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《中国药典》2020年版第一增补版 “9405 糖蛋白的糖基化分析指导原则“新增指导原则梳理及应对方

仪器信息网

2024/01/12 16:48

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国家药典委员会发布公告，《中国药典》2020年版第一增补本已编制完成，将于2024年3月12日正式实施。本篇对生物制品新增指导原则中“9405 糖蛋白的糖基化分析指导原则”的相关内容进行梳理，并为广大客户提供岛津的应对方案。下图为指导原则框架。

糖蛋白的糖基化是通过糖基受体、糖基供体和糖基转移酶三类分子的协同作用将单糖或寡糖以糖苷键形式连接在蛋白质的氨基酸残基上，是蛋白质的一种翻译后修饰。本指导原则阐述了糖蛋白糖基化分析的理念、方法及应用和验证的相关要求。图1为糖基化分析的决策框架图。

糖基化分析流程通常为一个多步骤的过程，必要时还需要进行前处理（糖蛋白分离和纯化）以去除干扰因素（如辅料、盐等）。按照完整糖蛋白分析、糖肽分析、寡糖分析、单糖分析等4种不同的互补分析方法，完成糖基化分析的全部流程。糖蛋白N-糖基化和O-糖基化分析流程可参见图2。

下面具体考量几种糖蛋白分析流程和方法。

1完整糖蛋白分析：提供关于糖蛋白糖基化分布等总体信息

1）糖基化分布、分子量：毛细管电泳法、质谱法

2）糖基化导致的蛋白质分子量迁移：聚丙烯酰胺凝胶电泳法、毛细管电泳法

3）蛋白片段糖基化修饰：还原酶解后质谱分析法

4）唾液酸修饰程度：高效液相色谱法、离子色谱法、等电聚焦电泳法、毛细管电泳法

应用案例1：完整糖蛋白分子量分析

2糖肽分析：提供特定糖基化位点的糖基化类型、占有率、寡糖结构信息

1）糖肽富集或分离：反相/亲水高效液相色谱法、毛细管电泳法

2）糖基化位点及糖肽结构：质谱法

3）寡糖分子量、位点占有率：质谱法

应用案例2：糖肽结构分析

3寡糖分析：提供多种寡糖类型的结构以及相对含量的信息

1）非衍生寡糖的分离与分析：高效阴离子色谱法、多孔石墨化碳色谱法、质谱法

2）衍生寡糖的分离与分析：色谱法、毛细管电泳法、质谱法（荧光标记衍生、紫外标记衍生、全甲基化衍生）

应用案例3：2-AB标记的N糖分析

4单糖分析：提供单糖鉴别、含量及单糖组成信息

1）非衍生单糖的分离与定量分析：比色法、高效阴离子色谱法、多孔石墨化碳色谱法、质谱法

2）衍生单糖的分离与定量分析：反相色谱法、离子交换色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、荧光或紫外检测法

应用案例4：抗体中唾液酸测定

中国药典2015版和2020版提出了糖基化的重要性，有部分具体方法，但缺乏糖基化分析指导原则。本新增指导原则从完整糖蛋白分析、糖肽分析、寡糖分析、单糖分析4个方面详细收载了前处理方法及检测方法，指导如何选择适当的方法完成良好的糖基化分析。岛津不断开发新方法，持续推出满足药典指导原则的应用方案。

注：完整应用报告请扫描下方二维码获取。

1台式 MALDI-TOF MS 应用于糖蛋白质分子量测定

2 MALDImini应用于糖肽分析

3利用Q-TOF结合荧光检测器分析2-AB标记N糖

4生物药中寡糖评估方法的介绍

5超高效液相色谱法用于抗体中唾液酸的测定

6 LCMS用于抗体中唾液酸的测定

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