合集
标准
方法
手册
讲义
报价单
谱图库
色谱图
质谱图
光谱图
X-射线图
波谱图
显微图
更多
专利
样本
相关软件
用户通讯
招标文件
新冠肺炎
其他
标准查询
今日免费资料
论文索引
您还有
0
次抽奖机会
锤子
您现在的位置:
首页
>
资料中心
>
分析方法/应用文章下载
>
PCR扩增产物的克隆—TA克隆法 下载
PCR扩增产物的克隆—TA克隆法
扫码解锁,免费下载文件
请使用
最新版本仪器信息网APP
扫码登录
步骤:
打开仪器信息网APP并登录 ——》点击APP首页右上角扫一扫 ——》APP端确认解锁 ——》PC端下载文件
免费注册
简介:实验方法原理 TA克隆 系统由Invitrogen公司(San Diego,CA)发展而来的商业性试剂盒,它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3'末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3'T突出端的载体,在连接酶作
简介:实验方法原理 TA克隆 系统由Invitrogen公司(San Diego,CA)发展而来的商业性试剂盒,它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3'末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3'T突出端的载体,在连接酶作用下,可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点(MCS)中。 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组,这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种:T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能,而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性,即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低,一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。 T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步:首先,T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物;然后,酶-ATP复合物再结合到具有5'磷酸基和3'羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化;最hou产生一个新的磷酸二酯键,把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。因为DNA片断有两个端点,所以切割时出现两种可能,一种是单酶切,另一种是双酶切,这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。对于单酶切来说,载体与供体的末端都相同,连接可以在任何末端之间进行,这样就导致了大量的自连接产物。为了减少自环的高本底,可对载体进行5'除磷酸处理,原理是连接酶只能连接DNA片断的3'OH末端与5'端,所以除磷后载体不会自环。一旦有外源片断插入时,由外源片断提供5'端就能与载体进行连接。通过这种方法可大大减少由载体的自环造成的高本底。对于双酶切来说,无论载体与供体同一片段上都有不同的末端,这样就避免了载体与供体的自环,能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。 连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。因此采取折中的温度,即12-16℃,连接12-16h(过夜),这样既可最da限度地发挥连接酶的活性,又兼顾到短暂配对结构的稳定。Taq DNA酶扩增的PCR产物,其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基,可以与pGEM-T Easy Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。
详细>
所需积分:
0 分
所需积分:
0 分
0分
下载次数:3 次
获取积分:页面上方
资料大小: 45 KB
上传人:
admin
上传日期:2019-02-18
收藏资料
(0)
评论
(
0
)
举报
扫码免费下载
立即下载
200份精品资料,免费下载
千种礼品,积分兑换
扫码免费下载
相关阅读
盘点PCR的型号及价格
最全!盘点PCR的型号及价格厂商、品牌汇总
1.18亿!湖北省血站119台(套)医疗设备更新购置清单公布
凯杰计划裁员175人,关闭NeuMoDx PCR检测工厂
热门资料
液相色谱柱维护指南
JBT 2391-2017 500 kg~10 000 kg乘驾式平衡重式叉车.pdf
GBT 20801.6-2020 压力管道规范 工业管道 第6部分:安全防护.pdf
视频Agilent 7500ce原理(英文)_.part3
实验室认可总结
GB∕T 50082-2009 普通混凝土长期性能和耐久性能试验方法标准
应用原子荧光光度计测锑需要注意事项
风淋室验收检测标准包括哪几部分
Waters 液质联用基础知识
《安捷伦气相色谱实操手册》——汇集近20款仪器(仪器信息网整编).pdf
最新资料
薄片镜蛤人工繁育技术规范(征求意见稿).docx
社会单位消防安全“四个能力”建设规范 第8部分:商场市场(征求意见稿).pdf
社会单位消防安全“四个能力”建设规范 第7部分:医院(征求意见稿).pdf
社会单位消防安全“四个能力”建设规范 第6部分:学校(征求意见稿).pdf
社会单位消防安全四个能力建设规范 第5部分:小场所(征求意见稿).pdf
社会单位消防安全四个能力建设规范 第4部分:公共娱乐(征求意见稿).pdf
社会单位消防安全“四个能力”建设规范 第3部分:仓储物流(征求意见稿).pdf
社会单位消防安全“四个能力”建设规范 第2部分:宾馆饭店及餐饮场所(征求意见稿).pdf
DBXM053-2023 地理标志 梅河大米(征求意见稿).pdf
社会单位消防安全“四个能力”建设规范 第1部分:通用基础(征求意见稿).pdf
相关资料
PCR产物快速克隆测序
PCR克隆手册
PCR分子克隆实验引物溶解稀释方法
猪_鸡_鸭Myostatin成熟区段DNA的克隆及其同源性分析
小鼠endostatin基因的克隆与C6鼠脑胶质瘤的治疗
黑曲霉单宁酶TahA的克隆表达和酶学特性解析.pdf
凡纳滨对虾信号转导及转录激活因子(Lv-STAT)基因的克隆及表达特征分析
TSKgel CM-STAT色谱柱对鼠腹水纯化而来的单克隆抗体(IgG1)异构体的高分辨率分析
T/SATA 010—2019冰鲜鳕鱼产品中易与鳕鱼混淆物种检测 ——实时荧光PCR法.pdf
DB22/T 3283-2021 猪血凝性脑脊髓炎病毒检测 TaqMan荧光定量PCR法
最新方案
食品/农产品
环保
制药/生物制药
其他
更多解决方案>>
兽药中含量测试检测方案(液相色谱仪)
应用领域:
水中全氟化合物检测方案(固相萃取仪)
应用领域:
水中全氟化合物检测方案(固相萃取仪)
应用领域:
API 和凝胶胶囊中重金属检测方案(微波消解仪)
应用领域:
相关评论
您的评论:
推荐
发表评论
还可以输入
500
字
品牌合作伙伴
上传资料
一键询价
下载该资料的还下载
带电作业 电绝缘毯
下载 0 次
|
200 积分
|
13287 kb
固定源排放 能源密集型行业温室气体 (GHG) 排放的测定 第3部分
下载 1 次
|
200 积分
|
27058 kb
哈希应用案例---pH值和电导率测试的进展
下载 7 次
|
0 积分
|
31 kb
固体绝缘材料的介电和电阻特性.第3-4部分:电阻特性的测定(直流法).高温下的体积电阻和体积电阻率
下载 6 次
|
200 积分
|
5599 kb
空气和废气监测分析方法4版.pdf
下载 246 次
|
500 积分
|
18558 kb
更多
>>
推荐会议
更多
>>
推荐课程
系统化设计:有机质谱谱图解析课程设计详述
¥0
质谱不神秘导学课
¥0
GC-MS数据处理
¥19.9
热重分析技术与应用体系课
¥169
上传者上传的其他资料
亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)应用方法
缓冲蛋白胨水(BPW)用途
孟加拉红培养基实验原理
玉米粉琼脂使用说明书
帕夏查耳酮标准品,CAS:42438-78-8说明书
L-脯氨酸标准品,CAS:147-85-3鉴别试验
下载排行
本周
本月
全部
1
农村饮用水安全工程——水质监测解
2
气相色谱仪维修手册(故障分析)【P
3
安捷伦GC7890超详细资料
4
计量认证人员职责分配
5
中华人民共和国依法管理的计量器
6
GB/T 2406-2009 氧指数测定方法
7
原子吸收中的干扰及其抑制
1
农村饮用水安全工程——水质监测解
2
气相色谱仪维修手册(故障分析)【P
3
安捷伦GC7890超详细资料
4
计量认证人员职责分配
5
中华人民共和国依法管理的计量器
6
原子吸收中的干扰及其抑制
7
GB/T 2406-2009 氧指数测定方法
1
Q2XXX系列DSC产品介绍
2
研究论文集(理论篇)--论文六:用
3
微波催化有机化学反应机理研究
4
研究论文集(理论篇)--论文七:论
5
LC2000性能测试报告
6
Q系列TMA热机械分析仪 产品介绍
7
epMotion 5075如何出色地完成96
8
环境监测分析实验室的质量管理特
9
物理化学专业工具软件做物化实验
请输入验证码
请输入图中
蓝色的字
免积分下载
确认
输入错误!
仪器信息网资料中心栏目所发布的一切文档、图谱等资源仅限于学习和研究目的,版权归原属作者所有;不得将上述内容用于商业或者非法用途,否则,一切后果请用户自负。您必须在下载后的24个小时之内,从您的电脑中彻底删除上述内容。如果您喜欢该资源,请支持正版,以便得到更好的正版服务。如有侵犯到您的权益,请联系我们(download@instrument.com.cn)处理,感谢您的合作!
安装App资料免费下
资料微服务您的资料助手