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细胞培养过程污染有哪些?
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简介:人为操作污染 空气:操作净化工作台,工作不带口罩,外界气流过强,温度大,含菌 消毒:残留污物 操作:马虎不准确,观念不强 血清:检测不严,支原体和病毒 组织:原代组织有污染,手术中污染,本身是污染组织(溃烂的肿瘤,碘酒消毒后,擦试不净。
简介:人为操作污染 空气:操作净化工作台,工作不带口罩,外界气流过强,温度大,含菌 消毒:残留污物 操作:马虎不准确,观念不强 血清:检测不严,支原体和病毒 组织:原代组织有污染,手术中污染,本身是污染组织(溃烂的肿瘤,碘酒消毒后,擦试不净。可能混入污染) 细胞培养污染对细胞的影响 污染时间短、轻,及时排除,细胞可能恢复,细胞变粗糙,细胞轮廓增强。? 轻:细胞生长缓慢、分裂相; 重:停止增殖,分裂相消失,胞质中出现大量堆积物,细胞变圆,崩溃并从瓶壁脱落。 微生物的污染 (1)支原体:无致死毒性,可与细胞长期共存,对细胞影响潜在。 (2)霉菌 (3)细菌:增殖快,短时间在数量上压过细胞产生毒素杀死细胞。 (4)病毒 (5)真菌:种类繁多,形态各异,呈白色或浅黄色小点,飘浮于培养液面,肉眼可见。 镜下:呈丝状或管状、树枝状丝,纵横交错穿行于细胞间。 (6)支原体:介于细菌与病毒之间,能独立生活的最小微生物无细胞壁,形态多样,0.2um,可通过滤器圆形丝状或梨形,在光镜下很难看清结构。 对青霉素普遍有抗药性。 细胞受到支原体污染后出现以下情况: 严重:细胞增殖缓慢,部分细胞变圆,从瓶壁脱落。 轻:无明显变化,或有微细变化由于传代和换液而缓解观察不够细心或缺乏经验,检查不出。 支原体检测: 相差:油浸下观察,暗色微小颗粒,有类似布朗运动,分布细胞表面和细胞之间。 值注:支原体与线粒体相似,需加以区别支原体染色Carnoy固定。 低张处理地依红:地依红 2g冰醋酸 60ml加水至 100ml染色 15 分钟脱水封固。 光镜:支原体为暗紫色小体,附细胞外或散在细胞之间。 Hoechst33258:为DNA特异结合的荧光探针,支原体DNA能被着色,是检测支原体最方便、有效的一种方法。 染色 10 分钟,漂洗后观察。?醋酸:甲醇(1:3)固定,33258(50 g/ml) 工具:微孔滤膜:能滤除支原体在内的粒子,处理受支原体污染的培养液或血清,但不能去掉附于细胞表面的支原体。 药物:溴尿嘧啶(Bromouracil)支原体的DNA也摄取溴尿嘧啶,用光照射,通过光敏效应杀灭支原体。
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