质组学和蛋白质组学仪器等组学技术的进步实现了以高通量的方式对多种生物分子的丰度进行定量监测,从而测定它们在不同生物状态下的变化。我们的最终目标是增进对生物过程的理解,从而改善对于疾病的疗效,更有效地开发药物或维持作物生长的最佳农业环境,同时最大程度地减少传染和其它副作用。就此而言,不同分析学科的研究结果可提供正交的观点,通常可以互相作为补充。开发和应用能够将多个研究领域的结果进行整合的灵活信息学解决方案具有重大意义。本研究介绍了一种多组学解决方案,可用于对代谢组学和蛋白质组学数据集中的MS数据进行大规模分析。其中采用了包括TransOmics信息学软件的沃特世(Waters?)组学研究平台解决方案,并结合Xevo G2-S QTof系统进行技术和生物学重复分析。 结果与讨论执行的代谢组学实验包括相对于对照/质控样品,鉴定低剂量和高剂量样品。根据实验设计,样品应当划分为3个不同的组,并使用标记离子进行不同组的识别。用于代谢组学和脂类组学的TransOmics(TOIML)流程包括以下步骤: 1. 导入原始的MSE连续数据集(六个技术重复样/组)2. 峰对齐,纠正不同分析运行间的保留时间偏移3. 色谱峰归一化,以便在不同样品运行间进行比较4. 色谱峰检测(峰选择)5. 离子去卷积,按化合物将离子分组6. 利用已有的定制数据库进行化合物鉴定7. 执行数据分析,找出用以将化合物分为QC(质控)、空白(基质)和分析物(高剂量)的离子(特征) 基质背景包括系统评估基质,其中加入了不同的镇痛标准品混合物A,从而得到低剂量(QC和高剂量(空白)样品。质控样品(QC)通过混合等量的低剂量和高剂量样品而制成。 采用ACQUITY UPLC I-Class系统结合Xevo G2-S QTof,在正电喷雾模式下以大于30k FWHM的质量分辨率,分离和分析代谢物。在UPLC/MSE模式下采集数据,该模式是一种无监督的采集方法,其中当进行交替扫描时质谱仪在低能量和高能量之间切换。使用TOIML和专业化合物数据库进行处理、搜索和定量。 其中TOIML流程的步骤1,2和3在别处有详细描述(TransOmics信息学软件由Nonlinear Dynamics提供技术支持)。鉴定前,通过主成分分析对所检测离子进行分组,如图1所示,显示了综合得分图和载荷图。从中可知,离子主要聚集在技术重复水平,并且样品实现了清晰分离。 图1. 分析物(镇痛标准品混合物A高剂量;紫色),空白(系统评估基质;浅蓝色)和QC(质控样品;深蓝色)的主成分分析接着,采用集成式搜索工具进行化合物鉴定,以正确鉴定四种镇痛标准品混合物中可在正离子电喷雾模式下检测到的标准品。图2展示了TOIML化合物搜索结果页面的概览,其中突出显示了基于精确质量数、保留时间(可选)和理论同位素模式分布对咖啡因的鉴定。除了先前描述的PCA之外,TOIML中还整合了其它多变量统计工具,包括相关性和趋势分析。图3为一个示例,示出了四个加标标准品的归一化趋势图,表明每个标准品的六个技术重复样之间有着良好的一致性,并且相对丰度与实验设计一致。此外,TOIML还便于科学家将分析结果与其它组学数据关联,或为诸如EZinfo的独立统计软件包提供输入数据。下游生物信息学(即Umetrics软件)的结果可重新导入分析实验中,以将所有化合物数据合并为单个表格以供审查或分享。图2. TOIML化合物鉴定页面。图3.镇痛标准品的归一化丰度分析。在蛋白质组学实验中,分析了两个10ng大肠杆菌样品的三个重复样,分别加入了牛血清白蛋白(BSA)、乙醇脱氢酶(ADH),烯醇酶和糖原磷酸化酶B。第一个样品(混合物1)中的加标蛋白质的柱上进样量均为1飞摩尔,而第二个样品(混合物2)中的加标蛋白质柱上进样量分别为8、1、2和0.5飞摩尔。因此,额定预期比值(混合物2:混合物1)应为8:1、1:1、2:1和0.5:1。在本研究中,使用nanoAC-QUITY UPLC系统结合Xevo G2-S QTof,在LC/MSE采集模式下对肽进行分离和分析。采用用于蛋白组学的TransOmics(TOIP)以及含有加标蛋白质序列信息的种属特异性数据库进行处理、搜索和定量。 TOIP流程包括以下步骤:1. 导入原始的MSE连续数据集(每个样品有三个技术重复样)2. 峰对齐,纠正不同分析运行间的保留时间偏移3. 色谱峰归一化,以便在不同样品运行间进行比较4. 色谱峰检测(峰选择)5. 利用集成数据库搜索算法鉴定蛋白质和肽6. 多变量统计分析7. 绝对和相对定量 TOIP提供了与TOIML相同的多变量分析工具。图4显示了所检测特征的PCA示例,即电荷态组。可明显看出,特征主要聚集在技术重复水平。其中一种加标蛋白质消化物的肽定性鉴定结果示于图5中,该蛋白质中鉴定出的所有肽的归一化表达谱如图6所示。对后者的定量精确度类型进行了确证,此类型可通过无标记MS研究及基于LC/MSE的采集策略获得。 图4.大肠杆菌中加入的混合物1(深蓝色)和混合物2(浅蓝色)的特征(电荷态组)PCA图。图5显示了差异加标样品中一个分析物的LC/MSE采集的定性结果概览。在本例中,BAS的柱上进样量为8 fmol,而大肠杆菌消化物的量为10 ng。结果如图6所示,展示了相关的相对定量结果。图5.大肠杆菌中加入的不同浓度牛血清白蛋白肽的定性LC/MSE鉴定结果。顺时针显示的依次是鉴定相关指标(得分和误差)、具体的轮廓线图以及标注的产物离子谱图。图6.牛血清白蛋白中鉴定出的肽的定量分析。结论■TransOmics信息学软件为多组学研究提供了一个简单易用、可扩展的系统■UPLC/MSE(LC结合数据独立型采集MS)可在单次实验中提供全面的定性和定量数据集■通过代谢物、脂质和蛋白质分析可快速获取补充信息并进行关联
标准
2014.01.15
乔立瑞1、Rob Lewis2、AlexHooper2、James Morphet2、谭晓杰1、Kate Yu31、沃特世科技(上海)有限公司,上海,中国2、沃特世公司质谱技术中心,曼彻斯特,英国3、沃特世公司,马塞诸塞州米尔福德市,美国运用超高效液相色谱(ACQUITYUPLC I-Class)、四级杆飞行时间质谱(Xevo G2-S QTof)及UNIFI天然产物整体解决方案鉴定未知中药片剂中的化学成分并推测其所含药材。这一UNIFI对未知物组分鉴定和可能药材推测的整体工作流程大大提高了未知中药体系组分定性工作的准确性及效率。背景介绍:中药是一个极其复杂的物质体系,其发挥作用的物质基础主要是药材中的化学成分。应用纪要"使用UNIFI整体解决方案分析绿茶中的化学组分"(文献编号:720004840zh)中,我们已经阐述了如何应用UNIFI整体解决方案结合中药数据库来快速鉴定已知药材样品中的化学成分。对此类样品只需从UNIFI中药数据库导入相关的药材成分,并以它们为搜索目标对所得数据进行比对从而得出匹配成分列表并加以确证。此工作流程思路明确,步骤相对简单。 然而,人们在实际工作中往往需要对一些完全未知的样品进行化学成分分析,并要推测其中可能含有的中药材,这类工作的难度就很大,有时甚至不知从何入手。由于已知背景信息近乎于零,运用目前最常见的液质联用仪的分析即使得到大量数据,如何从庞大信息中缩小目标范围快速找到有用信息仍是所有科研人员共同面对的最大挑战。 对于未知中药产品的组分研究,传统的工作流程是:研究人员手工提取每个色谱峰,通过精确分子量来推导可能的分子式。然后根据分子式检索在线数据库,并且需要通过相关的二级碎片推导其可能的裂解途径,进而确定结构。该研究思路由点到面,这一系列环节中,不仅很多步骤需要研究人员的直接介入,同时对研究人员的化学背景要求很高,需要不断从信息的海洋中寻找答案。 UNIFI天然产物整体解决方案提出了一套新的全方位解决问题的思路。它以超高效液相色谱 (ACQUITY UPLC I-Class) 与四级杆飞行时间质谱(Xevo G2-S QTof)为基础,对样品进行非数据依赖的MSE数据采集,将所得数据与UNIFI中药数据库进行比对,所匹配成分结构以其相应碎片经MassFragment?确证,最终通过预设的工作流程模版自动显示出所鉴定样品组分的详细信息。 本应用纪要便以未知物中药片剂为例阐述了如何采用UNIFI天然产物整体解决方案鉴定未知样品中的化学成分并推测其中可能的药材。关键词: 未知中药产品成分分析、未知中药产品药材推测与确证、UNIFI 天然产物整体解决方案、UNIFI 中药数据库、UPLC/QTofMS、 MSE、UNIFI 天然产物工作流程、丹参、三七 实验条件: 样品处理: 将未知中药片剂两片,去包衣,研成粉末状,取500 mg溶解于50 mLMeOH:H2O(3:1),超声溶解5min,并以0. 45μm薄膜过滤,备用。 液相色谱条件:仪器: ACQUITYUPLC I-Class with FTNSample Manager色谱柱: ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 100 mm, 1.8 μm, 40oC样品室温度: 15 oC流动相 A:水(0.1% 甲酸)流动相B:乙腈梯度:时间流速 (ml/min)溶剂A (%)溶剂B(%)曲线00.69010开始10.690106120.65956140.601001170.690101质谱条件:仪器: XevoG2-S QTof MS采集质量范围: 100-1500Da 扫描时间: 0.1 S采集模式: ESI+和 ESI-分辨率模式,MSELock mass: 亮氨酸脑啡肽(LE)1 ppm(0.3 S 扫描,间隔:15 S)毛细管电压: 3 KV (ESI+)/ 2.5 KV (ESI-)锥孔电压: 100V碰撞能量(eV): low CE:6 /HighCE:20-50电离源温度: 120 oC脱溶剂温度: 500 oC锥孔气流速: 30 L/h脱溶剂气流速: 1000L/h数据采集时间: 17 min结果: 采用超高效液相色谱(UPLCI-Class)与四级杆飞行时间质谱(Xevo G2-S QTof)对未知物中药片剂的相关化学成分进行分离以及质谱数据的采集。利用UNIFI天然产物整体工作流程结合整个中药数据库进行数据处理,软件自动鉴定288个组分,经MassFragment初步确证了其中含量较高的37个主要成分。通过已被确定化学成分与药材的关联分析, 推测未知片剂中可能含有药材丹参及三七。通过网络搜索含此二味药材的已知中药成方将可能相关的药材在中药数据库中所列成分与实验数据再次比对,确证了该未知中药片剂中的59个主要成分皆来自丹参与三七。最终结论:该片剂主要只含有丹参和三七两种药材,很可能是三七丹参片或复方丹参片。 讨论: UNIFI天然产物整体解决方案包括ACQUITYUPLC I-Class超高效液相色谱、XevoG2-S QTof四级杆飞行时间质谱以及含中药数据库的UNIFI软件信息平台。对于已知中药材成分分析的工作流程已经在应用纪要应用UNIFI整体解决方案鉴定绿茶提取物化学成分(部件编号:720004837zh)中进行了详细阐述。对完全未知的样品,则需在采用该工作流程的基础上加入药材推断,在线检索可能的中药成方,以及从UNIFI中药数据库再次导入相关药材信息并进行再确证的步骤。图1显示了完整的未知物组分鉴定的工作流程。 图1 未知物中药复方组分鉴定的工作流程图2a是以二维图象显示的该未知中药片剂的UPLC/QTofMS基峰离子图(BPI),UNIFI平台亦可将同样的结果以三维图象显示(图2b).与图2a所示的二维图谱相比,三维图象信息更丰富真实,可以更直观的了解整个样品的组分分布轮廓。比如从图中我们可以很快断定该样品化学组分的分子量分布范围主要集中在400-1000Da。除此以外,也可以初步观察整个样品内化合物的共流出状况。这一三维图谱是通过UNIFI独有的Apex 3D图象扫描的方式产生,除直观效果以外,更有助于提高后期定量定性工作的准确性,并且对噪音的识别与排除有较强的优势。 图2a 未知物中药片剂的UPLC/QTofMS基峰离子图(BPI) 图2b 未知物中药片剂的3D质谱图UNIFI天然产物整体解决方案工作流程有如下特点:1,从色谱峰的提取、分子式的确定、中药数据库的搜索、二级碎片的匹配到组分的初步鉴定全部由软件自动完成;2,研究人员仅仅需要对MassFragment已自动给出的碎片信息,初步的判断其合理性;3,如果怀疑假阳性或有组分未被匹配,研究人员再进行手动鉴定。 与传统的研究模式相比较,UNIFI天然产物整体解决方案将大量的数据筛选工作,即从信息的海洋中寻找有用目标这个一直靠研究者手动操作的甁颈变成了软件的自动化流程,大大降低了研究人员的工作量,同时极大减少了这项工作的盲目性,从而使效率大大提高。 图3显示了未知中药片剂成分鉴定的结果界面(图3)。3a UNIFI天然产物的整体工作流程模版;3b 组分鉴定列表;3c与3b相对应的单个组分选择离子色谱图;3d与3c相对应的质谱图 图3 显示了UNIFI软件处理后未知中药片剂成分鉴定的结果界面。在最初得到的成分列表中(3a),同一个保留时间的色谱峰可能含有多个同分异构体。此时需要通过化合物的加合离子,以及其相应的二级碎片信息(蓝色的图表 )进一步排查推断所鉴定化合物的合理性。例如软件所自动鉴定的保留时间为7.54分钟的色谱峰为人参皂苷Rb1或YesanchinosideE,此时点击图3d便可看到其相应的放大图(图4)。因MassFragment已经对该化合物的二级碎片结构进行自动匹配,研究人员可以很直观快速的观察碎片断裂的合理性。该化合物的裂解自糖苷键的断裂到最终原人参二醇苷元碎片的生成,都表明人参皂苷Rb1的结构更为合理。故可将人参皂苷Rb1定义为Confirmed。 图4组分人参皂苷Rb1的二级碎片离子的MassFragment的匹配结果经过以上组分确证后,可以看到该未知物片剂中,含有人参皂苷,丹参酚,丹参酮,三七皂苷等化合物类型,经组分与药材的关联显示,该未知物片剂中可能含有原料药材丹参及三七。通过在线网络搜索,发现可能含有这两种药材的中药成方有三七丹参片,复方丹参片。当然还发现了含这两种药材外的其他配伍方剂,比如它们与西洋参或山楂等配伍的方剂。 再下一步的工作便已经由开始的无目标筛查,转变为对已知药材进行组分分析。其流程步骤与应用纪要“应用UNIFI整体解决方案鉴定绿茶提取物化学成分”(文献编号:720004840zh)完全相同。即将目标药材(丹参、三七、西洋参、山楂)从中药数据库导入与实验数据再次比对,结果没有发现与西洋参和山楂的特征组分相匹配的色谱峰(如西洋参皂苷、绞股蓝皂苷、山楂皂苷等特征组分),由此进一步确认该片剂中不含西洋参和山楂。同时所得样品主要色谱峰均能与丹参和三七的主要成分匹配(确证了59个主要组分),见表1。最终得出结论:该片剂中含丹参和三七药材,很有可能是三七丹参片或复方丹参片。表1通过导入天然产物组分信息总览模板自动得到的未知物片剂中组分鉴定概况报告 结论: 该应用纪要阐述了UNIFI天然产物整体解决方案应用于对未知物组分鉴定和可能药材推测的整体工作流程,该工作流程是一个从开始的无目标筛查逐步转化为有目标分析的过程。 UPLC/QTofMS 样品分析时间只需17分钟。前期无目标筛查初步鉴定主要化学成分37种,推断相关药材为三七与丹参。经网络搜索已知中药成方,将可能相关药材(丹参, 三七, 西洋参, 山楂)再以有目标筛查方式与实验数据再次比对。结果,中药数据库中所列丹参和三七化学成分共103种,其中有59种主要成分与所得数据匹配并得到确认,而其余两味药材所含主要成分找不到合理匹配。最终结论:所检测未知中药片剂极可能是三七丹参片或复方丹参片。 UNIFI天然产物整体解决方案辅以中药数据库并结合组分结构的自动鉴定功能是崭新的中药复杂组分分析的解决方案。为复杂中药复方制剂,尤其是完全未知的样品的组分定性工作提供了新的思路,最终减少该类研究的盲目性,大大提高效率。
标准
2014.01.15
沃特世ACQUITY QDa荣获分析科学家杂志2013最佳创新奖技术研讨会持续在各大城市展开 【中国 北京】沃特世(Waters)公司继10月份上海、成都、北京、广州等四个一线城市举办首轮ACQUITY QDa发布会之后,近期相继在南京、苏州、杭州、合肥、太原、天津、沈阳、西安等8个城市持续举办了技术研讨会,将这款专为液相色谱量身打造的质谱检测器介绍给广大中国用户。ACQUITY QDa质谱检测器是汇集了沃特世30年质谱经验和创新的巅峰之作,拥有37项全新以及申请中的专利,解决了影响日常质谱应用的复杂性、仪器体积和成本问题。它围绕分析科学家的需求而特别开发,摆脱了质谱仪的操作复杂性,让科学家们轻松获得质谱数据。近日更被业内著名杂志TheAnalytical Scientist Magazine(分析科学家杂志)授予2013最佳创新奖的荣誉。液质联用技术自上世纪八十年代以来,几十年的创新发展,不断推陈出新。沃特世始终领跑整个分析行业,继2004年推出超高效液相色谱(UPLC),重新定义色谱分离科学,2012年又推出了超高效合相色谱,再次重新定义色谱分离科学,形成气相、合相、液相三大色谱分离技术鼎立之势。今年,再次重磅出击,推出一款基于质谱分析检测原理的质谱检测器ACQUITY QDa,让质谱技术真正进入了色谱大家庭,从根本上实现了色谱技术与质谱的无缝对接,使液质联用技术进入一个新的时代。沃特世每一次的产品创新都能解决业界最顽固的难题,为科学家们带来福音。自推出以来,ACQUITY QDa质谱检测器受到了行业专家们的密切关注。为了充分了解客户的需求,沃特世公司通过在不同城市举办技术研讨会的形式向业内专家们解读了该产品的研发背景、研发目的以及研发展望。正是凭借其卓越的性能,ACQUITY QDa质谱检测器毫无疑问的被《分析科学家杂志》授予了‘2013顶级创新奖’。杂志于2013年1月推出,涵盖了平面杂志和全球化网站。该杂志涵盖了分离、对人们生活产生重大影响的化学成分的鉴定、化学材料分析、日常所吃的食物、我们的环境、能源供给、药物等所有与生活息息相关的方面。面向全世界发行。据杂志网站介绍,分析科学家杂志获奖者具有增强样品制备、分离、鉴定、量化、分析的能力或者他们的综合,并有助于基础科学分析,以使我们的世界更加安全,诊断疾病更为高效。获奖产品是由该杂志的读者提名,再由专家评审团选出。这充分证明了行业内的专家读者们对于此产品的高度认可。有关详细信息,请访问www.waters.com/separate 关于沃特世公司(www.waters.com)50多年来,沃特世公司(纽约证券交易所代码:WAT)通过提供实用、可持续的创新,使医疗服务、环境管理、食品安全和全球水质监测领域有了显著进步,从而为实验室相关机构创造了业务优势。 作为一系列分离科学、实验室信息管理、质谱分析和热分析技术的开创者,沃特世技术的重大突破和实验室解决方案为客户的成功创造了持久的平台。 ###2012年沃特世拥有18.4亿美元的收入,它将继续带领全世界的客户探索科学并取得卓越成就。 联系人:叶晓晨沃特世科技(上海)有限公司市场服务部xiao_chen_ye@waters.com 孙玲玲(LindaSun)泰信策略(PMC)18027283917Linda.sun@pmc.com.cn
百态
2014.01.14
Marian Twohig1、Andrew Aubin1、Michael O’Leary1、Tom DePhillipo2、Sherry C. Perine3和David R. Stubbs31沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德)2沃特世公司(美国特拉华州纽卡斯尔)3先正达作物保护公司(美国北卡罗来纳州格林斯伯勒) 应用优势■与正相分离相比,本方案提高了对映体和非对映体之间的分离度,缩短了分析时间,实现了更高的样品通量并减少了溶剂消耗。■对映体和/或非对映体比率测量的可靠性和可重复性确保了应用正确率。关键词手性农药,UPC2,对映体,非对映体,手性分离,手性拆分,异丙甲草胺,甲霜灵,苯醚甲环唑。简介因为对映体在手性环境中发生不同的反应,所以开发手性化合物分离分析方法对于许多研究领域而言都非常重要。生化反应可能具有立体或对映选择性,当一种对映体在生化反应中产生预期效应(称为优性异构体)时,另一种对映体可能对靶点的效应较弱或完全无效。据估计,当今市场上30%的农药具有光学异构体,并且有报道指出中国所用的农药有40%为手性农药1,2。对单个对映体的效应的认识可能有助于显著降低农药应用总量,因此对映选择性的研究对农用化工制造业意义重大。为了提高人们对对映选择性的认识,所采用的分析方法需要能够在短时间范围内实现可靠且可重现的分离。超临界流体色谱(SFC)被认为是一种有效的手性分离技术,与常规的高效液相色谱(HPLC)相比,它具有许多优势3,4。利用超临界流体的特性可实现高效分离并缩短分析时间。新型农药的结构越来越复杂,这意味着在一个分子中很可能有多个手性中心5,6,7,需要使用高效的技术才能成功分离。 在本应用纪要中,我们展示了三种农药的对映体和/或非对映体分离:甲霜灵-M(苯基酰胺类杀菌剂),S-异丙甲草胺(乙酰苯胺类除草剂)和苯醚甲环唑(三唑类杀菌剂)。甲霜灵具有一个手性中心,而异丙甲草胺和苯醚甲环唑具有两个手性中心。它们的结构如图1至3所示。使用Waters超高效合相色谱系统(UltraPerformance Convergence Chromatography System, UPC2)进行分离。合相色谱是针对液相色谱的一种补充性分离技术,具有正交选择性,以超临界CO2作为主要流动相。实验仪器 本方法使用ACQUITY UPC2系统进行分离,单波长光电二极管阵列(PDA) 检测器。使用Empower 3软件进行色谱数据处理。 样品制备农药标准品由先正达公司提供,与异丙醇共溶备用。 方法条件甲霜灵-M分离模式: 梯度色谱柱: ChiralpakIA-3 4.6×150 mm,3 μm共溶剂: 异丙醇ABPR: 2000 psi/138 bar流速: 4.0 mL/minUV检测: 215 nm柱温: 55 ℃ 进样体积: 1 μL 苯醚甲环唑分离模式: 等度色谱柱: Chiralcel OD-3 4.6×150 mm,3 μm共溶剂: 异丙醇/1-丁醇(70/30)ABPR: 2000 psi/138 bar流速: 2.0 mL/minUV检测: 235 nm柱温: 35 ℃进样体积: 2 μL S-异丙甲草胺分离模式: 梯度色谱柱: Chiralpak IA-3 4.6×150 mm,3 μm共溶剂: 异丙醇ABPR: 2000 psi/138 bar流速: 2.5 mL/minUV检测: 220 nm柱温: 35 ℃进样体积: 2 μL 结果与讨论在通用筛选梯度条件下,采用多种手性柱和共溶剂开始对农药标准品进行方法开发。采用这种技术可缩短分析时间,从而可快速完成筛选步骤。然后对共溶剂和色谱柱的组合进行优化,以使每种化合物实现最佳分离。手性分离的选择性随不同的温度、压力和流速而显著改变8。我们还对梯度和等度分离进行了评估;二者均能使各种化合物的立体异构体得到成功分离。 此处报告的分离显示出最佳分离度(Rs)。甲霜灵的外消旋混合物标准品和具有生物活性的R-对映体9甲霜灵-M的优化分离如图4所示。 S和R对映体之间的Rs为2.64(表1)。在2009年发表的一篇文献中报道了一种采用己烷/乙醇(60/40)进行甲霜灵对映体分离的正相等度方法,该文献中对手性农药的对映选择性分离进行了全面研究。据报道,在不到15 min的时间内洗脱的两种对映体的Rs为1.9410,11。 据报道,异丙甲草胺中95%的除草活性来自S型对映体12,13。异丙甲草胺的所有四种立体异构体的分离如图5所示,峰3和4之间出现最Rs值1.62(表1)。2009年发表的文章中还报道称,采用正相分离技术和己烷/二乙醚(91/9)可实现异丙甲草胺立体异构体的基线分离。该文章中的谱图显示所有四种立体异构体在20-30 min之间洗脱10,14。本文所报道的ACQUITY UPC2方法可显著缩短甲霜灵和异丙甲草胺的分析时间。此外,无需使用有潜在危险的溶剂。苯醚甲环唑外消旋混合物的立体异构体分离如图6所示。峰2和3之间出现最Rs值1.5。在前文提及的文章中报道了采用己烷/乙醇(90/10)对苯醚甲环唑的立体异构体进行正相分离,四种立体异构体在30-55 min之间发生分离。按照所报道的方法,峰1,2或峰2,3之间未达到基线分离(Rs>1.5)10,15。 经优化的ACQUITY UPC2方法可增加样品通量,并提高对映体和非对映体的分离度。对于甲霜灵-M,两种对映体在1 min内洗脱(图4);S-异丙甲草胺的所有四种立体异构体在4.5 min内洗脱(图5)。采用等度洗脱,四种苯醚甲环唑立体异构体在8 min内实现分离(图6),比文献中报道的某些正相方法快6倍。各种化合物的所有立体异构体的保留时间、峰面积、峰面积%和峰高的重现性数据(n=6)的RSD%低于或等于1.22(表2-4)。 结论在本应用纪要中,我们展示了利用ACQUITY UPC2进行的手性农药分析。与传统的正相分离相比,ACQUITY UPC2可实现高效分离,能够显著增加样品通量10,缩短了从色谱柱和共溶剂的筛选阶段到形成最终优化方法所需的方法开发时间。本文中介绍的方法使用超临界CO2作为主要流动相,异丙醇作为主要的有机改性剂。对于使用大量具有潜在危险的溶剂的需求降低,从而削减了与溶剂弃置处理相关的成本。所得的RSD%与利用UPLC/UV方法所得的RSD%相当。一直以来,由于在分离手性化合物方面存在困难,使得对于对映选择性毒性和环境的研究面临着严峻挑战。 现在,我们可以通过更快速的分析方法来分离手性化合物,这也意味着我们能更迅速地获得有关立体选择性行为的关键信息。 参考文献 1. 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Springer U.S. 2012; 217: 1-74.8. McCauley JP, Subbarao L, and Chen R. Enantiomeric and Diastereomeric Separations of Pyrethroids Using UPC2. Waters Application Note APNT134717217. 2012, December.9. Zadra C, Marucchini C, Zazzeini A. Behavior of metalaxyl and its pure R-enantiomer in sunflower. J. Agric. Food Chem. 2002; 50:5373-5377.10. Ye J, Wu J, Weiping L. Enantioselective separation and analysis of chiral pesticides by high-performance liquid chromatography. Trends in Analytical Chemistry. 2009; 28(10):1148-1163.11. Saito K, Yato M, Ito T, Iwasaki Y, Ito R, Matsuki Y, Nakazawa H. Verification of the need for optical purity measurement of chiral pesticide standards as agricultural reference materials Accred. Qual. Assur. 2008; 13:373-379.12. Poiger T, Muller MD, Buser HR. Verifying the chiral switch of the pesticide metolachlor on the basis of the enantiomer composition of the environmental residues. Chimia. 2002; 56:300-303.13. O’Connell PJ, Harms CT, Allen JRF. 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标准
2014.01.07
乔立瑞1、Rob Lewis2、AlexHooper2、James Morphet2、谭晓杰1、Kate Yu31、沃特世科技(上海)有限公司,上海,中国2、沃特世公司质谱技术中心,曼彻斯特,英国3、沃特世公司,马塞诸塞州米尔福德市,美国 本应用纪要介绍了使用以超高效液相色谱(UPLC),四级杆飞行时间质谱(QTof MS)以及中药数据库为基础的UNIFI天然产物解决方案分析绿茶中化学成分的方法。该解决方案将实验采集、数据处理与中药数据库的导入有机结合起来, 使得复杂中药体系中化学组分的定性工作变得简单、有效,而且程序化,从而大大提高了工作效率,降低了对操作人员技术背景的要求。 关键词: 中药成分分析;UNIFI中药数据库;UPLC/QTof MS; UNIFI天然产物解决方案;UNIFI 天然产物工作流程; 绿茶成分分析 背景介绍: 中药的功效已为几千年的历史和现代临床验证所肯定。但中药的作用本质、物质基础、作用机理的研究尚且面临诸多挑战,其核心就是了解中药中所含的化学成分。 所有天然产物的研究都要起源于成分分析。然而成分分析的研究工作长久以来一直面临多重挑战。比如传统的成分分析方法复杂,耗时且低效等。归总起来,这类方法不外乎采用以下几个途径:1,购买相关标准品,与样品中的组分进行对比,这一途经的缺点是成本很高而且不一定能找到所有相关的标准物;2,采用各种分离制备手段对组分进行分离纯化,这其中缺点是具有极大的盲目性,耗时太长,同时还不可避免的涉及到大量的重复性工作;3,通过查文献来寻找答案,但过去的文献报道采用的数据往往采自低分辨率仪器,存在不少假阳性结果。以上无论哪种途径均对研究人员的技术背景要求较高。 中药物质基础研究效率低下一直是制约中药现代化的瓶颈。近年来,液质联用技术的兴起对解决这一挑战有所帮助,但未显示出关键性突破。目前最常见的液质联用解决方案依然是对每个色谱峰逐一鉴定,通过检索数据库寻找可能的结构信息,然后再查文献进一步匹配二级碎片的数据与裂解途径,最终确定化合物的结构。这类研究模式最大的局限性仍是耗时长、效率低,同时对操作人员的中药及化学背景要求很高。 本应用纪要以绿茶为应用实例向大家介绍最新的沃特世(Waters)UNIFI天然产物整体解决方案。该解决方案以超高效液相色谱(ACQUITY UPLC I-Class)、四级杆飞行时间质谱(Xevo G2-S QTof MS)以及UNIFI中药数据库为基础,将实验采集、数据处理与中药数据库的导入有机的结合起来, 使得复杂中药体系中化学成分分析的工作变得简单、有效,而且程序化,从而大大提高了工作效率,并降低了对操作人员技术背景的要求。图1概括了UNIFI天然产物整体解决方案成分分析的工作流程。绿茶作为天然饮品深受大众的喜爱,由于其没有经过发酵过程故较多的保留了鲜叶中天然物质,含有茶多酚、儿茶素、儿茶酚、咖啡碱、氨基酸、维生素等化学成分。这些都为绿茶中化学成分的研究提供了良好的基础,从而使我们可以借此实例来阐述UNIFI天然产物整体解决方案,并用可得的标准品进行验证。整个工作流程从进样分析到报告的生成只需约两个小时。图1UNIFI天然产物整体解决方案成分分析的工作流程实验条件:样品处理: 取绿茶提取物(Waters,No. 186006962) 33 mg溶解于2 mL MeOH:H2O 1:3,然后稀释至两倍浓度,备用。 将儿茶素混合物标品(GreenTea Catechin Mix)用甲醇稀释至50μg/mL,进样量为1 μl。液相色谱条件:仪器: ACQUITYUPLC I-Class with FTNSample Manger色谱柱:ACQUITY UPLC HSS T3, 2.1 x 100 mm, 1.8 μm,40oC样品室温度: 15 oC流动相 A:水(0.1% 甲酸)流动相B:乙腈梯度:质谱条件:仪器: XevoG2-S QTof MS采集质量范围: 100-1500 Da扫描时间: 0.1S采集模式: ESI+和ESI-分辨率模式,MSELock mass: 亮氨酸脑啡肽(LE) 1 ppm(0.3 S 扫描,间隔: 15 S)毛细管电压: 3 KV (ESI+)/ 2.5 KV (ESI-)锥孔电压: 100V碰撞能量(eV): low CE:6 /HighCE:15-40电离源温度: 120oC脱溶剂温度: 500 oC锥孔气流速: 30L/h脱溶剂气流速: 1000L/h数据采集时间: 20min 结果: 使用超高效液相色谱(ACQUITY UPLC I-Class)与四级杆飞行时间质谱(Xevo G2-SQTof)对绿茶提取物中的相关化学成分进行分离。采用 UNIFI 天然产物整体工作流程结合天然产物数据库进行数据处理,软件初步鉴定28个组分,经MassFragment?确证16个成分。整个工作流程从进样分析到报告的生成只需约两个小时。讨论: UNIFI 天然产物整体解决方案包括ACQUITYUPLC I-Class 超高效液相色谱、Xevo G2-S QTof 四级杆飞行时间质谱、含有UNIFI中药数据库的UNIFI软件平台。该整体解决方案提供了十四个预设的样品分析工作模板和三个结果报告模版,从而使数据采集、处理、数据库检索、结构确认以及结果报告全部自动化。 图2是绿茶提取物的UPLC/QTof MS 基峰离子色谱图(BPI)。此图显示了采用超高效液相色谱分析复杂中药体系的优势,不仅运行时间短(有效分离时间为15 min),且分离效率与峰容量都很高;同时四级杆飞行时间质谱又提供了含精确质量信息的质谱数据。除此之外,采用MSE的数据采集模式使我们能在一次进样的情况下可以同时获得化合物分子量(低碰撞能量)以及与之对应的二级碎片离子信息(高碰撞能量)。这一切都为下一步的成分分析及结构认定奠定了良好的基础。图2是绿茶提取物的UPLC/QTof MS 基峰离子色谱图(BPI)天然产物研究瓶颈的另一个关键问题所在是尽管有大量的在线数据库,但至今没有任何与仪器分析有机结合专适用于中药成分研究的商业数据库。UNIFI天然产物解决方案首次填补了这一空白。我们首次提出的UNIFI中药数据库紧贴2010版中国药典,列入了所有此版药典收录的药材。图3显示了该数据库的基本结构及其包含的信息,包括:化合物的名称(中文与英文),化学结构、分子式、精确质量以及其药材产地。该数据库还针对每个所列药材提供了其名称(中文、 拼音,及拉丁名),文献已报道的主要化合物等。除此以外,该数据库还将每个所列化合物进行了化学分类,为下一步碎片分析垫定了基础。图3 UNIFI中药数据库的基本结构及其包含的信息UNIFI天然产物解决方案将该数据库的导入有机地融合进UNIFI成分分析的工作流程之中。图4是融合了UNIFI数据库整体工作流程后运行数据得到的结果。 图4a罗列了十四个预设的样品分析工作模板。点击该表单的任意一项便可在右边的4b、4c及4d中看到相应的结果。比如点击Component– Good Match便可以看到响应值高于2000 counts且分子量偏差小于3ppm的被鉴定出的组分信息。其中,图4b是已鉴定的与数据库成分匹配的组分表。此表所列的每个化学成分均包含以下重要信息:化合物名称、分子式、分子量、响应强度、保留时间、质量偏差、离子的检测模式、加合离子以及鉴定状态。图4c是4b所显示组分对应的色谱图(此处显示的是咖啡碱);图4d对应于4c所示成分的MSE质谱图(含母离子谱图和二级碎片谱图)。图4 UNIFI软件处理后绿茶提取物鉴定成分列表。4a:UNIFI天然产物的整体工作流程摸版;4b:成分分析结果,组分鉴定表;4c:每个组分对应的谱图(此处显示的是咖啡碱);4d:对应于4c所示成分的MSE质谱图(含母离子谱图和二级碎片谱图)。在之前UNIFI的成分分析解决方案中,研究人员需要提取每个色谱峰,查看其质谱图,基于得到的精确分子量,推导可能的分子式。然后再根据分子式检索在线数据库,并且需要通过相关的二级碎片推导可能的裂解途径,进而确定结构。现在,采用UNIFI天然产物整体解决方案,通过导入中药数据库后,数据处理及数据库检索可自动运行,且鉴定结果可以自动直接显示(图5)并且结构是否合理也已通过MassFragment被自动确证。 图4d中与化合物母离子相对应的每个二级碎片均可以通过点击蓝色的图标直接看到。此时操作人员需要做的工作只是判断具体裂解碎片结构是否正确.。如果其裂解合理,便可初步断定结构正确,从而将该化合物定义为已确认(Confirmed)。如果怀疑是假阳性,可进一步利用手动鉴定功能,搜索在线数据库并应用MassFragment来进一步推断。当然,对没有与UNIFI数据库匹配的组分也可如此操作而定性。最后确认的结果可以在Component – Confirmed Table中直接显示(图4b), 同时也可以采用鉴定成分图(图5)或列表的方式显示并生成报告(图6).图5 UNIFI软件处理后绿茶提取物鉴定成分图UNIFI 天然产物整体解决方案中包含三个预设的报告模板,以方便研究人员直接打印相关的报告。与成分分析相关的报告模板有:天然产物组分信息总览模板,天然产物详细组分信息模板。被测物中组分鉴定概况的报告只需导入天然产物组分信息总揽模板便可轻易获得(图6)。该报告包括了样品的信息、样品的采集和后处理方法,以及相关的各种数据信息。图6 通过导入天然产物组分信息总览模板自动得到的被测物中组分鉴定概况的报告结论: 该应用纪要以绿茶成分分析为应用实例,系统的介绍了UNIFI天然产物整体解决方案成分分析的工作流程。UPLC超高效液相色谱分离克服了传统HPLC分离所固有的分离时间长、分离度有限、峰容量不高的各种缺陷。四级杆飞行时间质谱提供了精确定性信息和足够的动态范围,为中药组分的定性和定量垫定了扎实的基础。 UNIFI天然产物整体解决方案辅以中药数据库,并结合组分结构的自动鉴定功能,是崭新的中药复杂组分分析的解决方案。UNIFI软件平台从采样到数据处理,到最后打印报告可一次性完成。绿茶成分分析整个流程仅需两个小时。该方案还含有预设的工作流程模板及各种报告模板,省去研究人员再编辑的漫长过程。 所有成分分析定性工作由软件自动进行,这一切皆使得复杂中药体系中化学组分的定性工作变得简单、有效、而且程序化,从而大大提高了工作效率,降低了对操作人员技术背景的要求。所有一切都为解决中药物质基础研究所面临的挑战,为中医药发展做出突破性贡献。
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2014.01.07
沃特世发布全新UNIFI中药及天然产物解决方案 [中国,广州 – 2013年12月12日]沃特世(Waters)公司(纽约证券交易所代码:WAT)在广州富力丽思卡尔顿酒店举办了全新UNIFI中药及天然产物解决方案高端客户交流会,会议上沃特世发布了全新UNIFI中药及天然产物解决方案,参与此次会议的包括来自药典委员会、中药标准研究,中药组分分析以及中药企业等相关领域的30余位专家。交流会现场 会议特邀中科院上海药研所的果德安研究员以及上海第二军医大学的张卫东教授分别作为嘉宾主持,会议在轻松气氛中开始,由沃特世美国中药业务部首席科学家KateYU博士分享了UNIFI全新中药及天然产物解决方案的研发背景、研发目的以及研发展望,而沃特世资深应用工程师乔立瑞博士则介绍了UPLC QTof with UNIFI中药及天然产物工作流程,并进行了实例演示。 中药是一个极其复杂的物质体系,中药分析的核心就是了解中药中所含的已知和未知化学成分或进行中药的研究,但中药作用的本质、物质基础、作用机理的研究尚存很多挑战,研究效率低下一直是中药制约现代化的瓶颈。近年来液质联用技术的兴起对改善这一瓶颈有所帮助, 但未显关键性突破,依然是对每个色谱峰逐一鉴定,通过检索数据库寻找可能的结构信息,然后再查文献, 进一步匹配二级碎片的数据与裂解途径,最终确定化合物的结构。这类研究模式最大的局限性仍是耗时长、效率低,同时对操作人员的中药及化学背景要求皆高,故全面分析天然产物极具挑战。“现代社会科学技术飞速发展,向科学家们提出越来越多的挑战;而面对科学的世界,科学家们有很多新的设想,需要仪器公司提供好的工具;每一次仪器公司的创新和进步,对科学家都是一个促进。”中国科学院上海药物研究所,国家药典委员会执行委员,果德安在活动开场时如是说。 在这种背景下,沃特世UNIFI天然产物整体解决方案应运而生。凭籍对中药分析领域的长期投入,沃特世洞悉科学家们对天然药物和中药分析领域的需求,全新的解决方案是完全针对中药分析行业的工作需求和流程而设计的整体解决方案,是沃特世帮助科学家们“实现想望“之公司愿景的完美体现。沃特世产品总监舒放先生表示:UNIFI天然产物解决方案是应对分析挑战的理想选择,它充分了解科学家们的关注,为科学家提供了精密的整套工具集,从而由样品到认知,从知识到市场的整个流程变得简单而程序化。”UNIFI 天然产物解决方案UNIFI 天然产物解决方案是一款完整的解决方案,其中包含了沃特世ACQUITY UPLC I-Class、Xevo G2-S QTof以及含中药数据库的UNIFI 软件信息平台。并具有以下特点:n 标准化的工作流程全新Waters UNIFI天然产物整体解决方案以中药数据库为基础, 将实验采集, 数据处理与中药数据库的导入有机的结合起来,辅以组分结构的自动鉴定功能,从采样到数据处理,到最后打印报告可一次性完成,使得复杂中药体系中化学成分分析的工作变得简单、有效、而且程序化。n 功能强大的数据库UNIFI中药数据库,跟随2010版中国药典,列入了所有此版药典收录的药材,该数据库包括了化合物的名称(中文与英文),化学结构,分子式,精确质量,以及其药材起源。该数据库还针对每个所列药材,提供了其名称(中文,拼音,及拉丁名),文献已报道的主要化合物等。除此以外, 该数据库还将每个所列化合物进行了化学分类,为下一步碎片分析垫定了基础。n 预设工作模板和报告模板该整体解决方案提供了十四个予设的样品分析工作摸版和三个结果报告模版, 从而使数据采集, 处理, 数据库检索, 结构确认以及结果报告全部自动化。 会上暨南大学药学院副教授戴毅博士和中国科学院上海药物所中药标准化技术国家工程实验室研究员吴婉莹博士也分别做了客户体验分享实例报告和植物药国际质量标准制定的报告。围绕着报告与会的专家们展开了热烈的互动及同行讨论,会议在友好的气氛中结束.这次会议,沃特世展示了其全新的UNIFI中药及天然产物解决方案,认真聆听了各专家在中药领域中的各种挑战并给予建议,并和与会者们共同探讨了该方案在中药及天然产物中的基础研究,复杂体系成分分析,中药材质量评价方面等应用前景。“UNIFI这个整体解决方案对于高端中药企业,特别是期望能够长远发展,并提高自身竞争力的中药企业来说提供了一个很好的框架和平台,企业可以根据自身的需求和特点在此框架上建立一个最适合自己的内部标准,这一点是非常重要的。”广州香雪制药有限公司伍军副总经理这样表达了自己的观点。专家们充分肯定UNIFI 天然产物解决方案的研发方向,希望通过更多的业界研究成果共享,来共同推动中药分析解决方案的发展和完善,期待着更多的携手与合作。
新品
2014.01.02
Keith Richardson1 , Christopher J. Hughes1 , Arkadiusz Grzyb1 , Dominic Helm2 , Bernhard Kuster2 , Jason Wildgoose1 1沃特世公司 (英国曼彻斯特) 2慕尼黑理工大学 (德国弗赖辛)应用优势 ■ 改善蛋白质识别,增加蛋白质组覆盖范围 ■ 即使在极低浓度下也能实现可靠鉴定 ■ 更有效地进行LC/MS/MS分析从而加快决策过程简介随着自下而上(bottom-up)蛋白质组学分析的复杂性不断增加,对于质谱仪的能力提出了挑战,其需要生成更多的详细信息才能满足用户的需要。近年来,质谱仪的速度、灵敏度和质量数准确性都有了显著的提高,可获得更好的数据质量、改善的肽序列标注以及更准确的鉴定结果。随着硬件性能的改善,我们开发出一系列新型LC/MS采集方案和碎裂机制,包括母离子发现(PID)方法、非信息依赖型采集(DIA)、离子淌度(IM)辅助方法以及电子转移解离(ETD)。目前,IM主要应用于多种类型分析物的截面分析和结构分析1,可增强DIA采集的特异性,例如HDMSE。2本研究中展示了一种新型的高清晰数据采集 (HD-DDA)模式在蛋白质和肽鉴定中的应用优势,该模式将离子淌度法结合到四极杆飞行时间质谱仪中。HD-DDA采用一种高工作周期模式,有利于决策的制定,可实现高灵敏度和选择性的实验。实验 使用胰蛋白酶酶切大肠杆菌和海拉细胞的胞质内容物。将溶解产物注入nanoACQUITY UPLC系统中,该系统配有ACQUITY UPLC BEH 1.7 μm,15 cm × 75 μm色谱柱并连接SYNAPT G2-Si质谱仪。采用ProteinLynx Global SERVER和/或Mascot对数据进行处理和搜索3。结果与讨论HD-DDA的改进包括全面支持宽带增强4,这可使信号提高5至10倍,并增强了决策制定逻辑,还可在MS和MS/MS模式之间切换。宽带增强利用离子淌度分离单电荷态的产物离子,并结合推斥极同步以实现接近100%的工作周期,如图1所示。HD-DDA采集通常在非靶向模式下进行,可以由无限制的目标和/或排除列表进行补充。碰撞能量可以是阶梯式的、倾斜的或基于m/z和电荷态实时确定。数据可通过ProteinLynx Global SERVER或分别使用供应商中立的搜索算法和验证工具进行处理和搜索,例如Mascot和Scaffold5。图2中证实了宽带增强的优势。其中,大肠杆菌胰蛋白酶消化物通过纳升LC/MS/MC进行分析。数据采集分别采用常规DDA和HD-DDA。在这两种情况下,均选取了LC峰内相同时间的0.1秒MS/MS数据。在该实验中,将整个MS/MS谱图进行平均后发现,信号增强了5倍。在该实验中,每次调查扫描执行15次并行MS/MS实验。如图3所示,结果表明将DDA与HD-DDA对比时,MS/MS总离子流(TIC)的增加与MS/MS通道数呈函数关系。每次运行的平均增加量为420%,与图2中所示结果一致。插图是15次MS/MS通道的示例,证明了可从样品中存在的较低丰度的肽中轻松获取具有良好信噪比的MS/MS数据。图4中显示了采用HD-DDA对相同的大肠杆菌样品进行自下而上的LC/MS蛋白质组学实验可增加灵敏度。A图展示了肽序列匹配数量的增加。B图中的维恩相交图将蛋白质鉴定数量进行了对比。从中可观察到鉴定的肽数量(34.8%)和蛋白质数量(42.8%)均有显著增加。图5显示了一个更具挑战性的样品的搜索结果。此处汇总了海拉细胞胰蛋白酶消化物分析的PLGS搜索结果。总共有2200多种蛋白质被鉴定为超过95%的鉴定置信度阈值。在该实验中,谱图鉴定率为38%。结论 ■ HD-DDA宽带增强通常可使信号增强5至10倍 ■ 低丰度物质/肽的谱图数据质量得到显著提升 ■ MS/MS谱图获得正确匹配的比例大大增加 ■ HD-DDA数据的鉴定数量增加是灵敏度提高和谱图质量改善的直接结果参考文献 1. Giles K. Travelling wave ion mobility. Int J Ion Mobility Spectrom. 2013; 16(1):1-3.2. Rodriguez-Suarez E, Hughes C, Gethings L, Giles K, Wildgoose J, Stapels M, Fadgen K, Geromanos SJ, Vissers JPC, Elortza F, Langridge JI. An Ion Mobility Assisted Data Independent LC-MS Strategy for the Analysis of Complex Biological Samples. Current Anal Chem. 2013 April; 9(2):199-211.3. Perkins DN, Pappin DJ, Creasy DM, Cottrell JS. Probability-based protein identi?cation by searching sequence databases using mass spectrometry data. Electrophoresis. 1999 Dec; 20(18):3551-67.4. Wildgoose, et. al. A comparison of methods of improving the duty cycle on orthogonal TOF mass analyzers. ASMS 2005.4. Searle BC. Scaffold: a bioinformatic tool for validating MS/MS-based proteomic studies. Proteomics. 2010 Mar; 10(6):1265-9.下载清晰完整PDF文档请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?lid=134743944&cid=511436
标准
2013.12.24
沃特世(Waters)(NYSE:WAT)公司2013校园现场招聘会在华东理工大学、北京化工大学、广州中山大学圆满完成。同时也在沈阳药科大学、天津大学、北大药学院、南开大学、兰州大学、河南中医药大学、华东师范大学、上海中医药大学、南京中医药大学、中国药科大学、广东药学院、中医药大学、华南理工大学这13所重点院校的校园论坛上发布了招聘信息。此次的校园招聘是Waters中国的本土人才培育及储备计划中的一部分,招聘及培育方向包括售后服务工程师和应用工程师。 成立于1958年的沃特世, 是一家总部位于美国的上市公司,是标准普尔500指数股之一。沃特世公司凭籍着高性能分析设备、解决方案及其售后服务成为全世界的分析实验室解决方案的行业领导者。自进入中国以来,沃特世一直以培育本土人才为目标,经过多年的坚持及努力,沃特世公司在中国的总部及各地分公司,聘用本土人才已达98%。“聘用及培育本土人才是我们在华持续发展的重要策略之一。”沃特世大中华区总裁张亮裕先生说道:“持续的本土人才挖掘及培养,使我们在本土应用开发、客户服务方面始终保持领先。科学是人类的共同财产,沃特世一直致力于分离科学的研究与推动,也为人类科学发展培养优秀人才做出了贡献。”对于此次招聘会,校方负责人表示:“沃特世公司是引领行业发展的大型跨国公司,拥有行业领先的高端技术,曾与国内多所重点院校达成了校企合作,并且提供了相关的技术支持和培训。使得众多毕业生已走向了行业相关的岗位。我们非常希望能与沃特世这样的企业进行合作。也为其培养我校人才所做的贡献而表示感谢。”与此同时,本次招聘会的主角-报名参加的在校学生们对这个机会表现的非常踊跃。“我们希望进入沃特世公司,这是一个非常难得的机会,让我们在一个领先的平台上学以致用。”一位同学如是说。图从左到右依次为华东理工大学、北京化工大学、广州中山大学招聘会现场随着2013年初沃特世公司上海总部的搬迁,公司软硬件配备上进行了进一步的扩容,显示出沃特世对于中国市场和客户的高度重视,沃特世同时在在北京、广州、成都、香港、台北均设立分公司以服务区域客户。
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2013.12.19
Matthew A. Lauber, Stephan M. Koza, 和 Kenneth J. Fountain目的展示GlycoWorks工作流程的各方面优势,包括在方法验证和故障排除中适用于不同SPE型式的灵活性以及所采用的人IgG对照标准品的可行性。背景蛋白质的糖基化反应是十分有意义的翻译后修饰,可以调节蛋白质的结构和功能。生物治疗药物的糖基化作用无疑是必须进行彻底表征与监测的结构特征,尤其是在多聚糖图谱的变化与疗效和/或免疫原性的变化相关时。一套用于评价糖蛋白中N-糖的常规应用方法包括:通过PNGase F释放出多聚糖,采用具有荧光活性的2-氨基苯甲酰胺(2-AB)进行标记,然后采用亲水作用色谱法(HILIC)进行分离,最后由荧光检测器(FLR)进行检测(图1)。此工作流程中,比较复杂的是样品制备步骤。为使此过程更加直观,沃特世推出了GlycoWorks,将N-糖制备与分析所需的诸多耗材组合在一起。最值得注意的是,GlycoWorks实现了HILIC SPE的前/后标记纯化步骤,这对于确保方法的稳定性而言非常重要。GlycoWorks可帮助制备出N-糖用于后续分析,并为方法确认和故障排除提供不同的SPE型式(低/高通量)以及IgG对照标准品。以下内容展示了GlycoWorks工作流程的两个突出方面:适用于不同的SPE型式(单次用小柱和高通量板),以及可用于方法确认和故障排除的人IgG对照标准品。解决方案从GlycoWorks对照标准品(部件号186007033)即人IgG中,通过两种不同SPE型式以及各自使用维护手册中提供的方案,制备出2-AB标记的N-糖。图2A显示了对照标准品中多聚糖的HILIC-FLR色谱图,实验采用GlycoWorks HILIC μElution 96孔板(部件号186002780)、ACQUITY UPLC GST Amide (BEH Glycan)色谱柱以及用于仪器控制和数据解析的UNIFI?。借助葡萄糖单位(GU)值,与多聚糖性能测试标准品(部件号186006349)(与对照标准品一样基于人IgG) 进行对比,对此谱图中丰度最高的九种多聚糖进行了分配。使用GlycoWorks HILIC 1ml 小柱(单次用)(部件号186007080)所得色谱图如图2B所示。两色谱图显示:无论选择何种SPE型式,都可获得极为相似的结果。为验证此结果,对所分配的峰进行积分,用峰面积确定上述九种多聚糖的相对丰度(图2C)。此分析说明了使用两种不同型式SPE所得多聚糖的相对浓度并无显著区别。此研究中,我们还使用GlycoWorks对照标准品评估了样品量对多聚糖图谱的影响。图3以对比形式给出了采用HILIC μElution板制得的多聚糖(25 μg至2.5 μg IgG)的HILIC-FLR色谱图。2.5 μg样品的总回收率低于平均值,很可能是由少量的非特异性表面损失造成。尽管所处理样品量相差十倍,但鉴定出的相对丰度高度相似,相差值≤11%。其中,峰9(G2FS1)的偏差最大,处理25 μg 和2.5 μg IgG时,偏差值分别为8.5%和7.6%。总结GlycoWorks工作流程适用于两种不同的SPE型式:一种适合于高通量需求(96孔μElution提取板),另一种适用于低通量应用(1 cc小柱)。最重要的是,结果显示:无论选择何种GlycoWorks SPE型式,都可获得极为相似的多聚糖图谱。实验结果基于GlycoWorks工作流程分析Glycoworks对照标准品中的N-多聚糖。GlycoWorks试剂盒中包含此标准品,可用于确认分析结果的正确性,或对故障排除流程有潜在的帮助。下载完整清晰应用纪要请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?locale=122&lid=134741826&cid=511436
标准
2013.12.18
Dominic Helm1、Christopher J. Hughes2、James I. Langridge2、Keith Richardson2、Arkadiusz Grzyb2、Jason Wildgoose2 和 Bernhard Kuster11慕尼黑理工大学 (德国弗赖辛) 2沃特世公司 (英国曼彻斯特)应用优势 ■ 肽精确定量 ■ 更低的检测限和定量限 ■ 完全的产物离子覆盖范围,不会发生工作周期损失 ■ 简化方法开发简介近来,基于靶向LC/MS的方法被应用于定量蛋白组学中,以利于实现高准确度的多重相对和绝对定量研究。在研究中,三重四极杆和高分辨率质谱仪均有使用。使用这两种仪器不是完整蛋白质直接定量,而是监测蛋白被酶解后产生的一定量的一种或多种特征肽作为替代。通常,为了进行绝对定量需要在样品中加入特定含量的标准稳定同位素标记肽。基于三重四极杆的SRM/MRM检测的关键优势在于其灵敏度、采集速度和线性动态范围。但是,SRM/MRM肽定量的特异性常受到质疑,从而促进了高分辨率精确质量数仪器在肽定量中的应用。本文中证实了SYNAPT G2-Si系统在蛋白质和肽定量中的优势,采用一种全新的High Definition MRM (HD-MRM)模式,其中在四极杆飞行时间质谱仪中以MS/MS模式使用T-Wave离子淌度分离,可在一次采集中提供高灵敏度和选择性的定量检测,并且肽分子离子的所有产物离子均具有最大响应。下载完整清晰应用解决方案请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?cid=511436&lid=134744880&xcid=x5606&locale=zh_CN&ref=
标准
2013.12.18
Matthew A. Lauber、Stephan M. Koza 和 Kenneth J. Fountain,沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市)应用优势■GlycoWorks HILIC μElution提取板提供了一种高效的多聚糖纯化装置■采用优化的SPE条件定量并一致性地回收不同范围内的N-糖■优化的SPE条件具有出色的方法稳定性■可采用2-AB标记的多聚糖标准品确保样品制备和分析方法的性能关键词 N-糖,GlycoWorks,BEH glycan,多聚糖性能测试标准品,HILIC,HILIC SPE简介据估计,所有蛋白质中有一半以上都经过糖基化1,2。这一翻译后修饰涉及寡糖的连接,其在许多生物过程中发挥着重要作用3。治疗性抗体是一类受糖基化影响突出的蛋白质,此类抗体中多聚糖图谱的改变可能导致其效能和免疫原性出现明显降低。因此,治疗性抗体的多聚糖图谱在细胞系选育过程中通常被作为关键性质量属性(CQA)进行评估,并且在开发和批量放行过程中必须进行监测。一套用于评价糖蛋白中N-糖的高效分析平台包括:通过PNGase F释放出多聚糖,采用具有荧光活性的2-氨基苯甲酰胺(2-AB)进行标记,然后采用亲水作用色谱法(HILIC)进行分离,最后由荧光检测器(FLR)进行检测。下载完整清晰应用纪要请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?cid=511436&lid=134743959
标准
2013.12.10
Mike McCullagh1、Sara Stead1、Jonathan Williams1、Wouter de Keizer2和Aldert Bergwerff21沃特世公司(英国曼彻斯特) 2RnAssays BV(荷兰乌得勒支)应用优势利用T-wave离子淌度产生的正交分离有助于复杂基质样品的分析。■正交淌度分离技术能采集并生成复杂样品中各个组分的MS母离子和MSE子离子谱图。■对于观察到的促进剂,可进行再次确认,并将其作为额外的鉴定点。■使用HDMSE作为分析手段,可以对实验室间或实验室内研究的差异性进行更深入的了解。关键词离子淌度,促进剂,精确质量数,单一组分碎片谱图简介氟喹诺酮是一类抗菌剂,可施用于牲畜,以达到多种目的,包括:(a)预防并控制感染;(b)促进生长。出于对抗性微生物在人类中传播的顾虑,美国食品药品监督管理局(FDA)于2005年9月颁布了在牲畜生产中使用恩诺沙星和环丙沙星的禁令1,2。2006年起,欧盟(EU)禁止在畜牧业中使用抗生素生长促进剂(AGP),同年,最后四种抗生素也被禁止作为生长促进剂3。虽然氟喹诺酮是一类化学性质多样的两性化合物,但这些化合物都具有4-喹诺酮环基本结构。为了增强其抗菌能力和药代动力学特性,已进行了多种改性尝试,包括在喹诺酮环(苯并吡喃酮核)四周引入不同的官能团。氟喹诺酮在其双环结构的6位上带有一个氟原子(图1),表现出广谱抗菌活性。目前,规定了八种(氟)-喹诺酮类化合物的欧盟最大残留量(MRL),根据种类和组织类型的不同,限量范围在10至1900μgkg-1之间4。下载完整清晰应用纪要请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?cid=511436&lid=134747223
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2013.12.10
Paula Hong, Michael Jones, and Patricia McConville目的相比于反相色谱法,本方法最大程度上简化了样品制备、降低了溶剂使用量并实现正交分离,是快速且灵敏的香草提取物筛选和鉴定分析方法。 背景为降低香草提取的成本,一些制造商使用合成或人工香料替代更为昂贵的纯香草。在许多情况下,这些便宜的替代品包括合成成分,例如乙基香草醛。但某些提取物含有潜在危害性掺杂物,其中包括香豆素,即零陵香豆散发出的香味。这种特殊的掺杂物是一种可疑致癌物,可以与血液稀释药物发生反应。在美国,香豆素已被禁止用做食品成分,美国食品药品监督管理局(2009)针对近年来其在香草提取物中的滥用发出了消费者警告1。现在已开发出大量的反相液相色谱(RPLC)方法用于分析,以确定香草提取物中的真实成分2-4。这些方法能够筛选出合成和人工香料,以及香草醛的次生成分,后者是香草豆荚正宗提取物的标志物。这些方法可实现高通量分析4,正交分离可依据不同的选择性带来便利。下载完整清晰应用纪要请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?locale=zh_CN&lid=134741071&cid=511436
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2013.12.02
首个被沃特世质谱研究和教育创新中心计划认可的机构 马萨诸塞州米尔福德市,2013年11月12日/美通社/—近期,在马里兰大学药学院(UMSOP)举办了一次以探索与教育为主题的典礼和研讨会。UMSOP是一家运用质谱进行癌症、糖尿病和传染性疾病新药开发和药物改进的跨学科研究的科研机构,并因此而受到沃特世公司的赞誉。在一次校园典礼上,沃特世公司正式宣布由Isaac E. Emerson药物科学系主任David Goodlett博士带领的UMSOP药物科学系核心质谱实验室成为首家获得沃特世创新中心计划荣誉的机构。 (Logo:http://photos.prnewswire.com/prnh/20110707/NE31586LOGO) 作为沃特世创新中心计划的一部分,药学院将继续优先获得新技术和新机遇,来影响下一代研究设备的发展;享有与沃特世合作的机会并优先获得应用方面的支持和资金援助。 巴尔的摩市的马里兰大学校长Jay A. Perman博士向观众宣称“今天的典礼是对本校所取得的成就的证明。在整个大西洋中部地区,我们的新型质谱是同类设备中最大、配置最优的产品,并且拥有经验最丰富的操作人员,它可以让我们缩短将研究成果应用于对患者有益的新的诊断、治疗和预防过程的时间。” 美国地区运营副总裁Mark Groudas代表沃特世公司说道:“沃特世创新中心计划选择了马兰里大学药学院,这表示沃特世正式承认该药学院所作出的贡献和彼此间的长期合作关系。通过相互继续合作以及彼此投入的努力,我们就可以完成伟大的目标。” 典礼期间,药学院和沃特世共同举办了一场为期一天的题为“通过质谱促进生物标志物发现和治疗方案开发”的科学研讨会。研讨会由同为药学院质谱实验室主任的Goodlett所做的专题讲座开场,然后由药物科学系副教授和质谱实验室兼任主任Maureen Kane博士进行专题讲座。参加研讨会的其他研究人员包括:杜克大学副教授研究员兼杜克大学蛋白质组学核心实验室主任Arthur Moseley博士,加利福尼亚大学洛杉矶分校化学与生物化学系教授Joseph Loo博士,马里兰大学药学院药物科学系副教授Patrick Wintrode博士,以及阿姆斯特丹FOM AMOLF研究所教授Ron Heeren博士。 马里兰大学质谱实验室 药学院的质谱实验室之所以汇集于此,主要是源于FCP FAAPS Natalie D. Eddington博士的愿景。 “如果缺少足够的质谱设备,学校众多学院的研究人员将不得不求助位于巴尔的摩地区及其它城市的实验室,即使可以实现,这也将为我们的教师、学生和研究人员充分利用跨学科团队和培训机会带来很大的困难,”Eddington告诉观众。“我们对质谱实验室的愿景就是向药学院及周围研究团队的研究人员提供机会,协助他们进行各种精密实验。我们希望这种与沃特世史无前例的合作伙伴关系将会促进新技术的发展,进一步提高质谱分析能力并协助解决生物医学问题。” 如今,UMSOP的质谱实验室共计拥有15台质谱仪,全部供从事蛋白质组学、结构生物学和药物发现、设计和开发的各领域的研究人员使用。 关于马里兰大学药学院 马里兰大学药学院是全美历史第四悠久的药学院,它引领着马里兰州及其周边地区的药学教育、科学探索、患者护理以及社区参与。凭借其招收的近700名药学博士和研究生,这所排名顶尖的学校在开展药物分布机制、成本影响研究、基础药物研究和开发,以及疾病管理方面进行着最前沿的研究,并致力于广泛的专业实践活动,与超过200家的社区药房、医院、公共生活设施及其它机构建立合作关系,为所在州及全国人民和从业人员提供服务。 关于沃特世创新中心计划 沃特世创新中心计划认可并支持科研人员在健康与生命科学研究、食品安全、环境保护、运动医学以及其它许多领域中为取得突破性进展所作出的努力。 目前已加入沃特世创新中心计划的研究人员和研究中心包括:新加坡国立大学Ganesh Anand教授,印第安纳州印第安纳大学布卢明顿分校David Clemmer教授,伦敦国王学院David Cowan教授,明尼苏达大学Joseph Dalluge博士,巴西坎皮纳斯州立大学Marcos Eberlin教授,北爱尔兰贝尔法斯特女王大学Chris Elliott教授,马萨诸塞州波士顿东北大学John Engen教授,华盛顿特区乔治城大学伦巴第综合癌症中心Albert J. Fornace, Jr.教授,美国国家癌症研究所Frank Gonzalez博士,加利福尼亚大学戴维斯分校Julie Leary教授,印度班加罗尔圣约翰研究所Amit Kumar Mandal教授,北卡罗来纳州达勒姆杜克大学Arthur Moseley教授,伦敦帝国学院Jeremy Nicholson教授,明尼苏达大学Devin Peterson博士,亚利桑那州凤凰城翻译基因组学研究院Konstantinos Petritis博士,佛罗里达州立大学未来燃料研究所Ryan Rogers博士,爱尔兰国家生物处理与培训研究所Pauline Rudd教授,北德克萨斯州大学Vladimir Shulaev教授,英国考文垂华威大学James Scrivens教授,韦恩州立大学Sarah Trimpin教授,瑞典厄勒布鲁市厄勒布鲁大学Bert van Bavel教授,以及法国奥尔良市奥尔良大学Caroline West和Eric Lesselier。
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2013.11.26
Janet Hammond 和 Emmanuelle Claude 目的 展示集成OpenLynx™ Open Access Application Manager的MassLynx® 4.1软件与ACQUITY UPLC®系统和ACQUITY® QDa™检测器相结合为药物化学实验室所带来的优势。 背景 制药行业对于改进和加速药物开发过程的需求与日俱增,这促使他们在药物发现和开发过程的各个阶段中需要引入新的工作方法,以确保质量、提升效率和生产率。 自从1995年以来,药物化学分析人员每年通过液相色谱/质谱(LC/MS)能够分析超过100,000个样品,从而监控合成反应以及研究新化学成分的结构和纯度。MassLynx软件的OpenLynx Open Access是实现以上高强度工作量的一项技术,它为化学分析人员提供了全自动的工作流程,引导他们完成样品提交、方法选择和报告选项。 在协同式UPLC系统中通过Open Access软件结合UV和质谱检测,药物化学分析人员可实现快速色谱分离以及对化学合成反应产物的确证。 ACQUITY QDa检测器是一款设计用于与分离系统协同工作的质谱检测器,其质谱检测能力可满足分析化学人员进行常规色谱分析的需求。如同LC分析一样,质谱信息可无缝结合到现有工作流程中,对峰进行确证,从而实现更为完整的分离鉴定。通过Open Access环境将ACQUITY UPLC系统与ACQUITY UPLC PDA和ACQUITY QDa检测器相结合,药物化学分析人员可以在合成反应结束后,对反应液进行成分确证和纯度分析。 解决方案 在本示例中,我们演示了使用Open Access工具并结合UV和质谱检测对一种典型合成反应混合物的UPLC分析。 ■药物化学分析人员登录并输入反应产物的分子量(在此例中为310 Da,图1),在指定样品瓶位置放置反应混合物。 ■报告将以电子邮件的形式直接发送给药物化学分析人员(图2)。重要信息用绿色突出显示:ACQUITY QDa检测器确认所需产物(310 Da)已成功合成。 ■使用ACQUITY UPLC PDA检测器测定纯度百分比。 图1. 药物化学分析人员的样品提交工作流程。 图2. 典型的简化报告示例,显示出药物化学分析人员合成了正确的反应产物和纯度百分比。 Open Access环境的使用管理非常简单: ■在OpenLynx Open Access中,添加User Management对话框以简化管理员操作(参见图3A和3B)。管理员现在可以定义用户组并将用户分配到这些组中。 ■如图3C所示,每组中的选项包括电子邮件地址、样品板布局显示、单个样品文件注册、OALogin报告文件打印、样品ID格式、条形码支持、方法顺序和可用的一站式参数,以及实现每个样品采用多种方法和重命名报告文件的功能。 图3. Open Access OpenLynx软件中的User Management对话框。 总结 通过在MassLynx OpenLynx Open Access软件平台上将ACQUITY UPLC系统与ACQUITY UPLC PDA和ACQUITY QDa检测器相结合,简化了药物化学分析人员的工作流程,提供了快速色谱分离和确证化学合成反应产物的完整方案。 下载链接:http://www.waters.com/waters/library.htm?lid=134766904&cid=511436
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2013.11.25
用于快速、同时分离九种脂溶性维生素的单次进样UPC2方法 Rui Chen、Jinchuan Yang和John McCauley 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 同时分离九种脂溶性维生素及胡萝卜素,可避免使用多种HPLC方法,并且可减少在对膳食补充剂和营养强化食品中的脂溶性维生素进行定性与定量分析时所需要进行的实验步骤。快速分离疏水性维生素及胡萝卜素可显著提升样品通量以及减少实验花费,因而可满足日益增加的法规依从性需求,以监测大量的分析工作。 沃特世提供的解决方案 配备光电二极管阵列(PDA)检测器的ACQUITY UPC2™系统 Empower® 3软件 ACQUITY UPLC® HSS C18色谱柱 关键词 维生素、胡萝卜素、脂溶性、维生素A乙酸盐、维生素A棕榈酸盐、维生素D2、α-生育酚、维生素E乙酸盐、维生素K1、维生素K2、番茄红素、β-胡萝卜素、合相色谱分离术、UPC2 引言 脂溶性维生素(FSV)包括维生素A、D、E、K及类胡萝卜素(例如β-胡萝卜素)。脂溶性维生素参与许多与重要生理功能相关的复杂代谢反应,例如视力(维生素A)、钙吸收(维生素D)、细胞膜的抗氧化(维生素E)、及血液凝固(维生素K)。1β-胡萝卜素是维生素A的前体,且在人体内具有100%维生素A活性。番茄红素不是人体的必需营养素,但它的抗氧化性能使它广受欢迎,越来越多地与其他成分一起被添加到某些膳食补充剂中。几种脂溶性维生素的化学结构如图1所示。 维生素及营养补充剂是一个价值几十亿的市场。预计在未来的五到十年,这一市场仍将继续增长。2这是由于全世界的消费者越来越追求更好以及更健康的生活方式,以及越来越注重健康以及饮食习惯。然而,人们也越来越关注从营养补充剂以及营养强化食品中所摄取的脂溶性维生素的安全性问题,特别是维生素A及D,若过量食用,也会带来严重的健康风险。3由于在许多国家,许多针对营养强化食品及膳食补充剂中所添加微量元素的合规性的法律正在拟定或制定中,因此,市场上必然对能够快速、准确地分析不同产品中的脂溶性维生素含量的分析方法有更高的需求。 目前,在进行FSV分离时,最常使用的是液相色谱(LC)方法,反向(RP)与正向(NP)方法均有。1,3-5虽然有AOAC法可用于对食品及营养补充剂当中的各种脂溶性维生素分别进行定性与定量分析,但却缺少一种可对维生素预混物中的脂溶性维生素以及类胡萝卜素同时进行分析的方法。3 由于超高效合相色谱(UPC2™)分离速度快、经济耐用,因此可考虑将其用于对含有多种脂溶性维生素的药物制剂进行快速分析。6在本应用纪要中,我们阐述了一种单次进样方法,它可在四分钟时间内同时分离九种脂溶性维生素。优化后的方法在保留时间以及峰面积方面具有良好的重现性,且可用于进行高通量定量分析。 实验 样品描述 七种脂溶性维生素:视黄醇乙酸盐(维生素A乙酸盐)、视黄醇棕榈酸盐(维生素A棕榈酸盐)、α-生育酚(维生素E)、α-生育酚乙酸盐(维生素E乙酸盐)、麦角骨化醇(维生素D2)、维生素K1、维生素K2 (MK-4);及两种胡萝卜素:番茄红素及β-胡萝卜素均购自西格玛公司(Sigma Aldrich),并且未经处理直接使用。将所有样品以约0.1 mg/mL的溶解到甲基第三丁基醚(MTBE)中,并转移到进样瓶中,准备进行分析。 UPC2条件 系统: 配备PDA检测器的ACQUITY UPC2 流速: 1 mL/min 流动相A:CO2 流动相B:乙腈 色谱柱: ACQUITY UPLC HSS C18 3.0 x 100 mm,1.8 µm 背压: 2500 psi 柱度: 30 °C 样品稀释剂:MTBE 进样量: 1µL 样品瓶: 沃特世玻璃瓶12 x 32 mm螺纹颈瓶,2 mL PDA扫描范围:210 - 600 nm 数据管理: Empower 3软件 梯度: 结果与讨论 已有大量文献阐述了利用NPLC及RPLC分离脂溶性维生素以及类胡萝卜素的方法。1,3-5由于在分析脂溶性维生素时,通常需要使用低极性有机溶剂来溶解样本,因此NPLC由于其与有机溶剂的相容性而具有一定优势,可允许直接进样脂溶性维生素或脂溶性维生素萃取物,而不需要进行蒸发步骤。RPLC法的色谱分离效率虽然高于NPLC,7但由于以下几点原因,阻碍了其在进行FSV分析上的应用:1)分析物在流动相中溶解度较低,2)对FSV的保留力强,导致运行时间过长。最终,人们选择使用半水性流动相(甲醇或乙腈与水的混合物)或非水性流动相;后者也称为非水性反相(NARP) LC。7-8 UPC2,虽然常作为正相分离技术,但也同样适用于分离极性较低的分析物。UPC2的主流动相CO2不仅是低极性分析物的良好溶剂(与己烷的极性相近),也可与在样品分离过程中用于溶解这些分析物的有机溶剂(例如本研究中所使用的MTBE)相同。此外,CO2的低极性也可促进分析物与流动相之间的非极性相互作用,从而缩短保留时间和运行时间。 在进行方法开发时,共选用了六种色谱柱:ACQUITY UPLC HSS T3、ACQUITY UPLC HSS C18、ACQUITY UPC2 HSS SB、ACQUITY UPC2 CSH氟苯基、ACQUITY UPC2 2-乙基吡啶、及ACQUITY UPC2 BEH, 以及四种溶剂,包括:异丙醇(IPA)、乙腈(ACN)、乙醇、及IPA/ACN的1:1混合液。只有使用ACQUITY UPLC HSS C18色谱柱以及ACN的方法才可将非常相似的维生素K1以及K2分离。采用较低的柱温,30 °C,原因如下:首先,为了提高K1与K2的选择性;其次,为了最大限度地减少胡萝卜素在色谱柱上的降解,因为胡萝卜素非常容易氧化。 经方法优化后所得的每种成分的色谱图以及UV谱分别如图2及3所示。大体上,九种脂溶性维生素的洗脱顺序与它们的LogP值排序相同。利用低乙腈含量(2%)的流动相就可将七种维生素全部洗脱出来,而两种胡萝卜素则需要使用含20%乙腈的流动相才可洗脱出来。这一现象,可由分析物的结构以及它们与流动相/固定相之间的相互作用来解释。在九种分析物中,均存在CO2与脂溶性维生素亲脂性基团之间的非极性相互作用,而七种维生素中的氧原子(呈羰基或羧基的形式)使得分析物与流动相中的乙腈之间产生极性相互作用,这样就减少了溶离时间。而两种胡萝卜素分子不含有杂原子,且分子中的非极性十八烷基碳链更容易与固定相形成较强的相互作用,因而其溶离时间更长。 为了测试本方法的重现性,将九种脂溶性维生素分别进行六次进样,如图4所示。重现性统计数据已概括在表1中。保留时间的相对标准差(RSDs)小于0.25%。在峰面积方面,九种脂溶性维生素中,有七种的RSDs小于1%。第一个峰(维生素A乙酸盐)的RSD稍大,这是因为随着进样次数的增加,基线有所上升。不管怎样,重现性都应满足质量监测的要求,其通常要求某一测试方法的重现性公差为±20%。3 结论 在本应用纪要中,我们阐述了利用单次进样UPC2法,在四分钟内,将九种脂溶性维生素同时分离的方法。经过六次重复进样得知,九种物质的保留时间的RSD均小于0.25%,峰面积的RSD均小于3%(在大多数情况下2方法,只需进行一次进样就可将混合物中的各种脂溶性维生素分析完毕,而不需要像LC法那样进行多次操作,从而极大地减少了实验室的工作量。UPC2方法所需时间是传统分析方法的四分之一至十分之一。由于UPC2分析法分析速度较快,因此适于食品企业/营养补充剂企业等分析量通常较大的法规依从性监测。 参考文献 1. Santos J, Mendiola JA, Oliveira MBPP, Ibanez E, Herrero M. Sequential determination of fat- and water-soluble vitamins in green leafy vegetables during storage. J. Chromatogr. A. 2012; 1261:179-188. 2. http://www.prweb.com/releases/2011/10/prweb8906640.htm 3. Blake CJ. Status of Methodology for the Determination of Fat-Soluble Vitamins in Foods, Dietary Supplements, and Vitamin Premixes, J. AOAC Inter. 2007; 90(4):897-910. 4. Gomis DB, Fernandez MP, Gutierrez Alvarez MD. Simultaneous determination of fat-soluble vitamins and provitamins in milk by microcolumn liquid chromatography, J. Chromatogr. A. 2000; 891:109-114. 5. Salo-Vaananen P, Ollilainen V, Mattila P, Lehikoinen K, Salmela-Molsa E, Piironen V. Simultaneous HPLC analysis of fat-soluble vitamins in selected animal products after small-scale extraction, Food Chem. 2000;71:535-543. 6. Aubin A. Analysis of fat-soluble vitamin capsules using UltraPerformance Convergence Chromatography. Waters Application Note 720004394en. 2012 June. 7. Nelis HJCF, De Roose J, Vandenbaviere J, De Leenheer AP. Non-aqueous reversed-phase liquid chromatography and fluorimetry compared for determination of retinol in serum. Clin. Chem. 1983; 29(7):1431-1434. 8. Parris NA. Non-aqueous reversed phase liquid chromatography: a neglected approach to the analysis of low-polarity samples. J Chromatogr. 1978; 157:161-170.
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2013.11.25
Claude Mallet 目的 利用超灵敏UPLC®-MS/MS对肌肉组织中的低浓度保泰松进行快速检测和定量。 背景 近来调查结果显示,在欧洲的牛肉制品中发现未经申报的马肉,这一事件的发生迫切要求相关企业和监管机构对肉类和肉制品中存在的马肉组织和残留的非甾体抗炎药(NSAID)保泰松(PBZ)进行分析检测。保泰松是一种兽药,在一些欧盟成员国,这种药用于为非食品用途的动物(狗和马)缓解疼痛和减轻炎症。但是,这种药物被规定不得用于治疗参与人类食物链的动物。因此,任何动物源性食品中存在此物质通常是由于非法使用经过治疗的马尸体所导致的。 采用超灵敏的UPLC-MS/MS方法以确保检测出低浓度的受污染产品。 解决方案 本研究引用了一种已报道的从肌肉组织中提取保泰松的方法1,并对该方法做了较小调整。简单来讲,即取肉匀浆2 g,加入乙腈10 mL,振摇2 min。离心后,收集上清液并用水进行稀释。使用沃特世(Waters®) Oasis® HLB 60 mg,将第一步所得的稀释提取物进行固相萃取(SPE)。用甲醇洗脱保泰松,然后用含10 mM甲酸铵(pH 3.2)的水进行稀释。在进行固相提取及上样之前,对提取物分别进行稀释,这样,无需进行蒸发和复溶操作。取100 μL稀释上样液,注入LC-MS/MS系统进行分析。 选择并优化了两个多重反应监测(MRM)离子对(定量和确证)对保泰松进行分析。所得结果已添加到QuanpediaTM数据库以便将来使用。在本应用中,色谱分析采用2.1×100 mm HSS T3分析型色谱柱(1.7μm),以甲醇/水(10mM甲酸铵,pH 3.2)进行梯度洗脱,梯度时间为5 min。图1显示了200 ng/kg保泰松加标提取物的MRM色谱图。如图1所示,保泰松和内标(100 ng/kg)的信噪比高,峰形良好。校正回收率后的工作标准曲线如图2所示,制备基质加标样品两份,并进行提取,建立六点校准曲线。根据线性回归,计算校准曲线(1/x2加权),以保泰松-二苯基13C12作为内标。由结果数据可知,可轻松达到最低校准点(10 ng/kg),比欧盟建议的浓度(RC)5μg/kg低500倍。在整个检测浓度范围内(10-500ng/kg),线性良好(R2 0.997)。在处理肉制品的过程中,马肉可能以其它途径掺入其中,保泰松浓度水平可能远低于EU RC,因此检测灵敏度是一个重要的考虑因素。 总结 ACQUITY UPLC®I-Class系统与Xevo®TQ-S联用,并结合Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱可对肉中浓度低至10 ng/ kg的保泰松进行分析。即使对于浓度可能很低的经混合和经处理的肉制品,这种超灵敏的UPLC-MS/MS技术仍能确保成功检出受污染产品。 参考文献 1. N. Van Hoof, K. De Wasch, S. Poelmans, H. Noppe and H. De Brabander Rapid Commun. Mass Spectrom. 2004; 18: 2823–2829
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2013.11.19
摘要 建立了超高效液相色谱-电喷雾-质谱/质谱(UPLC-ESI-MS/MS) 直接测定黄酒和葡萄酒中氨基甲酸乙酯含量的分析方法。样品稀释后可直接采用Waters® ACQUITY UPLC® BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)分离,ACQUITY UPLC-ESI-MS/MS检测。方法检出限为1.7μg/L。 关键词 超高效液相色谱-电喷雾串联四级杆质谱;氨基甲酸乙酯;黄酒;葡萄酒 前言 氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)是发酵食品在发酵和贮存过程中天然产生的化学污染物[1]。早在1943年Nettleship就用实验证明了EC具有致癌作用[2]。2007年,国际癌症研究机构再次对EC进行评估,认为经食物(不包括酒精饮品)摄入的EC量,对健康的影响不大,但经食物和饮料酒摄入的EC总量,则可能对健康造成潜在危险[3]。对饮料酒中EC含量的准确定量是监管和控制其含量的前提,为此,国际食品法典委员会(CAC)、国际葡萄与葡萄酒组织(OIV)、美国官方分析化学家协会(AOAC)、欧盟及韩国等许多国际组织和国家都推荐了酒中EC检测的标准方法。虽然我国有出口酒类氨基甲酸乙酯的测定方法[4],但方法繁琐、费时,难以满足目前的快速准确分析检测需要[5],探索快速、准确的分析方法就显得尤为重要。 目前,国内外文献报道EC的检测方法较多,主要有薄层色谱法[6]、气相色谱法[7]、高效液相色谱-荧光检测器法(HPLC-FLD)[8]、气相色谱-质谱法[1, 9]、气相色谱-质谱/质谱法[10]等,但这些方法有的灵敏度较低或易受干扰,并普遍需要对样品进行复杂的前处理且分析时间长。采用直接进样方式检测黄酒和葡萄酒中的EC,简单快速,且不使用有机溶剂,可弥补传统方法的欠缺。样品经简单稀释、过滤后直接进UPLC-MS/MS测定EC含量的方法,查阅大量文献后,尚未见报道。用蒸馏水对样品进行稀释,UPLC-ESI-MS/MS直接进样测定黄酒和葡萄酒中EC的方法。该方法灵敏度高、简便、快速和准确,适合大批量黄酒和葡萄酒样品中EC的检测及确证分析。 下载完整应用纪要请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?lid=134761992&locale=122&nid=72657705&nrid=1546640&nci=47626363&sa=CRM&nLink=Client%20FD%20EV%20Wi&xcid=x6077
标准
2013.11.13
Jane Cooper 沃特世公司(英国曼彻斯特) 应用优势 本应用纪要介绍了使用沃特世(Waters®) ACQUITY UPC2™系统配备PDA检测器以低成本且有效的方式对液晶中间体化合物进行杂质分析。与标准方法相比,此方法具有以下优点: ■有毒溶剂的使用量减少超过110倍。 ■样品通量增加超过13倍。 沃特世解决方案 ACQUITY UPC2系统 ACQUITY UPC2 PDA检测器 ACQUITY UPC2 CSH™氟苯基色谱柱 Empower® 3软件 关键词 液晶,合相色谱,UPC2®,液晶中间体,超临界流体色谱,SFC 简介 液晶兼有液体和固体的物理和光学性质。其流动性能类似液体,但同时具有一些固体的光学性质,例如双折射性。它还可以按照预期对电流产生反应,从而控制光的通过。由于这些性质,液晶可应用于多种电子显示相关商品,例如手表、计算器、手机、桌面显示器和电视机。液晶中间体化合物是制备液晶的基础材料。为了获得所需的材料性质,典型的液晶混合物包含10到20种中间体化合物。所用液晶中间体化合物的纯度是确保电子显示设备实现最佳光学质量、性能和使用寿命的关键因素。 现在已有多种分析方法可用于对液晶中间体化合物进行定性,包括:示差扫描量热法1,2、傅里叶变换红外光谱法3、拉曼光谱法3、紫外吸收分光光度法1和光学显微镜法2。 对于鉴定中的杂质分析,通常会采用色谱技术分析液晶中间体化合物,例如HPLC结合UV检测器4、HPLC结合MS检测器5以及GC结合MS检测器6 。但是,这些技术有一定的限制,包括:化合物可能具有热不稳定性和/或挥发性;样品量可能有限;样品溶解性可能与技术中所需的溶剂不互溶,从而需要额外的样品制备步骤;分析时间长,且选择性和灵敏度不足。 合相色谱(CC)是一种正相分离技术,使用二氧化碳作为主要流动相,并同时使用助溶剂,例如甲醇。沃特世 UltraPerformance Convergence Chromatography™ (UPC2)基于CC的潜力,其中采用了稳定可靠的沃特世UPLC®技术。许多液晶中间体化合物在高温下并不十分稳定,且挥发性低,UV光谱相似。因此,利用UPC2的分离能力并使用CO2作为流动相是HPLC和GC分析的一种理想替代方法。 实验 UPC2条件 系统: ACQUITY UPC2 运行时间: 5.00 min 色谱柱: ACQUITY UPC2 CSH 氟苯基,1.7 µm,3.0 x 100 mm 柱温: 50 °C CCM 背压: 2000 psi 样品室温度: 20 °C 流动相 A: CO2 流动相 B: 甲醇(2%甲酸+15 mM醋酸铵) 流速: 2.0 mL/min 进样体积: 1 µL 样品瓶: 沃特世琥珀色螺纹颈口玻璃瓶 12 x 32 mm, 2 mL PDA 条件 UV 检测器: ACQUITY UPC2 PDA 范围: 210 to 450 nm 分辨率: 1.2 nm 采样速率: 20 点/秒 过滤时间常数:慢 (0.2 s) 本应用纪要介绍了利用UPC2结合光电二极管阵列(PDA)检测器对液晶中间体进行杂质分析,结果表明该方法具有良好的稳定性、选择性和灵敏度,运行时间短,并且降低了成本和非毒性溶剂处理费用。 样品描述 液晶中间体化合物购自西格玛奥德里奇公司(其结构示于表2中)。每种储备液的浓度均为5mg/mL,以9:1的庚烷/乙醇或甲醇溶解。使用9:1的庚烷/异丙醇将储备液进行一系列的稀释,制成混合校准标准品。 仪器控制、数据采集和结果处理 利用Empower 3软件控制ACQUITY UPC2系统和ACQUITY UPC2 PDA检测器,并进行数据采集。 结果与讨论 优化UPC2条件,以分析所选的液晶中间体化合物。其中通过分析单个组分标准品获得保留时间和UV最大吸收波长(表3)。使用沃特世的ACQUITY UPC2系统和ACQUITY UPC2 PDA检测器对五种液晶中间体化合物和一种内标物进行分析。优化最佳UPC2和PDA条件,使所有化合物均在五分钟内被洗脱。对于液晶中间体化合物的分析,据报道在用HPLC分析时,运行时间介于65至110分钟之间4,5。 制备浓度在0.001至0.25 mg/mL间的混合校准标准品,并分析所有相关化合物。图1显示了由Empower 3软件生成的4-氰基苯甲酸校准曲线结果。 图2显示了0.1 mg/mL混合校准标准品中每种液晶中间体化合物的UV色谱图,相关的UV光谱图示于图3中。 杂质分析 液晶中间体化合物的纯度是使电子设备实现最佳光学质量、性能和使用寿命的关键因素。因此,检测杂质的能力对于确保液晶的最佳性能十分关键。杂质的出现可能有很多原因,包括污染物,例如副产物或降解产物。 UPC2可用于液晶中间体化合物的杂质分析。一般而言,杂质超过0.1%便可认为是显著存在,并可能会降低光学质量、性能和产品寿命。为了证实这一点,在一种液晶中间体化合物(4-丁基苯甲酸)中加入0.1%的三种其它液晶中间体化合物,并用建立的UPC2条件和PDA检测进行分析。图4中显示了所得的UV色谱图,结果证明利用该方法对相关液晶中间体化合物分析可鉴定出0.1%的杂质。 结论 通过使用配备PDA检测器的ACQUITY UPC2,建立了一种成本效益高且有效的杂质分析方法,用于分析液晶中间体化合物。 许多液晶中间体化合物在高温下并不十分稳定,且挥发性低,而且UV光谱相似。因此,利用UPC2进行分离并使用CO2作为流动相是HPLC和GC分析的一种理想替代方法。 由于高效率的ACQUITY UPC2系统是基于合相色谱的潜力而开发的,并采用了稳定可靠的UPLC技术,可作为一种正交技术以确保液晶中间体化合物的全面表征。在分析液晶中间体化合物时,与HPLC分析相比,本文所述的方法具有众多商业优势和分析优势,样品通量可增加13倍以上,有毒溶剂的用量可减少110倍以上。 参考文献 1. Özgan S, Okumus M. Thermal and Spectrophotometric Analysis of Liquid Crystal 8CB/*OCB Mixtures. Braz. J. Phys. 2011; 41: 118-122. 2. Delica S, Estonactoc M, Micaller M, et al. Phase Diagram of Binary Mixture E7: TM74A Liquid Crystals. Science Diliman. 1999; 11: 22-24. 3. Fathima Beegum M, Usha Kurari L, Harikumar B. Vibrational Spectroscopic Studies of 4-Cyanobenzoic Acid. Rasayan J. Chem. 2008; 1(2): 258-262. 4. Brás A, Henriques S, Casimiro T, et al. Characterization of a Nematic Mixture by Reversed-Phase HPLC and UV Spectroscopy: Application to Phase Behavior Studies in Liquid Crystal-CO Systems. electronic-Liquid Crystal Communications. March 28, 2005. [cited 2013 May 2020]. Available from: http://www.e-lc.org/tmp/M.___Dion%EDsio_2005_03_21_07_41_31.pdf 5. Martin T, Hass W. Analysis of Liquid Crystal Mixtures. Analytical Chemistry. 1981; 53(4): 593-602. 6. Laclercq P, van den Bogaert H. Mass Spectra of Liquid Crystals. Organic Mass Spectrometry. 1991; 26: 276-278. 下载清晰应用纪要请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?cid=511436&lid=134745520&xcid=x5606&ref=
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2013.11.12
2013年11月14日 提升实验室的质量管理体系——沃特世质量控制标准品QCRM 启用系统之前使用沃特世QCRM进行色谱系统的基准性能测试,在进行重要分析之前或变更任何硬件、色谱柱及流动相之后,采用QCRM进行基准测试,并与基本指标进行比较可降低仪器的故障率及结果的出错率,提升实验室的质量管理体系统。 立即报名 2013年11月27日 多肽及蛋白质的生物定量分析解决方案 沃特世公司在肽类物质/蛋白质生物分析方面一直处于业界领先地位,针对肽类物质/蛋白质生物分析有完整的解决方案,从无须挥干便具有浓缩作用的样品前处理技术,高效的液相分离(UPLC)再到超高灵敏度的质谱(Xevo TQ-S),为肽类物质/蛋白质生物分析提供最先进的整体解决方案。 立即报名
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2013.11.07
UPC2/MS鉴定复杂低聚物材料 Baiba Cabovska和Michael O’Leary 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 ■与GC相比,ACQUITY UPC2™可以分析具有更高分子量的热不稳定聚合物。 ■ACQUITY UPC2能够分析极性和非极性聚合物。 ■超临界流体流动相和亚2µm颗粒度固定相能缩短大分子量化合物的保留时间。 ■与正相LC相比,ACQUITY UPC2有毒溶剂使用量更少。 ■MS能够为UV数据提供补充信息,可用于单个低聚物的鉴定、杂质测定和配方分析。 沃特世解决方案 ACQUITY UPC2,配有PDA和ACQUITY® SQD ACQUITY UPLC® HSS色谱柱 ACQUITY UPC2 BEH色谱柱 Empower® 3 CDS 关键词 聚合物,UPC2,超临界流体,SFC,聚苯乙烯,PMMA,合相色谱,低聚物 简介 最常见的聚合物分析是使用凝胶渗透色谱(GPC)来测定平均分子量和多分散性。然而,当需要对各种低聚物进行高分离度分离以评估材料性能或了解聚合物结构时,将用到其它分析技术1-4。低分子量聚合物可以通过液相色谱(LC)、气相色谱(GC)和超临界流体色谱(SFC)进行分析。分离技术的选择通常根据溶解度、平均分子量和聚合物热稳定性而定。沃特世(Waters®)超高效合相色谱(UltraPerformance Convergence Chromatography™, UPC2®)是SFC技术的革新,在复杂低聚物材料的分离中可提供多种优势。由于超临界二氧化碳与液体相比粘度较低,因此能达到更高的流速,从而实现比LC更短的分析时间。而合相色谱的操作温度比GC低,可用于分析热不稳定材料。此外,与GC相比,UPC2能分离出质量数更高的非挥发性低聚物。还有一个优势是可以使用亚2µm颗粒色谱柱,得到比传统SFC更高的理论塔板数和更好的分离度。当聚合物带有发色基团时,则可使用UV检测。如果需要有关异构体分子量的信息,可以使用质谱仪(MS)进行检测。UPC2可以与UV和MS检测器串联使用。 最简单的聚合物类型是加聚物。加聚物通过单体单元的顺序加和而形成,不会丢失任何分子。缩聚聚合物由两种或多种不同单体发生缩聚反应形成,在该反应中单个分子结合在一起并生成诸如水的副产物。在聚合反应中,单个分子不仅能彼此直线结合,还能形成支化异构体。由于聚合物可形成多种异构体,因此它们的分离和鉴定会特别困难。此外,在聚合条件下还会形成降解产物和副产物,同样也需要对其进行鉴定。聚合物材料的性能会受到异构体和低聚物分布的影响。 在本应用纪要中,我们研究了多种加聚物,如聚苯乙烯(PS)和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA),以评估UPC2的分离范围。然后将得到的信息用于通过MS和UV检测分析的缩聚共聚物,如双酚A甲醛缩聚聚合物(PBAA)和聚[(苯基缩水甘油基醚)-共-甲醛](PGEF)。 实验 样品制备 将所有聚合物样品溶解于四氢呋喃(THF)中,浓度为10 mg/mL。 UPC2条件 系统: 配备PDA和ACQUITY SQD的ACQUITY UPC2 流动相A:CO2 (食品级) 流动相B:0.3%氢氧化铵甲醇溶液 柱温: 60 °C 进样体积:1.0 µL MS电离模式:ESI (+或-,具体取决于样品) MS扫描范围:150 to 2000 m/z 毛细管电压:1 kV 锥孔电压: 25 V 补偿溶剂: 0.3%氢氧化铵甲醇溶液 ABPR: 参见具体样品 流速: 参见具体样品 样品瓶: 12 x 32 mm透明玻璃螺纹颈口样品瓶,容积为2 mL 数据管理: Empower 3 CDS 结果与讨论 使用带亚2µm颗粒度色谱柱的UPC2对多种分子量的聚苯乙烯和PMMA(图1)进行评估。图2显示了三种不同聚苯乙烯的分离。所有PS-1000和PS-1300低聚物的分离都在2.5分钟内完成。但是,PS-2500仅实现了部分分离。随着分子量增大,聚合物的复杂程度也相应增加,以致无法达到基线分离。 如图3所示,与聚苯乙烯相比,PMMA低聚物可以在更高的质量数下得到分离。随着聚合物的平均分子量增加,完全洗脱所需的保留时间也相应增加。UPC2可以分析的聚合物分子量范围取决于样品在CO2中的溶解度、聚合物种类和分析人员能接受的实现分离所需运行时间的长短。高分子量聚合物通常需要使用更高浓度的有机助溶剂来对色谱柱进行洗脱。但是,增加有机助溶剂的浓度也会导致反压的增加。要使反压保持在可接受的范围内需要降低流速,而最终则会造成运行时间的延长。 案例研究1 UPC2在聚合物分析中的作用将在以下两个案例研究中得到体现。第一个案例涉及对双酚A甲醛缩聚共聚物(PBAA)的分析,如图4所示。该共聚物通过将聚双酚A加成到甲醛上而形成,在此过程中会生成水。对PBAA进行分析,观察到预期的二聚体、三聚体以及之后的低聚物峰。然而,在保留时间0.7 min处观察到m/z 227的明显峰形(图5)。聚合物的初始化合物为双酚A和甲醛。m/z 227 (ESI-)对应的是双酚A分子离子[M-H]-。 使用确证标准品通过UV和MS检测对未反应的双酚A进行确证(图6)。双酚A标准品的保留时间与聚合物样品中的未知峰相一致。而且,双酚A的MS谱图也与目标峰的谱图匹配。而甲酸加合物同样出现在质谱图中,也为此提供了额外的佐证。 在本案例中,MS为聚合反应中未参与反应的初始物质提供了有价值的信息。此分析方法可用于反应监测,以确保初始物质的完全利用。 案例研究2 第二个案例涉及对聚[(苯基缩水甘油基醚)-共-甲醛]的分析(图7)。如图8所示,二聚体的各个异构体轻松实现分离。根据起始分子的结构,下一个单元与之结合的可能位置有三个。对于二聚体而言,这意味着样品中可能会存在六种不同的异构体,但只观察到了三种。对于三聚体和之后的低聚物而言,可能的结构则呈指数级增长。本次分离中,一共分离出了七种三聚体。 当查看同一分离的总离子色谱图(TIC)时(图9),在二聚体和三聚体之间观察到额外的峰。观察到的离子簇的m/z比率为404和402。这些质量数可能源于苯基缩水甘油基醚结构的改变,可能是其丢失了一条缩水甘油基醚链抑或醚环发生了开环(图10)。之后包含所述降解单元的低聚物也出现在三聚体和四聚体之间。 由于这些降解异构体在样品中的浓度远低于二聚体和三聚体,因此会被UV检测器忽略。 在本案例中,配备MS检测器的UPC2提供了有关聚合物样品中存在的异构体的详细信息。关于样品中降解产物的数据有助于调整聚合反应条件,防止缩水甘油基醚链的丢失或改变。如有需要,分析人员可以将单个异构体分离出来,并通过结构鉴定方法(如NMR)进行分析以确定键的确切位置。 结论 UPC2/MS是用于鉴定复杂低聚物材料的强大工具。广泛的选择性范围有利于相似化合物的分离,如低聚物的异构体。其它优势还包括适用于极性和非极性聚合物、更低的分析温度和比GC更大的质量数范围。与LC相比,超临界流体流动相的使用可缩短大分子量化合物的保留时间。附加的MS检测能为UV数据提供补充信息,可用于反应监测、单个低聚物的鉴定、杂质测定和配方分析。 参考文献 1. Ibanez E, Senorans FJ. Tuning of mobile and stationary phase polarity for the separation of polar compounds by SFC. J Biochem Biophys Methods. 2000; 43: 25-43. 2. Hoffman BJ, Taylor LT, Rumbelow S, Goff L, Pinkston JD. Separation of derivatized alcohol ethoxylates and propoxylates by low temperature packed column supercritical fluid chromatography using ultraviolet absorbance detection. J Chromatogr A. 2004; 1034: 2007-212. 3. Hanton SD. Mass Spectrometry of Polymers and Polymer Surfaces. Chem Rev. 2001; 101: 527-569. 4. Takahashi K. Polymer analysis by supercritical fluid chromatography. J Bioscience Bioeng. In press, available online 5 March 2013.
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2013.11.06
使用配有ACQUITY QDa质谱检测器的ACQUITY UPLC H-Class系统进行杂质分析的方法开发 Margaret Maziarz 目的 证明在方法开发中,使用配有ACQUITY® QDa™质谱检测器的ACQUITY UPLC® H-Class系统获得的定性质谱数据,可以对盐酸齐拉西酮和相关化合物进行确证。 背景 方法开发通常涉及色谱参数的筛选,例如色谱柱、有机溶剂、缓冲液、梯度曲线、流速和温度等。其中任意一个参数都可以进行优化以改善分离度,从而达到所需的分析质量控制要求。 pH值的细微变化通常会改变化合物在反相分离过程中的相对保留时间(洗脱位置)。研究这些分离变量时,必须追踪样品中每种组分的色谱行为变化。与此同时,还需要鉴定共洗脱物质。 如果无法完整、准确地追踪峰,将会延长方法开发时间,并且可能无法鉴定明显的杂质。此外,对杂质的错误鉴定或鉴定失败都会影响最终药物产品的安全性和疗效。使用质谱检测器可以让分析实验室通过质谱检测技术对峰保留进行正确监测。 ACQUITY QDa质谱检测器通过最大程度减少对标准运行的需求,有利于开发高效耐用的筛选方法,以便根据保留时间对峰进行确证。 在本研究中,我们通过使用一系列不同pH值的流动相,利用ACQUITY QDa检测器所获得的定性质谱数据追踪盐酸齐拉西酮及其USP指定的相关化合物。使用结合Auto•Blend Plus™技术的ACQUITY UPLC® H-Class系统对pH值进行控制,并有助于方法的开发。 解决方案 利用ACQUITY UPLC H-Class系统内置的Auto•Blend Plus技术设定酸性/碱性储备缓冲液与有机/水性溶剂的共混比例,从而获得具有恒定pH值的流动相。使用ACQUITY QDa检测器对盐酸齐拉西酮和相关化合物进行确证。在这项pH筛选研究中,设定不同比例的125 mM甲酸、氢氧化铵储液、乙腈和水,通过四元泵进行混合,分别得到pH值为3.1、4.0和5.0的流动相。表1显示了pH值设置为3.1的Auto•Blend Plus方法。图1显示了pH值对分离盐酸齐拉西酮和相关化合物的影响。 如图1所示,pH值的增加导致所有峰的保留延长。与pH 3.1或5.0相比,pH值为4.0时观察到的峰更少。使用ACQUITY QDa检测器在不同pH值下对方法开发过程中的峰进行追踪和鉴定。 图2展示了利用质谱检测技术追踪洗脱峰的情况。通过质谱分析对峰进行了确证,并且结合UV数据完善了对峰2洗脱顺序的追踪。 概括来讲,ACQUITY QDa检测器是色谱系统的完美补充,可在无需高端质谱仪的情况下为分析科学家快速提供质谱分子信息。最大程度减少对标准品测试的需求,通过保留时间对峰进行确证的方式,简化了方法开发的过程并提高了方法的耐用性。当与可同时处理光学和质谱数据的Empower® 3软件配合使用时,可通过与ACQUITY UPLC PDA检测器数据相同的工作流程查询质谱数据。 总结 在开发用于分离盐酸齐拉西酮及其USP指定杂质的UPLC® 方法过程中,使用ACQUITY QDa检测器追踪样品组分。ACQUITY QDa检测器作为光学数据的补充,具有更高质量的定性质谱数据,从而使用正交检测技术对组分进行确证。 总体而言,配备ACQUITY QDa检测器的ACQUITY UPLC H-Class系统和Auto•Blend Plus技术可实现完整快速的色谱分离以及化合物鉴定,大大简化了实验室药品分析的工作流程。 下载清晰完整应用纪要请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?cid=511436&lid=134766907&xcid=x5606&ref=
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2013.11.05
沃特世ACQUITY QDa新品发布会暨沃特世-华南理工大学国际合作实验室揭幕 【中国 广州-2013年10月25日】沃特世(Waters®)公司在广州南国会国际会议中心隆重举行ACQUITY® QDaTM质谱检测器新品发布会,发布会上同时还进行了沃特世公司与华南理工大学“国际合作实验室”的揭幕式。沃特世公司亚太区及欧洲运营副总裁Mike Harrington先生与华南理工大学生物科学与工程学院谭文院长共同为国际合作实验室的揭幕仪式,沃特世华南区客户代表以及华南理工的老师和学生们共同见证了这一重要时刻。 沃特世公司亚太区及欧洲运营副总裁Mike Harrington先生致辞 沃特世-华南理工大学国际合作实验室成立于2013年年初,目前已引进了沃特世公司的SYNAPT® G2-S飞行时间质谱、nanoACQUITY UPLC®、以压缩CO2为主要流动相的ACQUITY UPC2TM系统、HDX氢氘交换系统以及Xevo® TQ-S三重四极杆质谱仪。联合实验室的构建,将为华南理工大学生物科学与工程学院所承担的多个国家、省和市级科技攻关项目提供技术支撑;并且为在校的学生提供相关的培训。 华南理工大学生物科学与工程学院谭文院长发表讲话 华南理工生物科学与工程学院谭文院长在讲话中对沃特世公司对于华南理工的人才培养所作的贡献表示感谢,并对此次的合作评价道:“沃特世是引领行业发展、具有高端技术的跨国公司;华南理工是享有“工程师摇篮”美誉的985大学。我希望通过今天沃特世-华工国际合作实验室的揭幕仪式,宣传这种校企合作的双赢模式。希望更多的科技型跨国公司能像沃特世公司一样在中国开拓市场谋求发展的同时,也能为中国科技转型和经济发展作出贡献,为人类科学发展培养优秀人才。“ 谭院长和Mike Harrington先生一同为国际联合实验室揭牌 随后,华南理工大学生物科学与工程学院的金亚教授以及周婷博士共同带来了题为《高端液质联用在蛋白相互作用和药代动力学中的应用》的报告,该研究更深地发掘了Xevo TQ-S、SYNAPT G2-S与UPLC®联用在生物样品的定量分析应用中的潜能,并充分展示了Xevo TQ-S、SYNAPT G2-S的高灵敏度及质荷比跨度广等方面在市场同类产品中的竞争优势。 发布会结束后,与会者一同参观了华南理工大学实验室 “沃特世很荣幸与中国的顶尖学府-华南理工大学进行国际合作实验室的构建。” 沃特世公司亚太区及欧洲运营副总裁Mike Harrington先生在参观实验室时说道:“ 沃特世一直专注为分离科学领域提供可靠、耐用的分析仪器,结合我们的行业专家,为推动医疗进步、保护环境、保障我们的食物和水质安全,发明新型材料等研究提供科学、先进的分析方法,因为客户的成功是我们的使命。“ 关于沃特世公司(www.waters.com) 50多年来,沃特世公司(纽约证券交易所代码:WAT)通过提供实用、可持续的创新,使医疗服务、环境管理、食品安全和全球水质监测领域有了显著进步,从而为实验室相关机构创造了业务优势。 作为一系列分离科学、实验室信息管理、质谱分析和热分析技术的开创者,沃特世技术的重大突破和实验室解决方案为客户的成功创造了持久的平台。 2012年沃特世拥有18.4亿美元的收入,它将继续带领全世界的客户探索科学并取得卓越成就。 Waters、ACQUITY、 QDa、ACQUITY UPC2、nanoACQUITY UPLC、SYNAPT、Xevo和UPLC是沃特世公司的商标。 联系人: 叶晓晨 沃特世科技(上海)有限公司 市场服务部 xiao_chen_ye@waters.com 周瑞琳(Grace Chow) 泰信策略(PMC) 020-83569288 13602845427 grace.chow@pmc.com.cn
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2013.10.31
满足未来需求的生物制药QC实验室液相色谱系统:采用ACQUITY UPLC H-Class Bio进行HPLC肽图分析 Eoin F.J. Cosgrave 和 Sean M. McCarthy 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市) 应用优势 ■ 将肽图应用由HPLC向UPLC转移 ■ 满足实验室未来需求的UPLC分析方法 沃特世解决方案 ACQUITY UPLC H-Class Bio系统 XBridge™ BEH C18 130 Å 4.6 x 100 mm, 3.5µm色谱柱(部件号 186003033) MassPREP™ 肽混合物标准品 (部件号 186002337) Empower® 3 软件 关键词 生物制药分析,肽图分析,QC实验室 简介 此应用纪要将描述把生物制药HPLC分离方法转换为UPLC®方法时所执行一系列操作中的第一步。本文将介绍肽图分析方法由四元HPLC系统转移到ACQUITY UPLC® H-Class Bio系统的过程。第一步的目标是在UPLC系统上操作与HPLC完全相同的HPLC检测。此方法使QC实验室能够利用UPLC技术进行传统的HPLC分析,然后将其转换为UPLC分析。检测重现性的改善,以及最终同UPLC技术相结合,都将在后期进行系列讨论。 肽图分析是QC实验室中进行大分子药物日常分析的常用检测法。由于保留时间和选择性受大量试验参数的影响,所以在QC环境中进行肽分离困难重重。因此,鉴于新仪器的检定要求以及为UPLC仪器建立并验证新方法的需求,在QC环境中采用新的分离技术(如UPLC)是一项比较困难的任务。监管机构和药典委员会逐渐认识到UPLC在产品鉴定方面具有优势。同样,监管方针和药典各论正着手拟定用于未来药物应用的新分析要求。因此,生产此类药物的公司处于这种环境压力下,需要开始采用新的分析技术。 作为QC实验室中日常生物制药分析由HPLC转向UPLC技术的第一步,本文将展示一种使ACQUITY UPLC H-Class Bio系统运行传统HPLC肽图分析方法的简化过程。此过程将帮助实验室实现UPLC技术,而无需增加开发、验证和鉴定新UPLC分离方法的额外负担。相比于HPLC仪器获取的等效肽图,在ACQUITY UPLC H-Class Bio系统上运行的HPLC肽图分析能够给出类似的色谱图。借助实验室中建立的UPLC技术,工作的重心即可放在将传统HPLC分析方法转换至UPLC分析方法,而不会对HPLC的分析工作流程造成破坏。然后,用户便可以在未来的合适时间利用之前已检定的仪器,对ACQUITY UPLC H-Class Bio系统进行配置,用于UPLC分离。 下载完整清晰应用纪要请点击:http://www.waters.com/waters/library.htm?locale=122&lid=134727012&cid=511436
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2013.10.30
仪器信息网讯 2013年10月21日,沃特世公司(Waters®)在北京瑞吉酒店举行“ACQUITY QDaTM质谱检测器媒体发布会”,20余家媒体共同见证了这一革命性产品的发布。 媒体见面会现场 沃特世质谱业务运营副总裁Brain Smith,欧洲及亚太区运营副总裁Mike Harrington,沃特世大中华区总裁张亮裕,沃特世中国产品市场发展总监舒放等公司高层出席发布会。 沃特世质谱业务运营副总裁Brian Smith致辞 ACQUITY QDa是沃特世2013年10月7日向全球同步发布的一款专为液相色谱量身打造的质谱检测器,而此次是该款产品在全球范围内的首次落地发布,足以见得沃特世对于中国市场的重视。 Mike Harrington说,“相比沃特世以往的创新产品,ACQUITY QDa是一个全新创新产品,并不是在原有产品或技术基础上的更新,ACQUITY QDa 80%的部件均为全新设计。它的出现将分离科学提高到一个全新维度,并将改变分离科学市场的‘游戏规则’。” 对于这样一款产品,业界都充满了好奇。发布会上,沃特世高层从产品研发背景、研发历程,以及产品性能、应用等全面解读了这款革命性产品。 Brian Smith和Mike Harrington共同为ACQUITY QDa质谱检测器揭幕 研发背景:30年技术积累 谈及ACQUITY QDa研发背景,舒放说,“早在20多年前,沃特世就有一个梦想,有一天液相色谱将配有一台专用的质谱检测器。为了达成这一梦想,1997年,专注于色谱技术的沃特世收购了专注于质谱技术的Micromass®,从此成为真正的‘液相色谱质谱人’。在收购完成7年之后,沃特世推出了最适合质谱仪的超高效液相色谱UPLC®。如今UPLC推出已近10年,但我们发现仅有1/3的UPLC用户配备了质谱仪,另外2/3用户真的不需要质谱?” “在对包括中国用户在内的全球范围内的液相色谱用户的调查后,我们发现,从事方法开发、样品分析、化学合成及纯化的用户每天都会产生大量分离好的样品,但因为需要确认分离结果是否正确,他们或外送测样,或斥巨资购买质谱仪。对于这部分客户,他们非常需要质谱数据,他们的要求是,与现有的液相色谱工作流程及光学检测器相匹配,不易出错,最重要的是操作方便,可以非常容易地获取质谱信息。”舒放说。 沃特世中国产品市场发展总监舒放 沃特世根据用户提出的要求进行有目标的创新,终于在今天推出了专门为液相色谱量身打造的质谱检测器——ACQUITY QDa。 产品性能:37项全新专利和更多正在申请中的专利 可替代80%传统单四极质谱仪的工作 ACQUITY QDa中QDa的英文全称为:Quadrupole Dalton,顾名思义它是一款基于单四极杆的质谱检测器,配备了ESI(电喷雾离子源),质量范围30-1250Da,可达到4个数量级动态范围,可以替代80%的传统单四极杆液质联用仪的工作。最为重要的是ACQUITY QDa操作非常方便,一键启动,用户无需对仪器进行任何参数设置和校正,开机6.5分钟后即可进行样品的定性分析,22分钟后便可进行定量分析。对于困扰用户的质谱仪维护难问题,ACQUITY QDa可以一键开机,即开即用,样品分析完成后即可停机,无需一直保持开机的真空状态。对于易受污染的锥孔,也设计成消耗品,用户可以方便地更换。 在如此小的体积内做到质谱性能没有损失,沃特世也是历经了重重研发挑战。Brain Smith表示,“由于体积的缩小,真空泵系统、离子源等都要特殊设计,这花费了我们不少时间,其中最具挑战的就是小型的ESI离子源设计。此外,ACQUITY QDa获得了37项全新专利和更多正在申请中的专利,在这款产品上,沃特世将遥遥领先竞争对手。” 目前,ACQUITY QDa可适用于沃特世全线液相产品,包括ACQUITY UPLC®、ACQUITY UPC2TM、Alliance® HPLC、SFC以及基于LC的纯化系统。 应用:几乎所有液相方法均可直接适用 那究竟ACQUITY QDa适合于哪些应用?舒放说,“ACQUITY QDa在方法开发、样品分析、合成化学及纯化方面都有很好的应用,可以与现有光谱检测器互补,改善现有分析或纯化系统的性能。”例如,通过使用ACQUITY QDa,分析工作者在开发方法时就可以最大程度减少通过标准品及其保留时间来对样品进行鉴定,并且在相同的分析和工作流程中,对色谱峰成分进行追踪,确认可能的共流出物。对于无紫外吸收、样品紫外峰复杂,或需要高灵敏度的样品,使用ACQUITY QDa可以得到很好的定量分析结果。对于从事合成化学研究的用户,使用ACQUITY QDa都能准确、快速地鉴定合成产品并纯化。 Brain Smith说,“目前大部分的液相分析方法均可以直接适用于ACQUITY QDa,除了某些高盐、高酸碱的体系需要做相应方法调整。”ACQUITY QDa并不是一款万能的检测器,对于不能离子化的样品,它也无能为力,它是现有光谱检测器的补充和扩展。 对于ACQUITY QDa在中国的推广和销售,张亮裕表示,“ACQUITY QDa现在已经可以发货,与沃特世其他质谱仪的交货期相比,它是现货,无需等待。而在技术支持方面,中国的应用工程师和维修工程师在ACQUITY QDa研发阶段就已介入,目前可以对ACQUITY QDa提供完全的技术及应用支持。” 如果要对ACQUITY QDa进行一个总结,就如舒放所言“ACQUITY QDa将成为液相色谱最好的质谱检测器,就像当年UPLC成为质谱仪最好的液相色谱进样器一样。ACQUITY QDa的推出是为了让买得起液相色谱的用户能够买得起质谱;让会使用液相色谱的用户也会使用质谱;让所有有拥有液相色谱的实验室都能够方便地获得质谱数据。今后,用户在选择液相色谱通用检测器时,除了现有的TUV(紫外)和PDA(二极管阵列检测器)之外,又多了一种适用范围更广、灵敏度更高,而操作同样简单的质谱检测器QDa”。 张亮裕、Mike Harrington、Brian Smith答媒体问 (撰稿:杨娟)
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2013.10.28