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FTA滤膜用于PCR检测肉中的沙门氏菌
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简介:在采用浮选与溶剂萃取相结合方法的基础上,使用FTA 滤膜从鲜肉中提取沙门氏菌的DNA,消除PCR反应的抑制因子。以沙门氏菌编码吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白的invA 基因为靶基因,经过PCR 扩增得到376bp的产物,经过DNA 测序证实该产物为目的扩增
简介:在采用浮选与溶剂萃取相结合方法的基础上,使用FTA 滤膜从鲜肉中提取沙门氏菌的DNA,消除PCR反应的抑制因子。以沙门氏菌编码吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白的invA 基因为靶基因,经过PCR 扩增得到376bp的产物,经过DNA 测序证实该产物为目的扩增产物。使用FTA 滤膜处理样品,再通过PCR 方法检测沙门氏菌,猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉匀浆液的检出限均为7 × 101CFU/ml,可在6h 内完成对肉中沙门氏菌的检测,比目前普遍采用的先增菌再进行PCR 检测的方法缩短了12~24h。实际检测了72 份样品,同时与GB/T 4789.4 — 2003 方 法做比较,本方法的检出率为27.8%,检出时间为6h;GB/T 4789.4 — 2003 方法检出率为22.2%,检出时间为5d。 结果表明:FTA 滤膜用于PCR 检测肉中沙门氏菌检出率高、耗时短。使用FTA 滤膜法制备模板DNA,为食品中的致病菌快速检测构建了一个技术平台。
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