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Waters 717自动进样器
Waters 717自动进样器可作为waters600E四元低压HPLC自动进样部分,也可与waters515、waters1515、waters1525系统配备组合成全自动进样器HPLC系统。如果您实验室用的是其他厂家的HPLC系统想要增购一个自动进样器,那么Waters 717就是您 理想的选择。
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反相色谱柱的使用注意事项 新色谱柱的安装和平衡
使用新色谱柱前需要对色谱柱进行润湿和平衡,注意确保您所使用的流动相和色谱柱储存溶剂“相溶”。Symmetry/Sunfire 反相色谱柱是在 100%乙腈中储存的。
a) 依次用水和乙腈(或甲醇)冲洗液相色谱泵系统中含有缓冲盐的流路,然后将色谱柱按照标签上的箭头方向连接到进样器或保护柱的出口端,标签上的箭头指向检测器流向(先不要接检测器)
b) 在 0.1ml/min 流速条件下用 100%纯甲醇或乙腈冲洗色谱柱,然后在 5 分钟内将流速升至 1 ml/min。
c) 当溶液均匀地从柱子出口流出时,停掉流速,将色谱柱出口端接到检测器上(这样操作可以避免气泡进入检测系统,并且可快速达到基线平衡)
d) 按照步骤 b)的方法逐渐提高流速
e) 当压力达到稳定值并且基线平稳后,缓慢降低流速,停泵
f) 用 5:95 乙腈:水(体积比)冲洗色谱柱 30 分钟【注意流速要从 0.1 ml/min 缓慢上升至 1 ml/min】 g) 换上含有离子对试剂的流动相,对色谱柱进行平衡,直到基线平稳
h) 进标准溶液和样品溶液进行分析
注意: z 至少用 10 倍柱体积的流动相平衡色谱柱直到基线平稳(例如:250×4.6mm 的色谱柱柱体积为 4.2 ml,以 1 ml/min 流速需要平衡 42 分钟)。如果流动相含有离子对试剂,则需要更长的时间进行色谱柱平衡。 z 当改变流动相时,请将新流动相的流速缓慢升高(建议每次 0.1ml/min 的升幅)
说明: z 色谱柱放置一段时间不用后重新使用时,需要重新平衡色谱柱。 z 请定期监测色谱柱的柱效(测试方法:70%乙腈/水,254nm,进样二氢苊进行分析)
色谱柱清洗建议(针对仪器 24 小时运行的情况) 每 8 个小时后,将流动相中乙腈的比例升高至 60%冲洗色谱柱 45 分钟(此时不需要将含有离子对的缓冲盐溶液换成水,保持柱温 45 度)。 每 24 个小时后,对色谱柱进行彻底清洗,先用 5:95 乙腈:水(体积比)冲洗色谱柱 30 分钟,然后用纯乙腈冲洗 60 分钟。
色谱柱的再生 z 保留时间漂移或者分离度发生变化往往说明色谱柱被污染了,用纯 溶剂( 或 甲醇)冲洗色谱柱通常可以洗去污染物。 z 根据样品的干净程度定期更换保护柱,压力逐渐增加或者出现分叉峰往往表明需要更 换保护柱了。如果保护柱更换后问题依然存在,说明色谱柱被强吸附的污染物堵塞, 这时需要选择合适的溶剂来溶解这些污染物,比如,变性蛋白可以通过反复几次进 200μl DMSO 来清洗。 z 如果上述方法还是不能解决问题,可以换用一系列疏水性逐渐增强的溶剂来清洗色谱柱。更换溶剂的顺序可以为:水-四氢呋喃-二氯甲烷-四氢呋喃-水。
色谱柱的保存 避免将色谱柱在含有缓冲盐的流动相中保存,如果流动相中含有缓冲盐,应该先用 10 倍柱 体积的 HPLC 级超纯水(18 M?)冲洗,然后用 100%乙腈冲洗保存,并注意将色谱柱两端 完全密封,以避免柱子“干涸”。
【谱质分析检测技术(上海)有限公司】
谱质分析检测技术(上海)有限公司是位于国内二手分析仪器行业领头狮,二手分析仪器租赁,公司由原厂致力于产品研发的工程师、为客户提供技术支持与销售服务的市场人员和商业 人士组成。在国内二手分析仪器领域不断为用户提供着世界上主流仪器 与服务。
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