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简介: GLP-1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知GLP-1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将GLP-1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后
简介: GLP-1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知GLP-1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将GLP-1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中GLP-1的浓度呈比例关系。 操作注意事项 1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。 2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。 3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。 5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 试剂盒性能 1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。 2. 特异性:不与其它细胞因子反应。 3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。 结 果 判 断 与 分 析 1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值 2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的GLP-1标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的GLP-1含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。 3、检测值范围:0-240pmol/L 4、敏感度: 0.1 pmol/L
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